133 例霍奇金淋巴瘤中EBERs 表達(dá)與臨床分期、療效相關(guān)性分析

胡利娟 鐘 茜 胡小山 聶 豪 周 旻

霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’s Lymphoma，HL)，是發(fā)生于淋巴組織的惡性腫瘤，與非霍奇金淋巴瘤(NHL)統(tǒng)稱(chēng)為惡性淋巴瘤。HL 是西方國(guó)家中最常見(jiàn)的腫瘤之一，其發(fā)病率高達(dá)每年3/100 000，以青年人居多，在我國(guó)約占所有淋巴瘤的10%。其病理組織學(xué)特征表現(xiàn)為正常淋巴組織結(jié)構(gòu)破壞、多種反應(yīng)性細(xì)胞浸潤(rùn)的背景中散在特征性Reed -Sternberg 細(xì)胞(RS 細(xì)胞)及其變異型。隨著多藥物化療和/或放療技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，HL 的治療率高達(dá)80% ～90%［1］。然而，晚期患者預(yù)后仍然不理想，存在難治性、治療后復(fù)發(fā)，尤其是自體干細(xì)胞移植后復(fù)發(fā)患者的中位生存時(shí)間很少超過(guò)3 年。因此，需要我們繼續(xù)尋找新的治療靶點(diǎn)，準(zhǔn)確評(píng)估其預(yù)后。EBV 感染與約40%霍奇金淋巴瘤(HL)的發(fā)病相關(guān)，EBV 表達(dá)的非編碼RNA(EBERs)部分HL 中表達(dá)，但其功能和機(jī)制并不清楚。

本研究收集了我院2000 ～2013 年期間133 例霍奇金淋巴瘤(HL)患者的石蠟組織標(biāo)本以及詳細(xì)的臨床資料，進(jìn)行了EBERs 原位雜交染色，并根據(jù)染色情況針對(duì)HL 的臨床分期和療效進(jìn)行了初步分析，并報(bào)告如下:

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集2000 年1 月～2013 年12 月之間在中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院住院，并經(jīng)病理學(xué)及免疫組化檢查確診的霍奇金淋巴瘤133 例，男96 例，女37 例，男∶女=2.6∶1;發(fā)病年齡3 ～75 歲，中位發(fā)病年齡為39.0 歲;其中Ⅰ期20 例，Ⅱ期52 例，Ⅲ期41 例，Ⅳ期20 例。

1.2 診斷及分期方法

淺表淋巴結(jié)采用活檢手術(shù)切取，腹腔淋巴結(jié)采用粗針穿刺或手術(shù)切除活檢。病理學(xué)診斷包括HE 染色、免疫組化檢查。分期基本檢查包括:頭頸部、胸部、腹部CT 或全身PET/CT，骨髓細(xì)胞學(xué)檢查。按Ann Arbor 分期系統(tǒng)分期。

1.3 治療方法及療效評(píng)價(jià)

所有患者用ABVD 方案化療4 ～6 個(gè)療程，即阿霉素(ADM)20 mg/m2、靜脈滴注、第1 和第15 天，博來(lái)霉素(BLM)10 mg/m2、靜脈滴注、第1 和第15 天，長(zhǎng)春堿(VLB)6 mg/m2靜脈滴注、第1 和第15 天，達(dá)卡巴嗪(DTIC)375 mg/m2、第1 和第15 天，28 d 為一個(gè)周期。療效評(píng)價(jià)采用WHO 標(biāo)準(zhǔn)，即完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、疾病穩(wěn)定(SD)、疾病進(jìn)展(PD)或復(fù)發(fā)、死亡。其中CR+PR 為總有效(OR)，SD、PD、復(fù)發(fā)、死亡為無(wú)效。

1.4 EBERs 原位雜交染色

使用EBER 原位雜交試劑盒(ISH5022，中杉金橋生物技術(shù)有限公司)，具體步驟參考試劑盒說(shuō)明書(shū)。染色陽(yáng)性率計(jì)算:每例標(biāo)本中EBERs 陽(yáng)性的腫瘤細(xì)胞占所有腫瘤的百分比。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

分別計(jì)算各組患者化療的有效率(ORR)。采用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，統(tǒng)計(jì)描述資料分析采用卡方檢驗(yàn)或Fisher 精確檢驗(yàn)。P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 EBERs 表達(dá)與HL 臨床分期的相關(guān)性分析

