野馬追的化學(xué)成分及其解熱作用研究

褚純雋，任慧玲，吳天威，張 健

蘇州大學(xué)藥學(xué)院，蘇州 215123

野馬追是菊科澤蘭屬植物尖佩蘭Eupatorium lindleyanum DC.的全草;產(chǎn)于江蘇、甘肅、山東、湖南等地;味苦、性平，歸肝、脾經(jīng)，具有清熱解毒、化痰止咳、利尿消腫、降壓等功效，常用于治療感冒、咳嗽多痰、扁桃體炎、菌痢、支氣管炎等;現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，野馬追具有抑菌、抗病毒、抗氧化、肺損傷保護(hù)、降血脂等作用［1］。本課題組自2012 年開始對野馬追清熱解毒藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究，野馬追主要含有倍半萜內(nèi)酯、二萜和黃酮類化合物，從中分離的到了25 個化合物［2-4］。在此基礎(chǔ)上，本課題繼續(xù)對野馬追化學(xué)成分進(jìn)行研究，共分離得到6 個化合物，分別鑒定為:香草酸(1)、正二十八烷酸(2)、β-谷甾醇(3)、胡蘿卜苷(4)、蒙花苷(5)、5，8，4＇-三羥基-7，3＇-二甲氧基黃酮(6)，其中化合物2、5 和6 為首次從該植物中分離得到;采用UPLC/Q-TOF-MS 法，分析野馬追乙醇提取物的化學(xué)成分，利用脂多糖誘導(dǎo)大鼠發(fā)熱模型，從抗炎的角度探討野馬追的解熱作用及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 藥材與試劑

藥材采自于江蘇省盱眙縣王店鄉(xiāng)，經(jīng)復(fù)旦大學(xué)生藥學(xué)研究室陳道峰教授鑒定為菊科澤蘭屬植物尖佩蘭Eupatorium lindleyanum DC.的盛花期干燥全草。脂多糖LPS，批號:YY11156，規(guī)格:Escherichia coli 055:B5，Sigma-Aldrich;大孔樹脂AB-8，河北滄州寶恩吸附材料科技有限公司;阿司匹林腸溶片(南京白敬宇制藥有限責(zé)任公司)，批號: 121015;小鼠TNF-α 和IL-6 ELISA 試劑盒批號:M1305226，上海船夫貿(mào)易有限公司;MPO 試劑盒批號:20130702，南京建成生物工程研究所。ACQUITY UPLC/Q-TOF MS 系統(tǒng)Waters 公司，美國，采用電噴霧電離(ESI)，二元高壓泵，在線脫氣裝置，自動進(jìn)樣器，數(shù)據(jù)采集與處理采用MassHunter 軟件;所有試劑均為色譜純(E.Merck，Darmstadt，Germany)或分析純(中國醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司)，水為超純水系統(tǒng)制備得到Millipore，Bedford，MA，USA。

1.2 實驗動物

50 只SD 大鼠(清潔級)，雄性，10 周齡，平均體重203.15 ±14.85 g，許可證號:SCXK (蘇)2011-0003。大鼠自由飲食飲水，環(huán)境溫度26 ±0.5 ℃，相對濕度40%～80%。在實驗前，適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d。

1.3 主要儀器

N-1100 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(東京理化器械株式會社);Varian UNITY INOVA-400 型、Bruker AV Ⅲ-500 型核磁共振儀;薄層層析硅膠和柱層析硅膠(200～300 目，青島海洋化工廠);ODS 柱色譜填料(Daisogel 公司);凝膠SephadexTMLH-20(GE healthcare Bio-science AB);Agilent Infinity 1260 高效液相色譜儀(美國安捷倫公司);UV-2600PC 紫外分光光度計(日本島津制作所);ME215P-0CE 電子天平(德國賽多利斯公司);CS150FNX 超速冷凍離心機(jī)(日本株式會社日立制作所);FSH-II 型高速電動勻漿器(江蘇金壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠);ELx800 酶標(biāo)儀(美國伯騰儀器有限公司);BT-A21 軟頭型電子體溫計(深圳市福達(dá)康實業(yè)有限公司東莞分公司)。

