益肝降脂方預(yù)處理對(duì)酒精性脂肪肝SD大鼠肝臟PKCα表達(dá)的影響

侯珊珊趙遠(yuǎn)紅賈英杰李 正李小江李全征尹紀(jì)紅張小瑞楊彩霞顧宏韜

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津300193；3.天津市中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，天津300120）

益肝降脂方預(yù)處理對(duì)酒精性脂肪肝SD大鼠肝臟PKCα表達(dá)的影響

侯珊珊1趙遠(yuǎn)紅2賈英杰2李 正2李小江2李全征1尹紀(jì)紅1張小瑞1楊彩霞1顧宏韜3

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津300193；3.天津市中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，天津300120）

目的：觀察中藥益肝降脂方預(yù)處理對(duì)酒精性脂肪肝SD大鼠肝臟蛋白激酶Cα（PKCα）基因與蛋白表達(dá)的影響，探討益肝降脂方對(duì)酒精性脂肪肝內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制的誘發(fā)與強(qiáng)化的效應(yīng)。方法：將116只SD大鼠隨機(jī)分為模型組與中藥干預(yù)組，所有大鼠均連續(xù)12周予高脂+酒精灌胃進(jìn)行酒精性脂肪肝造模，中藥組分別于實(shí)驗(yàn)第3周、第6周、第9周起實(shí)施干預(yù)。于實(shí)驗(yàn)6、9、12周末不同時(shí)段宰殺取樣，觀察大鼠的一般情況及肝臟組織病理學(xué)變化以評(píng)價(jià)造模，蛋白免疫印跡法（Western blot）觀測(cè)PKCα蛋白表達(dá)量，RT-PCR法檢測(cè)PKCαmRNA的表達(dá)活性。結(jié)果：HE染色顯示模型組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)改變，肝細(xì)胞索紊亂，肝細(xì)胞呈不同程度的脂肪變性、點(diǎn)狀壞死及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；中藥各干預(yù)組大鼠肝組織脂肪變均較模型組明顯改善。中藥各時(shí)段干預(yù)組大鼠肝組織PKCα蛋白含量與模型組比較均明顯升高，PKCαmRNA的相對(duì)表達(dá)量明顯高于模型組，且PKCαmRNA相對(duì)表達(dá)量隨用藥時(shí)間的先后呈進(jìn)行性降低。結(jié)論：中藥益肝降脂方早期干預(yù)能促進(jìn)PKCα基因和蛋白的表達(dá)，有顯著的藥物預(yù)適應(yīng)作用；益肝降脂方的預(yù)適應(yīng)作用與用藥早晚成正相關(guān)；中藥益肝降脂方防治酒精性脂肪肝的機(jī)制可能與早期促發(fā)內(nèi)源性保護(hù)實(shí)現(xiàn)預(yù)適應(yīng)相關(guān)。

益肝降脂方 酒精性脂肪肝 蛋白激酶Cα 實(shí)驗(yàn)研究

益肝降脂方是我們臨床應(yīng)用多年具有升清降濁解郁功效的經(jīng)驗(yàn)方，能有效調(diào)節(jié)酒精性肝?。ˋLD）的血脂代謝，降酶保肝，改善中醫(yī)癥狀[1]。本課題前期實(shí)驗(yàn)已證實(shí)益肝降脂方具有類抗氧化劑樣效應(yīng)，能起到防護(hù)酒精性脂肪肝 （alcoholic fatty liver，AFL）的作用[2]。蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）屬絲氨酸/蘇氨酸激酶家族中的一種，是細(xì)胞內(nèi)外不同刺激信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，目前由于其在肝細(xì)胞缺血/低氧預(yù)適應(yīng)內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制中的作用而受到人們的廣泛關(guān)注。藥物預(yù)適應(yīng)（pharmacologic preconditioning，PPC）是用藥物模擬缺血預(yù)適應(yīng)中的介質(zhì)，使其產(chǎn)生預(yù)處理效應(yīng)，是減輕缺血再灌注損傷，保護(hù)組織的一種有效方法[3]。中藥具有安全范圍大、不良反應(yīng)小、作用靶點(diǎn)多等優(yōu)點(diǎn)，目前關(guān)于中藥在肝臟預(yù)適應(yīng)保護(hù)作用中的報(bào)道很少，且中藥預(yù)處理的作用機(jī)制復(fù)雜，尚未闡明。本研究在前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)益肝降脂方保肝降脂抗氧化作用的基礎(chǔ)上，嘗試通過不同時(shí)間的干預(yù)造模，觀察PKCα基因和蛋白的表達(dá)，分析中藥復(fù)方預(yù)處理是否誘導(dǎo)或協(xié)助產(chǎn)生預(yù)適應(yīng)樣效應(yīng)，探討PKCα在大鼠酒精性脂肪肝中的表達(dá)以及益肝降脂方對(duì)酒精性脂肪肝的保護(hù)作用是否與誘導(dǎo)促進(jìn)PKCα的表達(dá)有關(guān)，為益肝降脂方防治ALD建立理論基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)成熟雄性SD大鼠116只，（180± 20）g，購(gòu)自中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，合格證：0023015，許可證：SCXK-（軍）2007-004，飼養(yǎng)于天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房。