133 例霍奇金淋巴瘤患者的石蠟切片進(jìn)行EBERs 原位雜交染色，結(jié)果發(fā)現(xiàn)52 例為EBERs 陽(yáng)性，陽(yáng)性率為39%(52/133)，從染色結(jié)果看，陽(yáng)性病例中的EBERs 的表達(dá)率高低不同(見(jiàn)圖1)，結(jié)合患者的臨床分期，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)EBERs 的陽(yáng)性率和臨床分期呈正相關(guān)性(r =0.3150，P =0.000 2)，見(jiàn)圖2。提示EBERs 表達(dá)高的患者臨床分期較晚。

2.2 EBV 感染對(duì)HL 化療療效的影響

133 例HL 患者中，EBV 陽(yáng)性的患者52 例，化療有效為24 例，總有效率為46.2%(24/52);EBV 陰性患者81 例，化療有效54 例，總有效率為66.7%(54/81)，后者高于前者，經(jīng)卡方檢驗(yàn)后，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.495，P =0.019 1)，見(jiàn)圖3。

圖1 不同霍奇金淋巴瘤標(biāo)本中EBERs 表達(dá)的陽(yáng)性率不同

圖2 霍奇金淋巴瘤中EBERs 的表達(dá)與臨床分期呈正相關(guān)

圖3 EBV 陽(yáng)性組化療有效率低于陰性組

3 討論

EBV 在EBV 陽(yáng)性的霍奇金淋巴瘤病例中的重要作用逐步得到證實(shí)。首先，HRS 細(xì)胞中很多受體酪氨酸激酶的表達(dá)和EBV 之間存在反比關(guān)系［2］。其次，體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)EBV 解救殘缺的生發(fā)中心B 細(xì)胞從而避免凋亡［3-5］。西方國(guó)家中，約40%的經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤的HRS 細(xì)胞中含有EBV［6］，在中美和南美洲兒童霍奇金淋巴瘤的EBV 感染率高達(dá)90%，AIDS 患者的HRS 細(xì)胞中EBV 達(dá)100%［7］。在EBV(+ )HRS 細(xì)胞中表達(dá)三個(gè)病毒蛋白(EBNA1、LMP1、LMP2A)和兩個(gè)非編碼RNAs(BARTs 和EBERs)。EBNA1 幾乎表達(dá)于所有的EBV 感染的細(xì)胞中，與EBV 基因組的復(fù)制和維持病毒顆粒的穩(wěn)定性有關(guān)。EBNA1 可以上調(diào)CCL20 從而吸引調(diào)控的T 細(xì)胞(T Reg)以及下調(diào)抑癌基因蛋白酪氨酸磷酸酶- k，從而參與霍奇金淋巴瘤的發(fā)?。?-9］。癌基因LMP1 轉(zhuǎn)化的裸鼠可以發(fā)生B 細(xì)胞淋巴瘤。膜蛋白LMP1 模擬CD40 受體，激活NF -kB 信號(hào)通路［10］。此外，在HRS 細(xì)胞中，EBV 與TNFAIP3 突變之間存在反比關(guān)系，提示EBV 在促進(jìn)TNFAIP3 突變的機(jī)制中發(fā)揮重要作用。

由上可見(jiàn)，EBV 感染在HL 的發(fā)病過(guò)程中起到重要作用，而EBERs 的表達(dá)是否在HL 的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用、以及對(duì)于HL 的治療產(chǎn)生什么影響尚不清楚。我們收集的病例中進(jìn)行EBERs 原位雜交染色，發(fā)現(xiàn)不同的病例其陽(yáng)性率是不同的，因此聯(lián)合HL 的臨床分期急性相關(guān)性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)EBERs 的表達(dá)和臨床分期呈正相關(guān);此外，將EBV 感染是否陽(yáng)性進(jìn)行分組，分別分析其化療總有效率，發(fā)現(xiàn)和EBV 陰性患者相比，EBV 陽(yáng)性的患者化療總有效率較低，提示EBERs 可以作為霍奇金淋巴瘤患者的獨(dú)立預(yù)后因素。但是EBERs 在HL 的發(fā)病過(guò)程中具體的功能和分子機(jī)制，尚需要進(jìn)一步研究。

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