不同炮制品瑞香狼毒藥材急性毒性試驗(yàn)研究

胡 爽，劉 峰，陳美言

(1.沈陽(yáng)工學(xué)院生命工程學(xué)院，遼寧撫順 113122；2.遼寧格林生物藥業(yè)集團(tuán)有限公司，遼寧沈陽(yáng) 110000 ；3.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，遼寧沈陽(yáng) 110000 )

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不同炮制品瑞香狼毒藥材急性毒性試驗(yàn)研究

胡 爽1，劉 峰2，陳美言3

(1.沈陽(yáng)工學(xué)院生命工程學(xué)院，遼寧撫順 113122；2.遼寧格林生物藥業(yè)集團(tuán)有限公司，遼寧沈陽(yáng) 110000 ；3.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，遼寧沈陽(yáng) 110000 )

[目的]通過(guò)對(duì)瑞香狼毒藥材急性毒性試驗(yàn)的研究，對(duì)瑞香狼毒生品、醋制品和姜礬制品的急性毒性進(jìn)行比較，為瑞香狼毒炮制工藝的規(guī)范化和臨床用藥安全提供試驗(yàn)依據(jù)。[方法]按照經(jīng)典急性毒性試驗(yàn)方法，各組試驗(yàn)連續(xù)觀察10 d，計(jì)算各組動(dòng)物死亡數(shù)，采用Bliss法計(jì)算小鼠的LD50及其95%的可信限。[結(jié)果]瑞香狼毒生品LD50=547.56 mg/kg，其95%的可信限為476.86～625.58 mg/kg；醋制品LD50=689.23 mg/kg，其95%的可信限為546.96～817.22 mg/kg；姜礬制品LD50=976.89 mg/kg，其95%的可信限為826.95～1 134.50 mg/kg。[結(jié)論]瑞香狼毒生品經(jīng)炮制后毒性有所降低，毒性由小到大的排列順序?yàn)榻\制品<醋制品<生品。

瑞香狼毒；炮制品；急性毒性試驗(yàn)

瑞香狼毒其主要的活性成分有黃酮類、二萜類、香豆素類以及木脂素類化合物[1]。文獻(xiàn)資料報(bào)道瑞香狼毒中黃酮類和二萜原酸酯類具有較強(qiáng)的體內(nèi)和體外抗腫瘤作用，同時(shí)也是瑞香狼毒的主要有毒成分[2]。所以，采用適當(dāng)?shù)呐谥品椒梢员苊庥行С煞值膿p失，降低毒性。筆者通過(guò)對(duì)瑞香狼毒藥材急性毒性試驗(yàn)的研究，計(jì)算急性毒性參數(shù)，對(duì)生品、醋制品和姜礬制品的毒性進(jìn)行比較，為瑞香狼毒炮制工藝的規(guī)范化和臨床用藥安全提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)昆明種小鼠，體重18～22 g，雌雄各半，由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，使用許可證號(hào)SCXK(遼)2013-0002。

1.2 試驗(yàn)藥品瑞香狼毒藥材購(gòu)自于內(nèi)蒙古，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)王冰教授鑒定為正品藥材。瑞香狼毒生品、醋制品和姜礬制品的樣品液均自制。

1.3 樣品液的制備精密稱取瑞香狼毒生品、醋制品和姜礬制品的粉末各(過(guò)60目篩)50 g，分別加入95%乙醇500 ml，加熱回流1 h，過(guò)濾，濾液濃縮，蒸干，得干膏，用30%的1，2-丙二醇為溶劑，超聲溶解備用。

1.4 主要儀器與設(shè)備電子分析天平(D432810821)；腹腔注射器等。

1.5 劑量與分組通過(guò)預(yù)試驗(yàn)所得到的全死劑量和全不死劑量，設(shè)定給藥劑量，組距=0.8。同時(shí)設(shè)立溶媒對(duì)照組，即30%的1，2-丙二醇組，以觀察溶劑是否對(duì)小鼠產(chǎn)生影響。給藥劑量分組情況如表1所示。

表1 不同炮制品瑞香狼毒樣品液經(jīng)腹腔注射給藥劑量分組情況

1.6 急性毒性測(cè)定生品組、醋制品組和姜礬制品組中清潔級(jí)小鼠各50只，體重18～22 g，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為5組，每組10只。試驗(yàn)前禁食(不禁水)12 h，采用腹腔注射法，注射劑量0.2 ml/10g。各組連續(xù)觀察10 d，計(jì)算各組動(dòng)物死亡數(shù)，采用Bliss法計(jì)算小鼠的LD50及其95%的可信限。