1.4 提取與分離

野馬追干燥全草20 kg，以80%乙醇提取2 次，提取液濃縮，得浸膏2.5 kg，將其溶解在水中，經(jīng)石油醚萃取脫脂，再分別以氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，合并濃縮各萃取層，得乙酸乙酯部分約70 g。乙酸乙酯部分經(jīng)硅膠柱色譜，用氯仿-甲醇(100∶0～0∶100)梯度洗脫，得到4 個部分Fr.1～Fr.4。Fr.1 經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯(100∶1～1∶1)為洗脫劑，梯度洗脫，并經(jīng)過重結(jié)晶得到化合物3(18.43 mg);Fr.2 經(jīng)硅膠柱色譜，氯仿-甲醇(40∶1～1∶1)為洗脫劑，梯度洗脫，再通過重結(jié)晶得到化合物1(15.41 mg)和2(17.44 mg)。Fr.3 經(jīng)硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇(40∶1～1∶1)為洗脫劑，梯度洗脫，經(jīng)重結(jié)晶得到化合物4(26.78 mg);Fr.4 經(jīng)硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇(10∶1～0∶100)梯度洗脫，得到2 個流分，F(xiàn)r.4-2 部分經(jīng)Sephadex LH-20 凝膠柱色譜，以甲醇水洗脫得到化合物5(15.34 mg)和6(21.32 mg)。

1.5 UPLC-Q-TOF/MS 分析

1.5.1 樣品和對照品制備

對照品純度大于98%，自制;eupalinolide H 37.4 μg/mL;eupalinolide F，40.4 μg/mL;eupalinolide K，38.4 μg/mL;eupalinolide I，39.0 μg/mL;eupalinolide G，38.4 μg/mL;野馬追的80%乙醇提取物(EUP-EtOH)，1 mg/mL。

1.5.2 UPLC-Q-TOF/MS 方法與條件

色譜條件:Waters ACQUITY UPLC?BEH，UPLC C18分析柱(2.1 mm × 100 mm，1.7 μm)和Waters Van GuardTMBEH C18預(yù)柱(2.1 mm × 5 mm，1.7 μm);流動相為0.1%甲酸水溶液(A)和0.1%甲酸乙腈(B);梯度洗脫，0～8 min，5%～25% B;8～18 min，25%～75% B;18～25 min，75%～100% B;體積流量0.4 mL/min;柱溫20 ℃;進(jìn)樣體積1.0 μL。

質(zhì)譜條件:Agilent 6540 accurate mass Q-TOF LC/MS(Agilent Technologies，USA)系統(tǒng)，配有電噴霧離子源(正離子模式)和MassHunter 數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)，霧化氣溫度為300 ℃，霧化氣體積流量8.0 L/min，脫溶劑氣(N2)體積流量8.0 L/min，毛細(xì)管電壓為3500 V(正離子模式)，噴嘴電壓為500 V，掃描范圍m/z 100～1700。

1.6 解熱實驗

1.6.1 脂多糖誘導(dǎo)大鼠發(fā)熱模型

每天從9:00 始，間隔30 min 測量一次大鼠肛溫，持續(xù)測量10 h，連續(xù)三天，以3 d 同時間點的體溫平均值作為基礎(chǔ)體溫，篩選出體溫介于36.6～38.3 ℃之間且三次溫差不超過0.5 ℃的大鼠;給藥前12 h 禁食不禁水，以減少測溫時糞便干擾的情況。每次測溫時電子體溫計探頭涂上凡士林，插入大鼠直腸2 cm(在2 cm 用膠布標(biāo)記固定，確保每次插入深度一致)，待讀數(shù)穩(wěn)定后記錄。