1.2 藥物 益肝降脂方藥（黃芪∶葛根∶丹參∶蘇葉∶黃連∶水紅花子=2∶3∶1∶1.3∶0.8∶2）由本院制劑室按比例規(guī)范制備成中藥浸膏（含生藥1.33g/mL）。

1.3 試劑 PKC鼠抗人單克隆抗體（sc-8393）購(gòu)自Santa Cruz公司，山羊抗小鼠IgG（ZB2305）、山羊抗兔IgG（ZB2301）、β-actin鼠抗人單克隆抗體 （TA-09）均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，組織蛋白抽提試劑盒 （BSP003）、高靈敏ECL發(fā)光試劑盒（PW044）購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司，BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（PC0020）、麗春紅染色試劑（P0012）、PVDF膜（ISEQ00010）、Western blot封閉液Ⅱ （奶粉，pH7.5）（PC0020）、TBS（pH8.0，20×）（T1080）、SDS-PAGE上樣緩沖液 （還原，4×）（P1015）均購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司，Western Show預(yù)染蛋白Marker（sm0671）由Thermo提供。高脂飼料（1%膽固醇，10%豬油，0.3%膽酸鈉，8%蛋黃粉，80.7%基礎(chǔ)飼料）由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所提供；體積分?jǐn)?shù)56%牛欄山二鍋頭白酒（北京順鑫農(nóng)業(yè)股份有限公司）。

1.4 主要儀器 分光光度計(jì) （上海722RS型），LAUDA-C3型循環(huán)恒溫水浴箱 （泰克儀器有限公司），光學(xué)顯微鏡 （日本OLYMPUS公司），Mini-PROTEAN Tetra Electrophoresis System（BIO-RAD USA），BIO-RAD ChemiDoc XRS凝膠成像系統(tǒng)（BIO-RAD USA），Powerpac Basic電泳儀 （BIORAD USA），溫控?fù)u床（New Brunswich USA），ABI Stepone plus型熒光定量PCR儀。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組 在完成前期綜合評(píng)價(jià)益肝降脂方對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠酒精性脂肪肝的藥效學(xué)研究后，本實(shí)驗(yàn)參照前期造模成功實(shí)驗(yàn)結(jié)合本期研究目的未設(shè)立正常對(duì)照組[4]，將116只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為模型組22只，中藥干預(yù)組94只（其中第3周干預(yù)組35只，第6周干預(yù)組31只，第9周干預(yù)組28只），飼養(yǎng)溫度18～22℃，相對(duì)濕度40%～70%。

2.2 造模與給藥 連續(xù)12周予SD大鼠高脂+酒精梯度灌胃進(jìn)行酒精性脂肪肝造模，酒精劑量為1.5mL/100g，按每周測(cè)得體重每日早晚灌胃2次（時(shí)間間隔8h以上），酒精體積分?jǐn)?shù)初起為40%（4.8g·kg-1·d-1）并持續(xù)至第4周末，后增加至45%（5.4g·kg-1·d-1）至第8周末，第9周開始增加至50%（6.0g·kg-1·d-1）持續(xù)到12周末實(shí)驗(yàn)結(jié)束（適應(yīng)性飼養(yǎng)不計(jì)入實(shí)驗(yàn)周）。酒精性脂肪肝造模的同時(shí)，中藥干預(yù)組按藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)計(jì)算[5]，分別于第3周、第6周及第9周開始，酒精灌胃0.5h后，分別灌服中藥浸膏2mL，2次/d。

2.3 取材 分別于實(shí)驗(yàn)第6周、9周、12周末隨機(jī)抽取各組大鼠數(shù)只，前1d禁食12h，自由飲水，于第2天稱重后乙醚麻醉，目?jī)?nèi)眥取血后，3000r/min離心10min，分離血清，4℃冷藏。取血后迅速解剖，取下肝臟，在肝右葉部分距邊緣5mm處取0.8cm× 0.8cm×0.8cm大小肝組織2塊，分別放入潔凈的EP管中密封，-80℃冷藏；取肝左葉組織大小約1.0cm× 0.3cm×0.3cm一塊，浸泡于4%多聚甲醛中固定，切片行HE染色后，在顯微鏡下觀察肝組織的脂肪變、炎癥活動(dòng)以及纖維化情況。

