海藻多糖對(duì)肝癌小鼠抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究

朱正日， 陳愛(ài)東

( 黑龍江省牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院，牡丹江 157011 )

Zhu Zheng-ri, Chen Ai-dong

( Hongqi Hospital of Mudanjiang Medical College, Mndanjiang 157011 )

多糖在細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、衰老和死亡的全過(guò)程中起著十分重要的作用。海藻多糖為天然的活性物質(zhì)，主要是從褐藻、紅藻、藍(lán)藻、綠藻等提取而成。其是一類高分子碳水化合物，通常由不同或者相同的單糖基通過(guò)糖苷鍵相連接而形成，有重要的生物活性和藥用價(jià)值，如增加機(jī)體免疫力、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、抗輻射等。其發(fā)揮作用的基本機(jī)制都是通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)功能而發(fā)揮作用[1]。也有加快損傷的免疫器官修復(fù)過(guò)程，提高免疫細(xì)胞的活性，促進(jìn)抗體、細(xì)胞因子的釋放等。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

昆明小鼠50只，雌雄各半，體重18~22g，由牡丹江醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供。實(shí)驗(yàn)分為5組，每組10只，即空白對(duì)照組、海藻多糖高、中、低劑量組、黃芪多糖組。

1.2 試劑

海藻多糖藥品、H22肝癌細(xì)胞株由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)購(gòu)進(jìn)。IL-2、VEGF、Bcl-2測(cè)定試劑盒(哈爾濱海霞試劑有限公司)。

1.3 主要儀器

電子天平；電熱恒溫水浴鍋(華夏儀器制造廠)；微量移液器(上海易友儀器有限公司)；TD5M-WS型臺(tái)式低速離心機(jī)；全自動(dòng)酶標(biāo)儀-WD-2102A酶標(biāo)儀。

1.4 造模及給藥方法

將H22肝癌細(xì)胞按照一定比例配比，每只小鼠0.2mL，小鼠右腋部皮下接種。接種24h后，分別腹腔注射給藥為海藻多糖高(100mg/kg)、中(50mg/kg)、低(25mg/kg)劑量組，陽(yáng)性組給黃芪多糖100mg/kg，模型對(duì)照組給相同體積的生理鹽水，連續(xù)給藥20d，停藥次日處死。

1.5 ELISA法測(cè)血清中VEGF、IL-2含量

免疫組化法測(cè)瘤組織中Bcl-2基因表達(dá)情況、并且計(jì)算抑瘤率。抑瘤率=(對(duì)照組平均瘤重-治療組平均瘤重)/對(duì)照組平均瘤重×100%。

1.6 數(shù)據(jù)處理

所得數(shù)據(jù)采用SPSS18.0軟件分析，方差分析，兩均數(shù)間t檢驗(yàn)，各組數(shù)據(jù)由`x±s表示，P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

海藻多糖可以提高血清中IL-2含量，減少VEGF含量水平，同時(shí)下調(diào)Bcl-2基因表達(dá)。說(shuō)明海藻多糖對(duì)H22肝癌小鼠腫瘤具有抑制效果，且以中劑量效果最佳。詳見(jiàn)表1，2。

表1 海藻多糖對(duì)小鼠外周血清中IL-2、VEGF及瘤組織Bcl-2基因表達(dá)的影響(`x±s)

表2 海藻多糖對(duì)H22肝癌小鼠瘤重的影響(`x±s)

3 討論

隨著人民生活水平的提高和科技的進(jìn)步，人們對(duì)健康的要求也越來(lái)越高，但始終有一種難以攻克的疾病即癌癥。其中肝癌的發(fā)病率在全球仍然居高不下，我國(guó)每年被它奪走生命的人們也不計(jì)其數(shù)，而癌癥的發(fā)生發(fā)展都和免疫系統(tǒng)功能有關(guān)，現(xiàn)在治療理念基本是研發(fā)的合成西藥或者干擾素等。本研究側(cè)重于能夠提高人體免疫功能的多糖類入手，從免疫學(xué)方面深入研究，目的是能夠發(fā)現(xiàn)機(jī)體的免疫功能及狀態(tài)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)性。

海藻多糖是一類多糖混合物。目前針對(duì)海藻多糖的研究主要集中在其所包含的糖單元及含量層次上。對(duì)機(jī)體免疫器官的調(diào)節(jié)作用是海藻多糖的重要功能。研究表明，海藻多糖具有抗腫瘤的作用，主要作用機(jī)理是其可以激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，從而提高機(jī)體自身的抗腫瘤能力，釋放腫瘤殺傷的生物因子，間接的起到控制腫瘤增長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的效果。免疫系統(tǒng)中T細(xì)胞活化狀態(tài)是由IL-2維持的，其參與T細(xì)胞的活化和增值，促進(jìn)NK細(xì)胞殺傷活性、活化巨噬細(xì)胞等生物學(xué)作用。VEGF具有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、分化、也能夠增加微血管通透性，同時(shí)誘導(dǎo)血管生成，可以被認(rèn)為是促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的重要因子之一[2]。Bcl-2家族是凋亡調(diào)控的重要分子，在腫瘤中Bcl-2家族成員表達(dá)異常，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞能夠逃逸凋亡，保持持續(xù)的增殖能力?？沟蛲龅鞍譈cl-2的高表達(dá)增加腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能，使轉(zhuǎn)移時(shí)間縮短及轉(zhuǎn)移的器官數(shù)增加[3]。

在本實(shí)驗(yàn)中黃芪多糖早已經(jīng)應(yīng)用于抗腫瘤領(lǐng)域中，通過(guò)復(fù)制H22肝癌疾病模型，對(duì)照比較不同劑量對(duì)腫瘤動(dòng)物的體內(nèi)相關(guān)因子檢測(cè)來(lái)進(jìn)一步判斷海藻多糖拮抗癌細(xì)胞增殖的效果，結(jié)果表明各劑量組對(duì)腫瘤都有抑制作用，以中劑量組最為明顯，海藻多糖有增加血清中IL-2的含量減少VEGF水平，降低瘤組織中抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)能力。因此，我們可以得出，該藥物對(duì)肝癌的發(fā)生發(fā)展有一定的影響，希望通過(guò)更多的實(shí)驗(yàn)證實(shí)其具體機(jī)制。

[1] 劉晉, 郭長(zhǎng)江, 劉嘉喜. 海藻多糖免疫調(diào)節(jié)作用的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng), 2007, 05:49-51.

[2] 王永玲, 李冬霞, 高建芝, 李紹山, 黃麗君. VEGF在肥胖患者乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J]. 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2012, 05:544-547.

[3] 錢海利, 王海娟, 林晨. 抗凋亡Bc l-2家族蛋白拮抗分子在腫瘤治療中的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)腫瘤, 2011, 02:100-102.