蛇足石杉的藥學(xué)研究進(jìn)展

蔡龔莉，方 帥，張起輝

重慶大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院藥學(xué)系，重慶 400044

蛇足石杉Huperzia serrata (Thunb.ex Murray)Trev，又名千層塔、蛇足草、寶塔草、千金蟲，民間主要用于治療跌打損傷、瘀血腫痛、內(nèi)傷出血、腫癰疔毒、毒蟲叮咬、燒傷燙傷等癥［1］，其在世界范圍內(nèi)均有散在分布，資源有限，且近年來，隨著研究的不斷深入，人們加強(qiáng)了對其的開發(fā)和利用，因此其種群遭到了嚴(yán)重的破壞，野生資源將無法滿足醫(yī)療需求［2］。吳葒［3］等調(diào)查發(fā)現(xiàn)，我國的蛇足石杉資源系散在分布，且多位于自然保護(hù)區(qū)和風(fēng)景區(qū)范圍內(nèi)，不宜規(guī)?；烧?。因此，欲解決藥源的問題，唯有尋求更加科學(xué)的，更加合理的方法。蛇足石杉因具有顯著的藥用價值而備受關(guān)注，各國研發(fā)人員對其進(jìn)行了深入而廣泛的研究。其主要成分石杉堿甲是強(qiáng)效的膽堿酯酶抑制劑，臨床試驗已證實石杉堿甲對治療重癥肌無力和阿爾茨海默病具有很好的療效，且其制劑——哈伯因已在國內(nèi)上市，主要用于治療老年人記憶減退和早年癡呆等。

本文將對蛇足石杉的相關(guān)研究內(nèi)容進(jìn)行綜述，邏輯順序為:有效成分——藥理活性——分析和分離方法——組培方法，希望借此為其可持續(xù)利用提供科學(xué)依據(jù)和參考。

1 蛇足石杉中的有效成分

19 世紀(jì)中期，人們開始對蛇足石杉中的化學(xué)成分進(jìn)行研究，其主要化學(xué)成分為生物堿類、三萜類和黃酮類等。其中生物堿類成分又以石松生物堿為主，且骨架均是由C16N 或C16N2組成的三環(huán)或四環(huán)結(jié)構(gòu)，按照Ayer［4］的研究結(jié)果又可將其劃分成lycopodine、lycodine、fawcettimine 和miscellaneous 等四種類型。

馬小軍［5］老師課題組已對2007 年以前報道的蛇足石杉化學(xué)成分研究進(jìn)行了系統(tǒng)綜述，因此，本文將在此基礎(chǔ)上，對2007～2014 年間蛇足石杉的國內(nèi)外研究成果進(jìn)行概述。

1.1 石松生物堿類

1.1.1 Lycopodine 型石松生物堿

2007～2014 年間，新發(fā)現(xiàn)10 個Lycopodine 型石松生物堿［6-9］，按結(jié)構(gòu)特征又可劃分為五種母核，詳見圖1 和表1。

圖1 蛇足石杉中的Lycopodine 型石松生物堿母核Fig.1 Skeleton of Lycopodine-type lycopodium alkaloids from H.serrata

表1 蛇足石杉中的Lycopodine 型石松生物堿Table 1 Lycopodine-type lycopodium alkaloids from H.serrata

1.1.2 Fawcettimine 型石松生物堿

2007～2014 年間，新發(fā)現(xiàn)Fawcettimine 型石松生物堿18 個［10-12］，按其結(jié)構(gòu)特征分為以下6 種母核，有關(guān)物質(zhì)見圖2 和表2。

圖2 蛇足石杉中的Fawcettimine 型石松生物堿的母核Fig.2 Skeleton of Fawcettimine-type lycopodium alkaloids from H.serrata

表2 蛇足石杉中的Fawcettimine 型石松生物堿Table 2 Fawcettimine-type lycopodium alkaloids from H.serrata