2.4 觀察及指標(biāo)測(cè)定方法

2.4.1 動(dòng)物表現(xiàn) 每周測(cè)體重1次，每日觀察并記錄各組大鼠的精神、皮毛光澤、進(jìn)食、大小便及飲酒情況。

2.4.2 內(nèi)源性保護(hù)的媒介物質(zhì)PKCα測(cè)定

2.4.2.1 蛋白免疫印跡法（Western blot）測(cè)定肝組織PKCα蛋白的表達(dá) 提取肝組織中總蛋白，按照BCA蛋白定量試劑盒說明書進(jìn)行蛋白定量，根據(jù)SDS-PAGE上樣量需要，取適量樣品加入4×loading buffer后，100℃煮沸變性5min。濃縮膠恒壓80V，約40min；分離膠恒壓120V，電泳至溴酚藍(lán)到凝膠底部。設(shè)置恒流300mA，冰浴轉(zhuǎn)膜2h。轉(zhuǎn)膜后用麗春紅染色試劑對(duì)膜染色，觀察轉(zhuǎn)膜效果。將膜浸沒在Western blot封閉液Ⅱ（TBST溶解的5%脫脂奶粉，pH7.5）中室溫輕搖90min（封閉液須覆蓋整張膜，且膜在其中能夠搖動(dòng)為宜）。用Western blot封閉液Ⅱ稀釋一抗，室溫孵育30min，放4℃過夜，TBST洗膜7次。用Western blot封閉液Ⅱ稀釋二抗，目的蛋白用羊抗鼠-HRP 1∶10000或羊抗兔-HRP 1∶10000（根據(jù)一抗進(jìn)行選擇）室溫孵育60min，TBST洗膜7次；內(nèi)參用羊抗鼠 β-Actin 1∶1000，室溫孵育30min，放 4℃過夜，洗膜 7遍，再加羊抗鼠-HRP 1∶10000二抗，室溫孵育60min，洗膜7次。分別用ECL試劑盒顯色，暗室顯影。用KS400圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行灰度掃描，目的條帶的光密度值與相應(yīng)內(nèi)參照β-actin的光密度比值即為目的蛋白表達(dá)的相對(duì)表達(dá)值。

2.4.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)肝臟PKCαmRNA的表達(dá) 使用Trizol法提取肝臟組織總RNA，電泳檢測(cè)提取RNA的完整性，參照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，收集cDNA-20℃保存，參照UItraSYBR二步法熒光定量PCR試劑盒進(jìn)行熒光定量PCR，以GAPDH為內(nèi)參基因，相同模板相同基因設(shè)3復(fù)孔，3次平行實(shí)驗(yàn)，得到各擴(kuò)增反應(yīng)的CT值。引物序列由Primer Premier5.0軟件在線設(shè)計(jì)，管家基因（GAPDH）引物序列——F：CAAGTTCAACG鄄GCACAGTCAA，R：CGCCAGTAGACTCCACGACA，產(chǎn)物長(zhǎng)度為140bp；PKCα引物為——F：CAGTGC鄄CAAGTTTGCTGTTTT，R：ATCAGTGTCAGGTCCCT鄄TATCC，產(chǎn)物長(zhǎng)度為93bp。PCR反應(yīng)條件：95℃2min，95℃ 10s，60℃ 40s，40個(gè)循環(huán)。

2.4.3 肝臟組織病理形態(tài)學(xué)觀察 肉眼觀察肝臟的大小、顏色、質(zhì)地等外觀情況，取小塊用4%多聚甲醛固定的肝組織，經(jīng)過酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片，HE染色封片后，在光學(xué)顯微鏡下觀察組織結(jié)構(gòu)及肝臟細(xì)胞脂肪變性及炎癥浸潤(rùn)程度，病理組織學(xué)診斷參考《酒精性肝病診療指南》[6]。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料結(jié)果以（±s）表示，計(jì)量資料選用多樣本單因素方差分析，等級(jí)資料選用秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，116只大鼠共死亡16只，其中模型組9只，第3周干預(yù)組2只，第6周干預(yù)組3只，第9周干預(yù)組2只。死因經(jīng)術(shù)后病理解剖證實(shí)，主要為灌胃不當(dāng)或反復(fù)酒精灌胃后返流入食道吸入肺部誤入氣管所致。

