樟子松松針石蠟切片制備

王健+林清鵬

摘 要：以樟子松松針為材料，結(jié)合松針的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，對(duì)石蠟切片制作條件進(jìn)行摸索。在FAA固定劑配比中采用70%乙醇；粘片時(shí)材料置于40℃水浴鍋中展開(kāi)，用防脫載玻片撈取，置35℃烘箱24h；松針切8um厚度，染色條件為伊紅5min，蘇木精1min條件下，獲得的切片效果較好。

關(guān)鍵詞：樟子松；松針；石蠟切片

樟子松又名海拉爾松，是我國(guó)三北地區(qū)主要優(yōu)良造林樹(shù)種之一。樟子松葉兩針一束，稀有三針。石蠟切片技術(shù)是觀察研究動(dòng)植物形態(tài)發(fā)育和內(nèi)部構(gòu)造的重要技術(shù)，但對(duì)于不同植物組織制片需要不同的具體條件，切片的質(zhì)量不僅和材料自身的特性以及實(shí)驗(yàn)操作的室溫相關(guān)，還和固定、脫水、透明、浸蠟、染色等每一步驟的規(guī)范操作和時(shí)間控制相關(guān)，因而需要根據(jù)植物的組織結(jié)構(gòu)特點(diǎn)摸索適用的制片方法。本實(shí)驗(yàn)在傳統(tǒng)植物石蠟切片技術(shù)的基礎(chǔ)上，結(jié)合樟子松松針結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，對(duì)固定、脫水、粘片、染色等環(huán)節(jié)進(jìn)行了摸索，以便更好地觀察松針的微觀形態(tài)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料采自春季凈月潭公園樟子松林，選取新鮮、幼嫩松針進(jìn)行石蠟制片。

1.2 試劑配制

FAA固定劑：70%乙醇：冰醋酸：37%甲醛=90： 5： 5

乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)梯度溶液：70%、80%、85%、90%、95%、100%

伊紅染液：稱取1g伊紅溶于100ml蒸餾水中，加入1～2%冰醋酸10滴。

其他試劑常規(guī)配制。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

依據(jù)傳統(tǒng)的石蠟切片流程：固定、脫水、透明、浸蠟、包埋及修蠟、切片、粘片、脫蠟及染色、封片，著重在脫水、透明、透蠟、包埋、染色等步驟根據(jù)樟子松松針的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)進(jìn)行摸索改進(jìn)。選取染色效果優(yōu)良、完整的切片在OlympusDPController數(shù)碼顯微系統(tǒng)下進(jìn)行顯微觀察并拍照。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同固定、包埋時(shí)間對(duì)切片的影響

單一固定劑使用時(shí)乙醇會(huì)使原生質(zhì)收縮，甲醛的滲透力較慢，冰醋酸使組織發(fā)脹，混合固定劑FAA使用方便，效果較好，應(yīng)用也最廣。松針質(zhì)地較堅(jiān)硬，F(xiàn)AA固定液配制中使用70%乙醇，滲透力最好，同時(shí)具備一定的脫水效果。實(shí)驗(yàn)中曾采用過(guò)1h、1.5h、2h固定時(shí)間，1h、1.5h都會(huì)在切片階段發(fā)生較嚴(yán)重的碎片現(xiàn)象，2h切片效果好。（圖A1、A2）

由于實(shí)驗(yàn)時(shí)間在春夏之交，溫度有較為明顯的變化，加上材料質(zhì)地較硬，故選擇熔點(diǎn)較高的蠟包埋。包埋后將蠟塊置于4℃冰箱中充分凝固。切片操作分別在蠟塊凝固3d、5d、7d進(jìn)行，放置3d、5d的蠟塊在切片過(guò)程中均出現(xiàn)較為嚴(yán)重的材料與石蠟的分離情況，放置7d的蠟塊較少出現(xiàn)上述情況，說(shuō)明凝固效果比較好，也使浸蠟更為充分。（圖B1、B2）

2.2 不同切片厚度對(duì)切片效果的影響

在其他實(shí)驗(yàn)條件不變的情況下，曾選擇5um、8um、10um厚度進(jìn)行切片，5um切片容易出現(xiàn)不完整現(xiàn)象，8um、10um切片效果未有明顯差異。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，切片的質(zhì)量除了與前面的固定、脫水等步驟相關(guān)外，切片刀是決定因素，刀片必須鋒利，否則在切片時(shí)蠟片會(huì)自行卷起或皺起，或會(huì)使組織出現(xiàn)傷痕，甚至使切片破碎、不完整。（圖C1、C2）