1.1.3 Miscellaneous 型石松生物堿

Gao 等2008 年在蛇足石杉中發(fā)現(xiàn)兩個生物堿Huperzine M 和Huperzine N［13］;Kubota 等2009 年在長柄蛇足石杉中發(fā)現(xiàn)兩種石松生物堿Serratezomines D 和Serratezomines E［14］;此外Katakawa 等2009年在長柄蛇足石杉中發(fā)現(xiàn)一種具有新的骨架的生物堿Lycoposerramine R［11］，結(jié)構(gòu)分別如圖3。

圖3 蛇足石杉中的miscellaneous 型石松生物堿Fig.3 Miscellaneous-type lycopodium alkaloids from H.serrata

1.1.4 其它成分

楊亞濱等從蛇足石杉中分離到2 個二萜類成分和一個黃酮糖苷類成分，分別是3β-Hydroxysandaracopimaric acid (I)，(15R)-12，16-epoxy-11，14-dihydroxy-8，11，13-abietatrien-7-one (II)，5，5＇-dihydroxy-2＇，4＇-dimethoxy-flavone-7-O-β-D-(6＇＇-O-Z-p coumaroyl)-glucopyranoside (III)［15，16］，結(jié)構(gòu)如圖4。

圖4 蛇足石杉中的黃酮類和二萜類Fig.4 Diterpenoid and flavone glycoside from H.serrata

2 生物堿類成分的藥理學(xué)研究

迄今為止已從蛇足石杉中分離并鑒定了超過90 種生物堿類成分，和超過30 種的三萜類成分［5］，本文著重對其活性成分——生物堿的藥理作用進(jìn)行了綜述。

石杉堿甲(Hup A)作為代表性成分，主要有抑制腦內(nèi)AchE 的活性、加快氧自由基的清除、減少自由基損傷、加強(qiáng)肌肉收縮、保護(hù)神經(jīng)、增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶、改善記憶功能障礙和鎮(zhèn)痛等作用［17］。成敬［18］等對分別用生理鹽水和石杉堿甲灌胃的老鼠進(jìn)行電擊實驗，發(fā)現(xiàn)石杉堿甲可減輕電休克模型中老鼠的記憶損害。以小鼠、大鼠、兔子和狗進(jìn)行石杉堿甲的毒理學(xué)研究，實驗結(jié)果表明Hup A 由于選擇性較高，因此，相對于加蘭他敏和他克林等同類藥物，其不良反應(yīng)較少，且癥狀較輕［19］。

隨著近年研究的不斷深入，Hup A 作為一種高效高選擇性的中樞乙酰膽堿酯酶抑制劑，不僅有調(diào)控神經(jīng)生長因子的表達(dá)與分泌、抗谷氨酸受體的作用，還可以通過對抗谷氨酸引發(fā)的興奮毒性、抗細(xì)胞凋亡、抗氧化等多條途徑保護(hù)細(xì)胞，對多種神經(jīng)退行性疾病有潛在的治療作用［20］。

Hup A 在軍事方面也有一定的應(yīng)用，張瑞華［21］等發(fā)現(xiàn)Hup A 聯(lián)合苯二氮卓類藥物可以對中樞神經(jīng)系統(tǒng)形成很強(qiáng)的保護(hù)體系，在預(yù)防NA 中毒時有較高的應(yīng)用價值。

蛇足石杉中的其它生物堿類成分也體現(xiàn)了較強(qiáng)的活性，如lycojapodine A、lycoperine A、cryptadines A、cryptadines B、carinatumins A、carinatumins B 和sauroine 等都具有一定的乙酰膽堿酯酶抑制活性;Lycojapodine A 具有較好的抗艾滋病毒活性;Lycovatine A、complanadines C 和D 等體現(xiàn)了一定的抗菌活性;lyconadins A 和B、annotinidines B-F、complanadine D 等具有促進(jìn)mRNA 過表達(dá)的作用;Nankakurine A 可促進(jìn)PC-12 細(xì)胞的分化;Huprie X、Huprie Y 和6-β-羥基Hup A 的乙酰膽堿酯酶抑制活性優(yōu)于Hup A［19，22-25］。