1000 g 藥材經(jīng)80%乙醇回流提取2 次，合并，減壓濃縮干燥得野馬追提取物127 g(EUP-EtOH)，含有化合物eupalinolide F 0.98%，eupalinolide K 10.62%，eupalinolide H 0.59%，eupalinolide G 7.67%，eupalinolide I 2.16%。將野馬追的80%乙醇提取物溶于水中，制得相應(yīng)濃度的懸濁藥液。將篩選后得的50 只體溫穩(wěn)定的大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組(LPS，100 μg/kg)、野馬追醇提物組(生藥劑量:305 mg/kg)和陽性組(阿司匹林，200 mg/kg)，各組間體重經(jīng)方差分析無顯著差異。腹腔注射LPS(20 μg/mL LPS 的0.9%生理鹽水溶液)或0.9%生理鹽水溶液(與LPS 同體積)，隨后按劑量灌胃給藥，30 min 后測量第一次肛溫，在1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、7、8 h 分別測肛溫一次。設(shè)定基礎(chǔ)體溫(每個時間點)值為0，給完藥的時間點為0，繪制各組各時間點平均體溫變化曲線，觀察最大升溫幅度△T (發(fā)熱時體溫和基礎(chǔ)體溫的差值)的變化。8 h 后，摘除眼球取血，放血處死大鼠后，摘取肝臟。

1.6.2 髓過氧化物酶(MPO)活性的測定

造模后8 h，放血法處死大鼠，剖開腹腔摘取肝臟組織，稱取50 mg 肝臟組織，加入試劑二950 mL制成5%組織勻漿，4 ℃，1500 × g，離心10 min，吸取上清液0.9 mL 加入三號試劑0.1 mL，37 ℃水浴15 min。其余操作按說明書嚴(yán)格進(jìn)行，測定460 nm下吸光度(A)。MPO(U/g)=(測定管A-對照管A)÷ 11.3 × 取樣量(g)。

1.6.3 炎癥因子TNF-α 和IL-6 水平的測定

造模后8 h，摘除大鼠眼球取血，4 ℃，1500 ×g，離心20 min，取血清，-80 ℃保存。按照ELISA 試劑盒說明書測定血清TNF-α 和IL-6 水平，酶標(biāo)儀上讀取OD450。

1.6.4 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean ±S.D.)表示，應(yīng)用SPSS 19 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，組間比較采用Fisher＇s PLSD 法，當(dāng)P＜0.05 認(rèn)為有顯著性差異。

2 實驗結(jié)果

2.1 化合物結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 白色針晶(甲醇)，mp.211～213℃;1H NMR (DMSO-d6，400 MHz)δ:7.44 (1H，d，J=8.1Hz，H-6)，7.43 (1H，s，H-2)，6.85 (1H，d，J=8.2Hz，H-5)，3.80 (3H，s，3-OCH3);13C NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:115.0 (C-2)，147.3 (C-3)，151.1 (C-4)，112.7 (C-5)，123.6(C-6)，167.4(-COOH)，55.6 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］報到數(shù)據(jù)一致，故化合物1 為香草酸(vanillic acid)。

化合物2 白色粉末(甲醇);1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:2.35 (2H，t，J=7.1 Hz，-CH2-COOH)，1.63 (2H，m，-CH2-)，1.25 (48H，brs，-(CH2)24-)，0.89 (3H，t，J=7.0Hz，-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］報到數(shù)據(jù)一致，故化合物2 為正二十八烷酸(n-octacosanoic acid)。

化合物3 白色針晶(甲醇)，mp.137～138 ℃，易溶于氯仿等溶劑;經(jīng)與對照品β-谷甾醇共薄層層析，3 種展開劑系統(tǒng)下TLC 中Rf值及顯色行為完全一致。確定化合物3 為β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物4 白色粉末(甲醇)，難溶于一般有機(jī)溶劑，能溶于氯仿-甲醇混合溶液，Liebermann-Burchard 反應(yīng)陽性，Molish 反應(yīng)陽性;經(jīng)與胡蘿卜苷對照品比較，TLC 中Rf 值及顯色行為完全一致。確定化合物4 為胡蘿卜苷(daucosterol)。