A1 固定2h，凝固3d；A2 固定2h，凝固7d；

B1 固定2h，厚度5um；B2 固定2h，厚度8um；

C1 固定1h，染色4min；C2 固定2h，染色4min

3 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)合材料特點(diǎn)對(duì)傳統(tǒng)石蠟切片方法進(jìn)行條件摸索，除上述提及的固定、浸蠟、包埋及切片外，脫水、粘片、染色等環(huán)節(jié)如果處理不當(dāng)也會(huì)影響切片效果。為使材料不致收縮，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了適合松針的乙醇梯度，同時(shí)松針在無(wú)水乙醇中的浸泡時(shí)間略長(zhǎng)，保證脫水徹底。本實(shí)驗(yàn)由于所切取的材料小，又輕又薄，故粘片時(shí)只需將其置于39℃水浴鍋中，讓其充分展開(kāi)，再用防脫載玻片撈取，擺正位置，吸去多余水分， 置35℃烘箱24h即可。該方法操作簡(jiǎn)便，在后續(xù)步驟中很少出現(xiàn)脫片現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)中首先選取少數(shù)材料染色以摸索適合的染色時(shí)間，伊紅染色時(shí)間依次按3min、4min、5min進(jìn)行實(shí)驗(yàn)探索，最終確定伊紅中浸泡5min，蘇木精中浸泡1min為宜。石蠟切片是組織學(xué)常規(guī)制片技術(shù)中最為廣泛應(yīng)用的方法，本實(shí)驗(yàn)在借鑒傳統(tǒng)植物石蠟切片技術(shù)基礎(chǔ)上摸索了一套適合樟子松松針石蠟切片的制作條件和方法。切片的質(zhì)量不僅和材料自身的特性以及實(shí)驗(yàn)操作的室溫相關(guān)，還和每一步驟的規(guī)范操作與控制相關(guān)，所以還需要在不斷摸索和探討中加以完善。

參考文獻(xiàn)：

[1] 楊捷頻.常規(guī)石蠟切片方法的改良[J].生物學(xué)雜志，2006，23（1）：0045-0046.

[2] 朱莉艷.石蠟切片龜裂的原因分析[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2008，18（10）：634-635.

[3] 帥煥麗，楊途熙，魏安智，等.杏花芽石蠟切片方法的改良 [J] .果樹(shù)學(xué)報(bào).2011，28（3）：536-539.

摘 要：以樟子松松針為材料，結(jié)合松針的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，對(duì)石蠟切片制作條件進(jìn)行摸索。在FAA固定劑配比中采用70%乙醇；粘片時(shí)材料置于40℃水浴鍋中展開(kāi)，用防脫載玻片撈取，置35℃烘箱24h；松針切8um厚度，染色條件為伊紅5min，蘇木精1min條件下，獲得的切片效果較好。

關(guān)鍵詞：樟子松；松針；石蠟切片

樟子松又名海拉爾松，是我國(guó)三北地區(qū)主要優(yōu)良造林樹(shù)種之一。樟子松葉兩針一束，稀有三針。石蠟切片技術(shù)是觀察研究動(dòng)植物形態(tài)發(fā)育和內(nèi)部構(gòu)造的重要技術(shù)，但對(duì)于不同植物組織制片需要不同的具體條件，切片的質(zhì)量不僅和材料自身的特性以及實(shí)驗(yàn)操作的室溫相關(guān)，還和固定、脫水、透明、浸蠟、染色等每一步驟的規(guī)范操作和時(shí)間控制相關(guān)，因而需要根據(jù)植物的組織結(jié)構(gòu)特點(diǎn)摸索適用的制片方法。本實(shí)驗(yàn)在傳統(tǒng)植物石蠟切片技術(shù)的基礎(chǔ)上，結(jié)合樟子松松針結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，對(duì)固定、脫水、粘片、染色等環(huán)節(jié)進(jìn)行了摸索，以便更好地觀察松針的微觀形態(tài)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料采自春季凈月潭公園樟子松林，選取新鮮、幼嫩松針進(jìn)行石蠟制片。

1.2 試劑配制

FAA固定劑：70%乙醇：冰醋酸：37%甲醛=90： 5： 5

乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)梯度溶液：70%、80%、85%、90%、95%、100%

伊紅染液：稱取1g伊紅溶于100ml蒸餾水中，加入1～2%冰醋酸10滴。

其他試劑常規(guī)配制。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

依據(jù)傳統(tǒng)的石蠟切片流程：固定、脫水、透明、浸蠟、包埋及修蠟、切片、粘片、脫蠟及染色、封片，著重在脫水、透明、透蠟、包埋、染色等步驟根據(jù)樟子松松針的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)進(jìn)行摸索改進(jìn)。選取染色效果優(yōu)良、完整的切片在OlympusDPController數(shù)碼顯微系統(tǒng)下進(jìn)行顯微觀察并拍照。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同固定、包埋時(shí)間對(duì)切片的影響