3 有效成分的分析和分離方法

3.1 石杉堿甲的分析方法

3.1.1 紫外分光光度及薄層檢測法

Hup A 具有特殊的空間環(huán)和酰氨基，與一般生物堿不同，用酸性乙醇-FeCl3染色呈黃綠色，利用此性質(zhì)可以進(jìn)行紫外掃描測定其含量。一般選擇311 nm 左右的波長進(jìn)行紫外分析檢測［26］。紫外分光光度法測定蛇足石杉中總生物堿含量方法簡便、穩(wěn)定性好。

周漢華［27］等采用硅膠G 薄層板薄層掃描法分析了貴州產(chǎn)皺邊石杉中Hup A 的含量，以氯仿—甲醇—氨水為展開劑，高錳酸鉀水溶液為顯色劑，測得Hup A 含量為0.1324 mg/g，該方法可以用于Hup A的含量測定。

3.1.2 高效液相色譜(HPLC)

蛇足石杉中石杉堿甲含量測定一般采取HPLC，該方法簡單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。王峻［28］等利用HPLC 測定了石杉屬和馬尾杉屬總共23 種擬蕨類原植物中的Hup A 含量，發(fā)現(xiàn)伏帖石杉中Hup A的含量最高，為0.2004%。杜次［29］等利用HPLC 測定湘西蛇足石杉植株中不同部位的石杉堿甲含量，發(fā)現(xiàn)有顯著差異，并且通過對蛇足石杉根、莖、葉中的賴氨酸脫羧酶基因(LDC)進(jìn)行半定量RT-PCT 分析推測出賴氨酸脫羧酶在石杉堿甲的生物合成中不起關(guān)鍵作用。張敬彩［30］等用X-Charge C18柱，采用0.1%三氟乙酸和含0.09%三氟乙酸的乙腈為流動相進(jìn)行梯度洗脫，在短時間內(nèi)完成了Hup A 的快速分析。

3.1.3 毛細(xì)管電泳色譜(CE)

CE 技術(shù)，因其超微量進(jìn)樣、分離效率高、廢液少、分析快，特別是無需考慮復(fù)雜組分對價格昂貴的色譜柱引起污染的特點，越來越受到藥物研究工作者的重視。余宇燕［31］等用毛細(xì)管電泳法測定了石杉堿甲片樣品中Hup A 的濃度，電解質(zhì)溶液為pH為4.6 的乙酸鹽溶液，在波長310 nm 處進(jìn)行紫外檢測，得出樣品中Hup A 的質(zhì)量濃度與峰面積的線性范圍為5.0～60.0 mg/L。

3.1.4 酶聯(lián)免疫法檢測(ELISA)

鄒艷輝［32］等取自制純化后人工抗原Hup ABSA 免疫Balb/c 純種雌性小鼠的脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，篩選后得到雜交瘤細(xì)胞，取腹水進(jìn)行間接競爭ELISA 檢測效價后選擇OD450值接近1.0 的抗體稀釋倍數(shù)作為ELISA 工作條件，IC10最低的單克隆抗體作為最佳抗體，建立ELISA 檢測方法，該測定方法快速而且靈敏。

3.2 蛇足石杉中有效成分的提取方法

3.2.1 常規(guī)提取法

許慧［26］等用酒石酸、鹽酸、磷酸、檸檬酸、醋酸5 種酸水溶液冷浸樣品20 h 之后分析發(fā)現(xiàn)5 種方法的回收率無明顯差異。通過比較甲醇熱回流、1.0%鹽酸冷浸、超聲、滲漏4 種制備Hup A 的方法，發(fā)現(xiàn)甲醇熱回流和超聲的回收率較冷浸和滲漏高，但純度較低。同時，發(fā)現(xiàn)1∶30 為提取石杉堿甲的最佳料液比。