3.1 各組大鼠一般情況 初期各組大鼠精神狀況正常，皮毛光澤，飲食正常；灌酒后約15min后均出現(xiàn)行動(dòng)遲緩、不同程度嗜睡、喜臥的狀態(tài)；隨造模時(shí)間延長(zhǎng)，模型組大鼠皮毛干枯蓬亂、無光澤，易激惹，食量減少，大便偏稀，中藥組大鼠皮毛蓬亂、欠光澤，易激惹，但程度明顯輕于模型組，大便偏軟色深呈黑色，灌酒后行動(dòng)遲緩，但少見嗜睡或嗜睡時(shí)間較模型組大鼠縮短。

3.2 PKCα蛋白在各組中的表達(dá)情況 Western Blot結(jié)果顯示，與模型組相比，中藥干預(yù)組大鼠肝臟PKCα蛋白表達(dá)水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且第3周干預(yù)組與第6周干預(yù)組、第9周干預(yù)組比較明顯升高（P＜0.05），中藥干預(yù)組PKCα蛋白表達(dá)水平隨開始用藥時(shí)間的延遲呈進(jìn)行性下降。見圖1。

3.3 各組大鼠PKCαmRNA的水平變化 中藥各干預(yù)組PKCαmRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著高于模型組（均P＜0.05），且中藥各干預(yù)組之間比較也存在明顯差異（均P＜0.05）。PKCαmRNA相對(duì)表達(dá)量在中藥各干預(yù)組中隨開始用藥時(shí)間的延遲呈進(jìn)行性下降。見圖2。

圖1 益肝降脂方對(duì)SD大鼠肝臟PKCα蛋白表達(dá)的影響

圖2 各組大鼠肝臟PKCαmRNA的表達(dá)

3.4 各組大鼠肝臟病理情況 肉眼觀察：模型組大鼠肝臟色澤較正常肝臟色暗淡，表面粗糙，表面及切面呈灰黃色或布有白色脂肪斑點(diǎn)，質(zhì)地較脆韌，被膜與周圍組織粘連，包膜緊張，邊緣鈍而厚；中藥干預(yù)組大鼠肝臟呈紅褐色，質(zhì)地稍軟，肝臟薄膜與周圍組織有輕度粘連，邊緣稍鈍。

HE染色后光鏡下觀察，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí) （12周末）各組病理形態(tài)表現(xiàn)——模型組：肝小葉結(jié)構(gòu)改變，肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大小不等的脂滴，細(xì)胞胞質(zhì)呈現(xiàn)空泡狀，可見F3-4級(jí)脂肪變，肝竇略狹窄，病變以中央靜脈周圍最明顯，匯管區(qū)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，散在點(diǎn)狀壞死，個(gè)別標(biāo)本肝血竇周圍可見纖維組織輕度增生。第3周干預(yù)組（用藥9周）：肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞邊界較清，中度水樣變性，大鼠肝組織多表現(xiàn)為F1-2級(jí)脂肪變，匯管區(qū)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肝小葉內(nèi)偶見點(diǎn)狀壞死，未見纖維化和肝硬化形成。第6周干預(yù)組（用藥6周）：肝小葉結(jié)構(gòu)較規(guī)則，可見肝細(xì)胞體積增大，肝血竇變窄，多見混合型的脂肪變性，可見少量嗜酸性變、點(diǎn)狀壞死，匯管區(qū)可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維增生。第9周干預(yù)組（用藥3周）：肝小葉結(jié)構(gòu)不規(guī)則，肝細(xì)胞體積增大，胞質(zhì)淡染，染色質(zhì)呈顆粒狀，甚至呈氣球樣變，肝血竇變窄，可見廣泛的混合型脂肪變性，中央靜脈周圍散在點(diǎn)狀壞死，匯管區(qū)可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維增生。見圖3。

圖3 各組大鼠肝臟病理組織學(xué)變化（HE，×100）

4 討論

蛋白激酶C（PKC）是細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的重要物質(zhì)，其PKCα為經(jīng)典型PKC，主要存在于胞質(zhì)中，以Ca2+依賴形式從胞質(zhì)中轉(zhuǎn)位到細(xì)胞膜上而被激活[7]，并導(dǎo)致一系列信號(hào)通路的開放，是重要的第二信使。研究發(fā)現(xiàn)在預(yù)處理對(duì)人肝細(xì)胞的保護(hù)作用中，PKC通路激活和預(yù)處理導(dǎo)致細(xì)胞保護(hù)作用是密切相關(guān)的，PKC的激活參與了細(xì)胞保護(hù)[8]。本研究在建立酒精性脂肪肝大鼠模型的同時(shí)予以中藥益肝降脂方不同時(shí)間點(diǎn)干預(yù)，觀察比較PKCα基因和蛋白在各組大鼠肝臟中的表達(dá)，探討益肝降脂方是否具有預(yù)適應(yīng)樣效應(yīng)。