化合物5 淡黃色粉末(甲醇)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽性，Molish 反應(yīng)呈陽性，提示該化合物可能為黃酮苷類化合物;1H NMR (DMSO-d6，400 MHz)δ:12.92 (1H，s，5-OH)8.05 (2H，d，J=8.8 Hz，H-2＇，6＇)，7.15 (2H，d，J=8.8Hz，H-3＇，5＇)，6.95 (1H，s，H-3)，6.79 (1H，d，J=1.7 Hz，H-8)，6.45 (1H，d，J=1.9 Hz，H-6)，5.07 (1H，d，J=7.2Hz，H-1＇＇)，4.55 (1H，brs，H-1＇＇＇)，3.86 (3H，s，-OCH3)，1.08(3H，d，J=6.2Hz，H-6＇＇＇);13C NMR (DMSO-d6，100 MHz)δ:163.9 (C-2)，103.8 (C-3)，182.0 (C-4)，161.1 (C-5)，99.6 (C-6)，162.9 (C-7)，94.8 (C-8)，157.0 (C-9)，105.5 (C-10)，122.7 (C-1＇)，128.5 (C-2＇)，114.7 (C-3＇)，162.4 (C-4＇)，114.7(C-5＇)，128.5 (C-6＇)，99.9 (C-1＇＇)，73.1 (C-2＇＇)，76.2 (C-3＇＇)，69.6 (C-4＇＇)，75.6 (C-5＇＇)，66.1 (C-6＇＇)，100.5 (C-1＇＇＇)，70.3 (C-2＇＇＇)，70.7 (C-3＇＇＇)，72.1 (C-4＇＇＇)，68.3 (C-5＇＇＇)，17.8 (C-6＇＇＇)，55.6(-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］報到數(shù)據(jù)一致，故化合物5 為蒙花苷(linarin)。

化合物6 淡黃色粉末(甲醇)，1%三氯化鐵溶液顯色呈黃色，10%硫酸乙醇溶液顯色呈黃色;1H NMR (DMSO-d6，400 MHz)δ:13.08 (1H，s，5-OH)，10.69 (1H，s，-OH)，9.96 (1H，s，-OH)，7.55 (2H，m，H-2＇，6＇)，6.90 (2H，m，H-3＇，5＇)，6.62 (1H，s，H-6)，3.75 (3H，s，3-OCH3)，3.89 (3H，s，OCH3);13C NMR (DMSO-d6，100 MHz)δ:164.0 (C-2)，103.0 (C-3)，182.4 (C-4)，157.5 (C-5)，94.6(C-6)，152.7 (C-7)，131.6 (C-8)，153.0 (C-9)，104.3 (C-10)，121.8 (C-1＇)，110.4 (C-2＇)，151.0(C-3＇)，148.3 (C-4＇)，116.0 (C-5＇)，120.6 (C-6＇)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報到數(shù)據(jù)一致，故化合物6為5，8，4＇-三羥基-7，3＇-二甲氧基黃酮(5，8，4＇-trihydroxy-7，3＇-dimethoxy flavone)。

2.2 野馬追醇提物UPLC-Q-TOF/MS 分析

分析野馬追醇提取物(EUP-EtOH)的正離子模式下色譜圖(圖1)，依據(jù)分子離子峰及碎片離子，與對照品的保留時間和分子離子峰相比較，參考相關(guān)文獻(xiàn)［1-4］，鑒定了23 個化合物(表1)，峰1、6、7、8、10、11、13、15、16、17、18、19 和22 為萜類化合物，峰23 為黃酮類化合物。

圖1 野馬追乙醇提取物的LC-MS 總離子流圖Fig.1 LC-MS total ion chromatogram of EUP-EtOH

表1 野馬追乙醇提取物的UPLC-Q-TOF/MS 鑒定結(jié)果Table 1 Characteristics of chemical components of EUP-EtOH identified by UPLC-Q-TOF-MS

2.3 野馬追醇提物解熱作用及機(jī)制

2.3.1 解熱作用

模型組大鼠腹腔注射LPS 后，體溫升高變化呈三相熱曲線，分別在1.5、4 和6 h 出現(xiàn)峰值，最大升溫幅度為1.97 ℃。野馬追醇提物對大鼠的體溫升高有明顯的抑制作用，見圖2。

2.3.2 大鼠的肝組織MPO 活性以及血清炎癥因子TNF-α 和IL-6 水平

造模后8 h，相對于空白組，模型組肝組織MPO活性以及血清中炎癥因子水平明顯升高(P＜0.01)，野馬追醇提物組的MPO 活性以及血清中炎癥因子水平都有不同程度的降低(P＜0.01)。見表2。

