銀杏葉滴丸對(duì)腦梗死病人p38活性的調(diào)控作用

夏樂敏，費(fèi)雪潔

銀杏葉滴丸對(duì)腦梗死病人p38活性的調(diào)控作用

夏樂敏，費(fèi)雪潔

目的 探討銀杏葉滴丸對(duì)腦梗死病人的治療效果及對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞P38活性的調(diào)控作用。方法 將120例腦梗死病人隨機(jī)分為兩組各60例，治療組采用銀杏葉滴丸治療，對(duì)照組采用基礎(chǔ)治療。比較兩組療效，并測(cè)定p38與p-p38的表達(dá)。結(jié)果 治療組顯效率46.67%，總有效率80.00%，對(duì)照組顯效率33.33%，總有效率50.00%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療組治療后p38、p-p38較治療前顯著下降(P<0.05)，且顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)論 銀杏葉滴丸治療腦梗死療效佳，其機(jī)制可能與調(diào)控p38活性有關(guān)。

腦梗死；銀杏葉滴丸；絲裂原活化蛋白激酶 p38；磷酸化絲裂原活化蛋白激酶 p38；外周血單個(gè)核細(xì)胞

腦梗死是缺血性卒中的總稱，由腦血液供應(yīng)障礙引起腦部病變。發(fā)病機(jī)制為血栓形成或栓塞，其癥狀的性質(zhì)因病變累及的血管不同而異。臨床上銀杏葉滴丸治療腦梗死療效顯著。研究發(fā)現(xiàn)，MAPK家族中的p38 MAPK信號(hào)通路與腦缺血性疾病有著密切的關(guān)系[1]。本研究旨在探討銀杏葉滴丸治療腦梗死病人的療效及對(duì)p38活性的調(diào)控作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月—2014年9月以腦梗死收住入院的120例病人為研究對(duì)象，男63例，女57例。所有病例均符合1995年全國第四屆腦血管病會(huì)議制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)頭顱CT或磁共振成像(MRI)確診，其中基底神經(jīng)節(jié)梗死40例，多發(fā)性腦梗死20例，腦皮質(zhì)梗死30例，丘腦梗死13例，腦栓塞15例，出血性腦梗死2例。腦梗死病人中醫(yī)證型符合中醫(yī)氣虛血瘀型中風(fēng)病診斷標(biāo)準(zhǔn)(由2名以上高年資主治醫(yī)師分型)。采取隨機(jī)、雙肓法分為治療組與對(duì)照組各60例，并按照1995年全國第四次腦血管疾病學(xué)術(shù)會(huì)議上制定的神經(jīng)功能缺損評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[2]評(píng)分，治療組神經(jīng)功能缺損評(píng)分為18.51分±10.56分，既往史積分為9.65分±6.27分，伴發(fā)病積分為8.57分±6.24分；對(duì)照組神經(jīng)功能缺損評(píng)分為16.80分±9.38分，既往史積分為9.56分±6.32分，伴發(fā)病積分為8.26分±7.16分。兩組病人一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 治療方法 兩組基礎(chǔ)治療都予以口服尼莫地平片，每次20 mg，每日3次。如果病人有感染或(和)腦水腫顱內(nèi)壓增高征象者，可給予抗生素和20%甘露醇治療，并根據(jù)病情選擇降糖、降壓等對(duì)癥治療。所有病人均未使用溶栓藥物。治療組除常規(guī)治療外，另予以銀杏葉滴丸(浙江萬邦藥業(yè)股份有限公司)服用。用法用量：口服，一次5丸，一日用3次，一日3次，1個(gè)療程為30 d。兩組病人均要求住院服藥4個(gè)月～6個(gè)月。住院期間囑咐病人家屬定時(shí)給病人翻身、按摩肢體、捶背，保持大便通暢和飲食衛(wèi)生，待病情相對(duì)穩(wěn)定后，囑病人在醫(yī)生的指導(dǎo)下適當(dāng)進(jìn)行功能鍛煉。

1.3 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞p38和p-p38 收集的外周血單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)磷酸鹽緩沖液洗滌2次后，加入細(xì)胞裂解液(150 mmol/L NaCl，20 mmol/L Tris pH7.5，1%Triton X- 100，1 mmol/L EDTA，2.5 mmol/L Na4P2O7，1% Na3VO4，0.5 mg/mL亮抑酸肽，Biosail公司)充分裂解。裂解的產(chǎn)物12000 r/min 離心20 min，并收集上清液。運(yùn)用BCA法測(cè)定總蛋白量。每份樣品中取50 μg 蛋白加入十二烷基磺酸鈉上樣緩沖液(終濃度：1×)混勻，十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(分離膠：10% gel)，電泳條件為80 V 30 min，120 V 2 h。用半干法轉(zhuǎn)印分離的蛋白到聚偏氟乙烯膜。采用Western blot方法根據(jù)試劑盒要求測(cè)定p38含量，一抗按1∶300稀釋，二抗按1∶2 000稀釋，經(jīng)Quantity One圖像分析軟件和CIS Array Analysis陣列分析軟件對(duì)圖中印跡區(qū)進(jìn)行定量分析，以目的蛋白及內(nèi)參蛋白條帶的灰度比值作相對(duì)定量來比較各組間靶蛋白表達(dá)差異。