2 結(jié)果與分析

2.1 瑞香狼毒生品組急性毒性試驗(yàn)由表2可見，按瑞香狼毒生品組劑量等級(jí)1組給藥后，小鼠明顯出現(xiàn)活動(dòng)困難、呼吸急促，死亡時(shí)間短暫，最短時(shí)間約3 min，其余小鼠30 min內(nèi)全部死亡；劑量等級(jí)5組給藥，小鼠死亡率明顯下降，僅有1只小鼠死亡；其他等級(jí)給藥，小鼠明顯活動(dòng)困難，呼吸急促、步態(tài)不穩(wěn)。死亡率按照用藥劑量的降低有所升高。給藥24 h后，未亡小鼠飲食飲水逐漸恢復(fù)正常，存活小鼠產(chǎn)生的毒性反應(yīng)隨時(shí)間慢慢恢復(fù)?？瞻讓?duì)照組和溶媒對(duì)照組未見有小鼠異常反應(yīng)和死亡。

表2 瑞香狼毒生品樣品液經(jīng)腹腔注射給藥后小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

劑量∥mg/kg動(dòng)物數(shù)∥只死亡動(dòng)物數(shù)∥只死亡率∥%900101010072010880576105504611033036910110溶媒對(duì)照組1000空白對(duì)照組1000

2.2 瑞香狼毒醋制品組急性毒性試驗(yàn)表3顯示，按瑞香狼毒醋制品組劑量等級(jí)1組給藥后，小鼠同樣出現(xiàn)活動(dòng)困難、呼吸急促，但死亡時(shí)間延長(zhǎng)，在12 h內(nèi)陸續(xù)死亡，僅有1只小鼠存活；劑量等級(jí)5組給藥，小鼠死亡率下降，僅有2只小鼠死亡；其他等級(jí)給藥，小鼠肌肉痙攣明顯，靜伏少動(dòng)，死亡時(shí)間延長(zhǎng)至48 h?？瞻讓?duì)照組和溶媒對(duì)照組未見有小鼠異常反應(yīng)和死亡。

2.3 瑞香狼毒姜礬制品組急性毒性試驗(yàn)按瑞香狼毒姜礬制品組劑量等級(jí)1組給藥后，小鼠死亡時(shí)間延長(zhǎng)至48 h內(nèi)陸續(xù)死亡，1只小鼠存活；劑量等級(jí)5組給藥，小鼠死亡率下降，僅有1只小鼠死亡；其他等級(jí)給藥，死亡時(shí)間延長(zhǎng)至60 h。

空白對(duì)照組和溶媒對(duì)照組未見有小鼠異常反應(yīng)和死亡(表4)。

表3 瑞香狼毒醋制樣品液經(jīng)腹腔注射給藥后小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

劑量∥mg/kg動(dòng)物數(shù)∥只死亡動(dòng)物數(shù)∥只死亡率∥%12001099096010880768106606141044049210220溶媒對(duì)照組1000空白對(duì)照組1000

表4 瑞香狼毒姜礬制品樣品液經(jīng)腹腔注射給藥后小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

劑量∥mg/kg動(dòng)物數(shù)∥只死亡動(dòng)物數(shù)∥只死亡率∥%1600109901280108801024106608191033065510110溶媒對(duì)照組1000空白對(duì)照組1000

2.4 LD50及其可信限由表5可知，生品LD50=547.56 mg/kg，其95%的可信限為476.86～625.58 mg/kg；醋制品LD50=689.23 mg/kg，其95%的可信限為546.96～817.22mg/kg；姜礬制品LD50=976.89 mg/kg，其95%的可信限為826.95～1 134.50 mg/kg。

表5 瑞香狼毒不同炮制品急性毒性試驗(yàn)LD50的測(cè)定結(jié)果

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明瑞香狼毒經(jīng)炮制后毒性有所降低，毒性由小到大的排列順序?yàn)榻\制品<醋制品<生品，說(shuō)明瑞香狼毒經(jīng)姜礬制后毒性降低的程度優(yōu)于醋制，確實(shí)達(dá)到了降低毒性，提高用藥安全性的作用。

現(xiàn)今文獻(xiàn)報(bào)道中，對(duì)瑞香狼毒生品的藥效藥理、毒性試驗(yàn)報(bào)道的較多，而其醋制品和姜礬制品方面的文獻(xiàn)報(bào)道較少。該試驗(yàn)將其生品和炮制品在急性毒性方面的不同進(jìn)行研究，通過(guò)三者的LD50及LD50的可信限，比較三者毒性強(qiáng)弱順序，對(duì)進(jìn)一步了解炮制作用、闡明炮制機(jī)理具有重要意義。

[1] 王敏.瑞香狼毒總黃酮提取物的抗腫瘤作用[J].中國(guó)中藥雜志，2005，30(8)：603-606.

[2] 湯亞杰，徐小玲，李冬生，等.瑞香狼毒化學(xué)成分與抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J].中成藥，2008，30(7)：21-23.

胡爽(1985-)，女，遼寧錦州人，講師，碩士，從事中藥制劑分析方面研究。

2015-02-12

S 567

A

0517-6611(2015)09-072-01