藥物預(yù)適應(yīng)是指通過藥物激發(fā)或模擬機(jī)體內(nèi)源性物質(zhì)，而呈現(xiàn)的保護(hù)作用。藥物預(yù)處理的研究是基于對(duì)缺血預(yù)處理（IPC）保護(hù)機(jī)制的理解，因其可以有效避免IPC的有創(chuàng)性損傷，簡(jiǎn)單易行，且便于控制劑量，目前已引起普遍關(guān)注，且具有廣泛的臨床應(yīng)用價(jià)值。預(yù)適應(yīng)樣保護(hù)的信號(hào)傳導(dǎo)路徑分三個(gè)環(huán)節(jié)：觸發(fā)物質(zhì)—中介物質(zhì)—效應(yīng)物質(zhì)[9]。觸發(fā)物質(zhì)主要是指預(yù)處理性短暫缺血時(shí)機(jī)體釋放的內(nèi)源性活性物質(zhì)，在受體水平發(fā)揮調(diào)節(jié)作用；中介物質(zhì)以受體后多種蛋白激酶為主；效應(yīng)物質(zhì)主要包括產(chǎn)生終末效應(yīng)的細(xì)胞保護(hù)蛋白和離子通道。PKC通路激活在預(yù)適應(yīng)保護(hù)信號(hào)傳導(dǎo)通路中發(fā)揮重要作用，是下游效應(yīng)物質(zhì)發(fā)揮延遲保護(hù)作用的前提。

本研究采用高脂飲食聯(lián)合酒精灌胃法成功誘導(dǎo)SD大鼠AFLD模型，并以中醫(yī)不同時(shí)間點(diǎn)的干預(yù)模擬藥物預(yù)處理方式，結(jié)果肝臟組織病理學(xué)顯示，益肝降脂方各干預(yù)組肝臟組織改變較模型組輕，兩者存在差異。通過蛋白免疫印跡可以看出，中藥干預(yù)組大鼠肝組織PKCα蛋白較模型組高表達(dá)，且用藥越早，蛋白表達(dá)相對(duì)越多，各組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。 各組大鼠肝臟中PKCαmRNA的表達(dá)結(jié)果顯示，中藥干預(yù)組PKCαmRNA的相對(duì)表達(dá)量明顯高于模型組，兩者存在顯著性差異 （P＜0.05）；中藥各干預(yù)組組間比較，第3周干預(yù)組PKCαmRNA表達(dá)水平高于第6周干預(yù)組（P＜0.05），第6周干預(yù)組PKCαmRNA表達(dá)水平高于第9周干預(yù)組（P＜0.05）。可見PKCα蛋白和mRNA的表達(dá)隨用藥時(shí)間的先后，其表達(dá)量逐漸降低，PKCα蛋白和基因的表達(dá)與中藥干預(yù)時(shí)間的早晚呈正相關(guān)，表現(xiàn)出明顯的時(shí)、效一致趨勢(shì)。推測(cè)針對(duì)酒精性脂肪肝早期予益肝降脂方干預(yù)，能促進(jìn)內(nèi)源性保護(hù)媒介物之一PKCα蛋白和基因的表達(dá)，從而誘導(dǎo)出預(yù)適應(yīng)樣效應(yīng)，PKCα可能參與了益肝降脂方對(duì)酒精性脂肪肝的保護(hù)作用。

總之，PKCα是應(yīng)激性肝損傷時(shí)內(nèi)源性保護(hù)信號(hào)傳導(dǎo)路徑的關(guān)鍵物質(zhì)，益肝降脂方不同時(shí)間干預(yù)可影響酒精性脂肪肝SD大鼠肝組織中PKCαmRNA和蛋白的表達(dá)，中藥用藥越早PKCα蛋白及mRNA表達(dá)越強(qiáng)，其防治酒精性脂肪肝的機(jī)制可能與早期促發(fā)內(nèi)源性保護(hù)實(shí)現(xiàn)預(yù)適應(yīng)相關(guān)。

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R575.505

A

1672-397X（2015）01-0070-04

侯珊珊（1989-），女，碩士研究生，研究方向：中醫(yī)內(nèi)科學(xué)腫瘤方向。

趙遠(yuǎn)紅，yuanhongzh98@163.com

2014-06-04

編輯：吳 寧

天津市應(yīng)用基礎(chǔ)及前沿技術(shù)重點(diǎn)項(xiàng)目（11JCZDJC19900）