3.2.2 超聲波輔助提取法

Hup A 的含量通常含量低于0.01%，因此對該有效成分的提取分離方法的探尋從未停止。黎萬奎［33］等以1∶20 料液比酸水提取并超聲40 min 的提取工藝，改善了蛇足石杉內(nèi)生真菌2F09P03B 發(fā)酵培養(yǎng)物中Hup A 的提取率。該條件下內(nèi)生真菌石杉堿甲提取率約為其他傳統(tǒng)提取方法的1.5～2 倍。黃暉［34］等對傳統(tǒng)的提取工藝進(jìn)行了綜合的分析和優(yōu)化，經(jīng)比較確定最佳提取方法是超聲輔助的酸液浸提工藝，該工藝操作簡捷，安全性高。

3.2.3 索氏提取法

黃暉［34］等將長柄石杉粉末(40 目，約3 g)置于索氏提取器中，加乙醇回流提取，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得浸膏，過濾，調(diào)節(jié)pH 后萃取至Dragendorffor’s 反應(yīng)呈陰性，濃縮萃取液得產(chǎn)品。結(jié)果顯示乙醇濃度較回流時間、回流次數(shù)的影響更為顯著。

3.2.4 酶提法

易學(xué)文［35］等開發(fā)了酶提法工藝，用纖維素酶酶解細(xì)胞壁，用正交試驗確定提取工藝。蛇足石杉中Hup A 的提取率為0.589‰，該方法的提取率比普通酸提法提高了40.3%。但提取液中含有較多淀粉、纖維素、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)等雜質(zhì)，為分離造成了一定的困難。

3.2.5 殼聚糖絮凝澄清法

李俊［36］等開發(fā)了殼聚糖澄清石杉堿甲的提取工藝，用正交試驗法優(yōu)選出最佳工藝條件，該條件下蛇足石杉提取液的透光率達(dá)81.6%。此法可減少上柱前雜質(zhì)，提高產(chǎn)品純度。

3.2.6 萃取和反萃取相結(jié)合法

曾漢元［37］等使用萃取和反萃取相結(jié)合的方法，通過利用變換pH 的辦法獲得很好的除雜效果，從而達(dá)到去雜濃縮富集石杉堿甲的目的。

3.2.7 石杉堿甲印跡聚合物吸附法

李志平［38］等首次將硅膠作為載體，甲基丙烯酸作為功能載體，偶氮二異丁腈作為引發(fā)劑，二乙烯基苯作為交聯(lián)劑制備了石杉堿甲分子印跡聚合物，研究該聚合物的結(jié)構(gòu)特征和識別能效。當(dāng)用該聚合物微固相萃取蛇足石杉提取液時，Hup A 的回收率為93.5%，富集效果較好。

3.2.8 超臨界流體萃取(SFE)

李?。?9］等通過對夾帶劑種類及用量等方面的研究，使用95%的乙醇為夾帶劑，并把原料用氨水堿化預(yù)處理，得到最佳萃取條件，用超臨界萃取法提取Hup A，發(fā)現(xiàn)其提取率可達(dá)11.44%。

3.3 石杉堿甲的分離制備方法

3.3.1 活性炭脫色

沈生榮［40］等利用Hup A 存在形態(tài)受pH 影響的性質(zhì)，同時使用活性炭脫色的方法，然后在適當(dāng)?shù)蜏叵?約5 ℃)進(jìn)行氯仿的重結(jié)晶，可得到純度大于99%的高純度石杉堿甲。