1.4 療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 依據(jù)1995年全國第4屆腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議通過的標(biāo)準(zhǔn)[3]?；救好绹鴩⑿l(wèi)生院卒中量表評(píng)分(NIHSS)評(píng)分減少91%～100%；顯效：NIHSS評(píng)分減少46%～90%；有效：NIHSS評(píng)分減少19%～45%；無效：NIHSS評(píng)分減少不到18%甚至增加，或病例死亡。于治療前或療程結(jié)束后即行神經(jīng)功能缺損評(píng)分。

2 結(jié) 果

2.1 兩組臨床療效比較 治療組顯效率46.67%，總有效率80.00%，對(duì)照組顯效率33.33%，總有效率50.00%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 兩組臨床療效比較

2.2 兩組治療前后NIHSS評(píng)分比較 治療組治療后NIHSS評(píng)分較治療前顯著下降(P<0.05)；治療組治療后NIHSS評(píng)分顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。詳見表2。

表2 兩組治療前后NIHSS評(píng)分比較(±s) 分

2.3 兩組治療前后p38和p-p38變化 治療組治療后p38相對(duì)表達(dá)量(p-38/GAPDH)、p-p38相對(duì)表達(dá)量(p-p38/GAPDH)較治療前顯著下降(P<0.05)；治療組治療后的p38、p-p38顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。詳見表3、見圖1。

表3 兩組治療前后p38和p-p38變化(±s)

圖1 蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞p38和p-p38結(jié)果

3 討 論

腦梗死是因?yàn)槟X動(dòng)脈粥樣硬化，引起血管內(nèi)膜損傷使腦動(dòng)脈管腔狹窄，進(jìn)而因多種因素使局部血栓形成，導(dǎo)致動(dòng)脈狹窄加重或完全閉塞，使得腦組織缺血、缺氧、壞死，導(dǎo)致神經(jīng)功能障礙的一種腦血管病，是一類神經(jīng)內(nèi)科的多發(fā)病和常見病。

p38是1993年由Brewster等[4]首次發(fā)現(xiàn)，有360個(gè)氨基酸組成的相對(duì)分子質(zhì)量為38 000的蛋白。1994年，Han等[5]從小鼠的肝臟cDNA文庫中篩選出編碼p38 MAPK的基因，成功證實(shí)了Brewster等的研究。Han等后來又發(fā)現(xiàn)了P38常見的4個(gè)異構(gòu)體：p38α、p38β、p38γ、p38δ。p38不同的異構(gòu)體有選擇表達(dá)在不同組織之中：p38α主要表達(dá)于白細(xì)胞與骨髓；p38β高表達(dá)在大腦和心臟；p38γ表達(dá)在骨骼?。籶38δ則富集于肺、胰腺、腎、小腸和睪丸。序列分析研究顯示，p38四種不同的異構(gòu)體的同源性超過了60%[6]。p38可以由細(xì)胞外多種刺激，包括熱休克、射線、紫外線、促炎癥因子、滲透壓應(yīng)激、某些促細(xì)胞分裂劑而被最終激活。缺血、缺氧后，腦損傷可通過一系列信號(hào)途徑轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞核，啟動(dòng)相關(guān)基因表達(dá)，引起神經(jīng)元凋亡。研究表明，缺血、缺氧后腦損傷可激活p38 MAPK信號(hào)途徑，在大鼠局灶性腦缺血再灌注模型中，p38 MAPK持續(xù)活化可誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡[7，8]。目前，P38 MAPK如何調(diào)控細(xì)胞凋亡尚不完全清楚，其機(jī)制非常復(fù)雜[9-13]。

中醫(yī)認(rèn)為，腦梗死屬于“中風(fēng)”范疇，發(fā)病與痰、瘀、虛、火、風(fēng)等因素有關(guān)。血瘀是導(dǎo)致本病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，因此，治療上以活血化瘀為大法。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為，活血能使瘀除腦通新血得生。銀杏葉滴丸主要成分為銀杏葉提取物，有防止血栓形成和抗血小板聚集及對(duì)腦部血液循環(huán)及腦細(xì)胞代謝，有較好的改善及促進(jìn)作用[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，銀杏葉滴丸對(duì)氣虛血瘀型腦梗死有良好療效，且能降低p38活性表達(dá)。臨床上運(yùn)用銀杏葉滴丸治療腦梗死治愈率高，其機(jī)制可能與調(diào)控p38活性有關(guān)。

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(本文編輯 郭懷印)

1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院寶山分院(上海 201999)；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院

費(fèi)雪潔，E-mail：roby_0_0_2000@163.com

R743 R289.5

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10．3969/j．issn．1672-1349．2015．16．028

1672-1349(2015)16-1893-03

2015-06-08)