圖2 各組大鼠體溫差△T 隨時間的變化趨勢比較(n=10)Fig.2 The trends of temperature difference to time (△T-t)of rats in each group (n=10)

表2 各組大鼠的肝組織MPO 活性以及血清炎癥因子TNF-α 和IL-6 水平的比較)Table 2 Effect of EUP-EtOH on MPO，TNF-α and IL-6 of febrile rat induced by LPS ()

表2 各組大鼠的肝組織MPO 活性以及血清炎癥因子TNF-α 和IL-6 水平的比較)Table 2 Effect of EUP-EtOH on MPO，TNF-α and IL-6 of febrile rat induced by LPS ()

注:與空白組比較，## P＜0.01;與模型對照組比較，＊＊ P＜0.01，＊＊＊ P＜0.001。Note:Compared with control group，## P＜0.01;Compared with model group，＊＊ P＜0.01，＊＊＊ P＜0.001.

3 討論

在本課題組前期研究基礎(chǔ)上，繼續(xù)野馬追的化學(xué)成分研究，分離得到6 個化合物，采用UPLC/QTOF-MS 法，分析野馬追乙醇提取物的化學(xué)成分，野馬追主要含有萜類和黃酮類化合物。采用脂多糖誘導(dǎo)發(fā)熱模型，其發(fā)熱通常表現(xiàn)為雙相熱或三相熱，并伴有寒顫和輕微腹瀉癥狀，這與臨床感染性炎癥所致發(fā)熱相似，是經(jīng)典的炎性發(fā)熱模型，且具有自限性和耐受性［9］。已有文獻(xiàn)［10］及本課題預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)基礎(chǔ)體溫的選擇對實驗數(shù)據(jù)有較大的影響，故而首先建立更為全面的大鼠基礎(chǔ)體溫計算方法，以減少誤差。模型組的大鼠在100 μg/kg LPS 腹腔注射后，體溫變化呈三相熱，峰值分別出現(xiàn)在1.5、4 和6 h，其中4 h 的體溫上升最顯著，最大幅度達(dá)1.97 ℃，同時多數(shù)大鼠出現(xiàn)精神萎靡和寒顫癥狀，少數(shù)出現(xiàn)嚴(yán)重腹瀉癥狀，而，野馬追醇提物組顯著控制了體溫的升高，大鼠無明顯的異常情況。

肝臟是與發(fā)熱反應(yīng)密切相關(guān)的外周器官，LPS經(jīng)腹腔注射后，通過門靜脈到達(dá)肝臟，引起肝臟組織中性粒細(xì)胞浸潤，進(jìn)而誘發(fā)肝臟炎癥反應(yīng)。部分炎癥介質(zhì)如PGE2可與肝臟迷走神經(jīng)上PGE 受體EP3結(jié)合并向中樞傳遞發(fā)熱信號，這可能是觸發(fā)第一相發(fā)熱的始動因素之一［11，12］。MPO 在LPS 刺激的炎癥反應(yīng)中由活化的中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和組織巨噬細(xì)胞分泌［13］，其水平可直觀反映炎癥浸潤程度，以判斷藥物對中性粒細(xì)胞浸潤的影響。實驗中，模型組的大鼠肝臟組織MPO 活性顯著升高，野馬追醇提物組的大鼠肝臟MPO 活性得到有效的抑制。由此推測，野馬追可能通過抑制外周肝組織炎癥反應(yīng)而產(chǎn)生解熱作用。

脂多糖作為內(nèi)毒素在動物體內(nèi)能引起強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)［14］，是導(dǎo)致發(fā)熱的外源性致熱源，其引起發(fā)熱的機(jī)制主要是通過誘導(dǎo)白細(xì)胞浸潤和激活炎性細(xì)胞釋放IL-1，IL-6 和TNF-α 等［15，16］內(nèi)源性致熱源(endogenous pyrogen，EP)，進(jìn)而直接或間接作用于體溫調(diào)節(jié)中樞，導(dǎo)致下丘腦發(fā)熱介質(zhì)的釋放，使體溫調(diào)定點上移，產(chǎn)熱增加、散熱減少而發(fā)揮致熱作用［11］。實驗中，野馬追醇提物組的大鼠血清中的IL-6 和TNF-α 水平較模型組顯著降低，說明野馬追可能通過抑制炎癥因子的釋放起到解熱作用。