3.3.2 制備型高效液相色譜

目前在實驗室中一般是選擇溶劑萃取、硅膠柱層析等分離方法從蛇足石杉提取液中分離出較高純度的Hup A，但制備量小、耗時多、溶劑耗費量大、污染大且難以規(guī)?；a(chǎn)。而工業(yè)生產(chǎn)需要更合適的工藝使其在純度和產(chǎn)量上達(dá)到最佳平衡。為了解決這個問題，趙新燕［41］采用制備型高效液相色譜分離了Hup A，此法分離工藝簡單，所得Hup A 質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高(95%以上)，該方法為利用制備型HPLC 工業(yè)化生產(chǎn)石杉堿甲提供了實驗依據(jù)。

3.3.3 常壓正相柱色譜

徐朝暉［42］等采用堿性氧化鋁柱和硅膠柱組合的方法對Hup A 進(jìn)行分離純化，此工藝下總回收率達(dá)76.1%。李玉山［43］則改進(jìn)了柱色譜法，以中性氧化鋁為填料，在優(yōu)選的最佳條件下Hup A 回收率達(dá)97.6%。該工藝條件簡單，且產(chǎn)品有很高純度，在工業(yè)上具有很大的應(yīng)用價值。

3.3.4 陽離子交換樹脂

李?。?4］等分別用5 種離子交換樹脂研究其對Hup A 的吸附量和解吸率。通過條件優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)用C004 陽離子交換樹脂制備的Hup A 含量可達(dá)5%，效果最好。

3.3.5 高速逆流色譜(HSCCC)

樊希望［45］將高速逆流色譜中的流動相和固定相的組成進(jìn)行優(yōu)化，采取的溶劑體系為正己烷-正丁醇-甲醇-水，體積比為1∶3∶2∶6，對蛇足石杉粗提物進(jìn)行分離，建立了新的純化工藝。

4 與蛇足石杉相關(guān)的微生物學(xué)研究

蛇足石杉植株生長緩慢，且配子體和孢子體階段均需要與土壤中的特定真菌共生，形成菌根才能生長，同時內(nèi)生真菌的存在使得蛇足石杉的組織培養(yǎng)較為困難，滅菌相對容易的孢子又難以萌發(fā)［46］。為了應(yīng)對藥源緊缺的問題，相關(guān)學(xué)者對蛇足石杉的內(nèi)生真菌進(jìn)行了研究性探索。由于真菌長期與植物共生，基于生物模擬等效應(yīng)，真菌中的酶系開始發(fā)生轉(zhuǎn)變，因此在內(nèi)生真菌的次生代謝產(chǎn)物中也會發(fā)現(xiàn)植物體內(nèi)的許多有效成分，內(nèi)生真菌的研究將有利于解決珍稀藥用植物的資源問題。

此前已有眾多研究者已分離到可以產(chǎn)生石杉堿甲的真菌，如汪涯［47，48］運用平板分離法分離出127株內(nèi)生真菌，有39 株內(nèi)生真菌顯示出了乙酰膽堿酯酶抑制活性，其中11 株表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制活性，又從葉中分離到1 株內(nèi)生真菌LF40，在PDB 培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，提取液中石杉堿甲的含量達(dá)80.1 μg/gdcw;蘇經(jīng)遷［49］等篩選出8 株產(chǎn)生物堿的真菌，其中有1 株炭角菌SY-02 能夠產(chǎn)生石杉堿甲;閔長莉［50］等從蛇足石杉的莖葉中分離純化得到15 株內(nèi)生真菌，其中鐮刀菌屬菌株WX13 產(chǎn)石杉堿甲;鞠鏨［51］研究了4 種石杉科植物——蛇足石杉、長柄石杉、伏貼石杉、柳杉葉馬尾杉，總共得到的32 株內(nèi)生真菌中，從柳杉葉馬尾杉中得到的2 株內(nèi)生真菌可以產(chǎn)生石杉堿甲;延安大學(xué)生科院楊曉軍［52］等自蛇足石杉的莖部分離到1 種交鏈孢霉屬真菌YD-01，對該菌株進(jìn)行了發(fā)酵培養(yǎng)，并從中分離得到石杉堿甲。

此外，還有許多內(nèi)生真菌可以產(chǎn)生石杉堿甲，能夠可逆性抑制抗膽堿酯酶，如膠胞炭疽菌Colletotrichum gloeosporioide、Colletotrichum gloeosporioides ES026、Shiraia sp.Slf14［53-55］，這些研究可能會為尋找治療阿爾茲海默病的藥源提供新的方向。

隨著研究的不斷深入，從產(chǎn)石杉堿甲的內(nèi)生真菌出發(fā)，研究者正在嘗試采用基因工程學(xué)方法，對這些真菌進(jìn)行生物學(xué)改造，如:胥錦樺［56］也對內(nèi)生真菌做了大量的研究:首先用TLC、HPLC 等方法對皺邊石杉體內(nèi)99 株真菌的代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析，用多種方法提取了真菌菌絲體DNA，最終篩選出19 株可產(chǎn)Hup A 潛力內(nèi)生菌并加以分類鑒定，這為后續(xù)的研究提供了大量寶貴的資料;周樹良［57］用多種方法對能合成石杉堿甲的內(nèi)生真菌SHB 進(jìn)行誘變，最終成功地得到穩(wěn)定遺傳的高產(chǎn)菌株wB3，其石杉堿甲產(chǎn)量為原菌株的3.04 倍，并探究得到了其發(fā)酵的最佳條件，此時再提取突變菌株的DNA 進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，分析發(fā)現(xiàn)了其與原始菌株之間的明顯差異特征帶，為利用相關(guān)功能基因生產(chǎn)石杉堿甲找到了一個切入點;而羅紅梅［58］等探究了蛇足石杉HsDXR1 基因在體內(nèi)不同部位的表達(dá)情況及其編碼區(qū)序列，是研究石杉堿甲生物合成的理論奠基。

5 蛇足石杉的組織培養(yǎng)研究

由于石杉堿甲在蛇足石杉中含量極低且資源日益減少，人工栽培難以成活且生長速度極其緩慢，人們便轉(zhuǎn)向探索組織培養(yǎng)，以獲取石杉堿甲。然而蛇足石杉體內(nèi)存在著內(nèi)生真菌，故在組織培養(yǎng)中，需3～4 次滅菌才能將真菌除凈。對外植體進(jìn)行滅菌主要用次氯酸鈉或升汞溶液，而所用的培養(yǎng)基多為MS培養(yǎng)基;在培養(yǎng)過程中，除了真菌反復(fù)污染外，外植體褐化、白化、水漬化等現(xiàn)象較為多見。

5.1 培養(yǎng)基及外源物質(zhì)的選擇

在蛇足石杉的組織培養(yǎng)中，研究者探究了各種不同培養(yǎng)基對其愈傷組織形成的影響，以找出最適方法擴(kuò)大蛇足石杉的生產(chǎn)，如孫玉強(qiáng)［59］等經(jīng)初培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)，在SN6(2，4-D 2.0 mg/mL)上培養(yǎng)70～80 d 后誘導(dǎo)出愈傷組織塊;包日雙［60］等用蛇足石杉孢子囊培養(yǎng)出原葉體，進(jìn)而在最佳增殖培養(yǎng)基(無激素的MS 培養(yǎng)基)上誘導(dǎo)出孢子體;Freiburg 大學(xué)的學(xué)者［61］對粗糙馬尾杉進(jìn)行了成功的試管繁殖，使石杉科植物的組培看到了希望;最近，吉枝單［62，63］等探究培養(yǎng)基種類、植物激素配比及蔗糖含量等條件，發(fā)現(xiàn)最佳葉狀體誘導(dǎo)培養(yǎng)基為6，7-V +IAA0.5 mg/L，進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)外源激素不利于蛇足石杉離體葉狀體的增殖，蔗糖最佳用量為20 g/L，在此條件下于MS 培養(yǎng)基中培育出了生長狀況良好的葉狀體，且增殖率達(dá)到了1362.6%，該方法首次獲得了蛇足石杉再生葉狀體，使工業(yè)批量生產(chǎn)蛇足石杉向前邁進(jìn)了一步。