綜上所述，野馬追對脂多糖誘導(dǎo)的大鼠發(fā)熱模型有良好的解熱作用，并顯著降低肝臟組織MPO 活性以及血清中TNF-α 和IL-6 的水平，此可能與抑制外周肝臟組織炎癥反應(yīng)和抑制血液中炎癥因子的釋放有關(guān)。

1 Wu SQ (吳雙慶)，Xia L (夏龍)，Yao S (姚士)，et al.Advances on chemical constituents and pharmacological effects of Eupatorium lindleyanum.China Pharm (中國藥房)，2013，24:1426-1428.

2 Wu SQ，Xu NY，Sun Q，et al.Six new sesquiterpenes from Eupatorium lindleyanum.Helv Chim Acta，2012，95:1637-1644.

3 Wu SQ，Xu NY，Zhang J，et al.Three new acyclic diterpenoids from Eupatorium lindleyanum DC.J Asian Nat Prod Res，2012，14:652-656.

4 Wu SQ (吳雙慶)，Sun Q (孫群)，Chu CJ (褚純雋)，et al.chemical constituents of Eupatorium lindleyanum.Chin J Chin Mater Med (中國中藥雜志)，2012，37:937-940.

5 Chen Q (陳泉)，Wu LJ(吳立軍)，Ruan LJ (朊麗軍)，et al.Chemical studies on the constituents of Lophatherum gracile Brongn.(II).J Shenyang Pharm Univ (沈陽藥科大學(xué)學(xué)報)，2002，19:257-259.

6 Liu R (劉睿)，Gu QQ (顧謙群)，Cui CB (崔承彬)，etal.Chemical constituents of Schefflera venulosa and their antitumor activities.China Tradit Herb Drugs (中草藥)，2005，36:328-332.

7 Jiang XL (蔣秀蕾)，F(xiàn)an CL (范春林)，Ye WC (葉文才).Chemical constituents of Cirsium japonicum.China Tradit Herb Drugs (中草藥)，2006，37:510-512.

8 Su YF (蘇艷芳)，Chen L (陳磊)，Luo Y (羅洋)，et al.Chemical constituents and their antiulcerogenic studies on whole herb of Conyza blinii (I).China Tradit Herb Drugs(中草藥)，2007，38:332-334.

9 Hatzelmann T，Harden LM，Roth J，et al.Antipyretic effect of central［Pyr］apelin13 on LPS-induced fever in the rat.Regul Pept，2013，184C:6-13.

10 Shu YC (束雅春)，Qin KM (秦昆明)，Chen YJ (陳亞軍)，et al.Study on the different decocting methods on Yinqiao San decoction of anti-inflammatory and antipyretic effects.China J Tradi Chin Med Pharm (中華中醫(yī)藥雜志)，2013，28:1413-1418.

11 Li ZH，Vit P，Carlos F，et al.Kupffer cell-generated PGE2triggers the febrile response of guinea pigs to intravenously injected LPS.Am J Physiol-Regul Integr Compar Physiol，2006，290:1262-1270.

12 Lazarus M.The differential role of prostaglandin E2 receptors EP3 and EP4 in regulation of fever.Mole Nutri Food Res，2006，50:451-455.

13 Li XZ (李欣志)，Zhong ZZ (仲兆忠)，Xu QP (徐秋萍)，et al.Inhibitory effect of triacetylshikimic acid on plasma contents of vasoactive substances and brain myeloperoxidase activity during focal cerebral ischemia-reperfusion in rats.Chin J Pharm Toxicol (中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志)，2006，20:13-18.

14 Steiner AA，Ivanov AI，Serrats J，et al.Cellular and molecular bases of the initiation of fever.PLoS Biol，2006，4:e284.

15 Saluk-Juszczak J，Wachowicz B.The proinflammatory activity of lipopolysaccharide.Postepy Biochem，2005，51:280-287.

16 Nilsberth C，Elander L，Hamzic N，et al.The role of interleukin-6 in lipopolysaccharide-induced fever by mechanisms independent of prostaglandin E2.Endocrinology，2009，150:1850-1860.