5.2 外植體取材部位及滅菌方法

外植體滅菌的成功率與取材部位有必然的聯(lián)系，較幼嫩的部位含菌較少成活率高，如沈曉霞［64］等分別用1/5 倍飽和次氯酸鈉滅菌15 min，0.1%升汞滅菌3 min，收到了很好的結(jié)果;馬華升［65］等用0.1%(w/v)升汞，處理莖尖外植體5～6 min 進(jìn)行消毒滅菌。

也有實驗對植物不同部位(莖尖、莖部、葉片、側(cè)葉、腋芽、孢子囊等)取材，發(fā)現(xiàn)次氯酸鈉并不適合千層塔外植體滅菌處理。利用升汞進(jìn)行莖尖消毒滅菌時，要求莖尖是新生的0.5～1 mm 左右、維管組織還沒有到達(dá)的部位。孢子囊可以用次氯酸鈉滅菌5 min 或升汞滅菌2～3 min，以解決染菌問題。

楊雪飛［66］等發(fā)現(xiàn)外植體的最佳滅菌方法為70%乙醇滅菌40 s，0.1%升汞溶液滅菌8 min，70%雙氧水溶液滅菌10 min。另外，李貴［67］等發(fā)現(xiàn)，消毒劑結(jié)合溫度處理是消除內(nèi)生茵的良好方法，用于組培的理想外植體是含內(nèi)生菌極少的孢子囊和莖尖。

6 石杉堿甲的臨床應(yīng)用研究

石杉堿甲是一種強(qiáng)效的可逆性膽堿酯酶抑制藥，具有脂溶性高，易通過血-腦屏障等特點，對真性膽堿酯酶有選擇性抑制作用。最早于1994 年被應(yīng)用于臨床，臨床可用于治療阿爾茨海默病、血管性癡呆、重癥肌無力、小兒智力發(fā)育遲緩、早老性癡呆、記憶障礙、慢性失眠癥等，具有改善記憶的功能。另外還可預(yù)防和治療多梗死性癡呆、輔助治療精神分裂癥的陰性癥狀以及治療腦卒中后的尿失禁等［68，69］。

近年來，為了避免石杉堿甲的毒副作用，聯(lián)合用藥已成為臨床用藥的一種新趨勢，例如:石杉堿甲聯(lián)合天智顆粒治療血管性癡呆時，體現(xiàn)了療效顯著，安全無毒的特點［70］;石杉堿甲片和尼莫地平聯(lián)合治療腦血管性癡呆，可顯著改善患者的認(rèn)知能力，臨床效果確切安全，副作用少［71］。

7 結(jié)語

隨著社會老齡化程度的加劇，AD 癥已成為危害老年人健康的主要疾病之一，同時社會壓力的擴(kuò)散使中、青年群體對益智產(chǎn)品的需求不斷增大，因此對石杉堿甲的需求也隨之增大，這加劇了自然資源的耗竭，會造成資源破壞和種群退化等問題。據(jù)報道，全國蛇足石杉資源量為1 ×106kg，主產(chǎn)地廣西在1990 年時蘊(yùn)藏量為1.77 ×105kg，目前已下降至2 ×104kg。千層塔植株矮小，生長緩慢，野生資源有限，人工繁殖困難，組培未獲成功，扦插成活率很低，資源恢復(fù)期長達(dá)15 年。而國內(nèi)制藥企業(yè)生產(chǎn)石杉堿甲制劑存在較大缺口，難以滿足國內(nèi)外市場需求(目前僅美國年需求就達(dá)100 kg)，因此，開發(fā)新技術(shù)解決千層塔可持續(xù)利用問題迫在眉睫。本文較為系統(tǒng)的總結(jié)了蛇足石杉的活性成分、藥理活性、分析方法和組培等研究內(nèi)容，希望為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)，提供素材。

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