單一固定劑使用時(shí)乙醇會(huì)使原生質(zhì)收縮，甲醛的滲透力較慢，冰醋酸使組織發(fā)脹，混合固定劑FAA使用方便，效果較好，應(yīng)用也最廣。松針質(zhì)地較堅(jiān)硬，F(xiàn)AA固定液配制中使用70%乙醇，滲透力最好，同時(shí)具備一定的脫水效果。實(shí)驗(yàn)中曾采用過(guò)1h、1.5h、2h固定時(shí)間，1h、1.5h都會(huì)在切片階段發(fā)生較嚴(yán)重的碎片現(xiàn)象，2h切片效果好。（圖A1、A2）

由于實(shí)驗(yàn)時(shí)間在春夏之交，溫度有較為明顯的變化，加上材料質(zhì)地較硬，故選擇熔點(diǎn)較高的蠟包埋。包埋后將蠟塊置于4℃冰箱中充分凝固。切片操作分別在蠟塊凝固3d、5d、7d進(jìn)行，放置3d、5d的蠟塊在切片過(guò)程中均出現(xiàn)較為嚴(yán)重的材料與石蠟的分離情況，放置7d的蠟塊較少出現(xiàn)上述情況，說(shuō)明凝固效果比較好，也使浸蠟更為充分。（圖B1、B2）

2.2 不同切片厚度對(duì)切片效果的影響

在其他實(shí)驗(yàn)條件不變的情況下，曾選擇5um、8um、10um厚度進(jìn)行切片，5um切片容易出現(xiàn)不完整現(xiàn)象，8um、10um切片效果未有明顯差異。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，切片的質(zhì)量除了與前面的固定、脫水等步驟相關(guān)外，切片刀是決定因素，刀片必須鋒利，否則在切片時(shí)蠟片會(huì)自行卷起或皺起，或會(huì)使組織出現(xiàn)傷痕，甚至使切片破碎、不完整。（圖C1、C2）

A1 固定2h，凝固3d；A2 固定2h，凝固7d；

B1 固定2h，厚度5um；B2 固定2h，厚度8um；

C1 固定1h，染色4min；C2 固定2h，染色4min

3 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)合材料特點(diǎn)對(duì)傳統(tǒng)石蠟切片方法進(jìn)行條件摸索，除上述提及的固定、浸蠟、包埋及切片外，脫水、粘片、染色等環(huán)節(jié)如果處理不當(dāng)也會(huì)影響切片效果。為使材料不致收縮，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了適合松針的乙醇梯度，同時(shí)松針在無(wú)水乙醇中的浸泡時(shí)間略長(zhǎng)，保證脫水徹底。本實(shí)驗(yàn)由于所切取的材料小，又輕又薄，故粘片時(shí)只需將其置于39℃水浴鍋中，讓其充分展開(kāi)，再用防脫載玻片撈取，擺正位置，吸去多余水分， 置35℃烘箱24h即可。該方法操作簡(jiǎn)便，在后續(xù)步驟中很少出現(xiàn)脫片現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)中首先選取少數(shù)材料染色以摸索適合的染色時(shí)間，伊紅染色時(shí)間依次按3min、4min、5min進(jìn)行實(shí)驗(yàn)探索，最終確定伊紅中浸泡5min，蘇木精中浸泡1min為宜。石蠟切片是組織學(xué)常規(guī)制片技術(shù)中最為廣泛應(yīng)用的方法，本實(shí)驗(yàn)在借鑒傳統(tǒng)植物石蠟切片技術(shù)基礎(chǔ)上摸索了一套適合樟子松松針石蠟切片的制作條件和方法。切片的質(zhì)量不僅和材料自身的特性以及實(shí)驗(yàn)操作的室溫相關(guān)，還和每一步驟的規(guī)范操作與控制相關(guān)，所以還需要在不斷摸索和探討中加以完善。

參考文獻(xiàn)：

[1] 楊捷頻.常規(guī)石蠟切片方法的改良[J].生物學(xué)雜志，2006，23（1）：0045-0046.

[2] 朱莉艷.石蠟切片龜裂的原因分析[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2008，18（10）：634-635.

[3] 帥煥麗，楊途熙，魏安智，等.杏花芽石蠟切片方法的改良 [J] .果樹(shù)學(xué)報(bào).2011，28（3）：536-539.

摘 要：以樟子松松針為材料，結(jié)合松針的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，對(duì)石蠟切片制作條件進(jìn)行摸索。在FAA固定劑配比中采用70%乙醇；粘片時(shí)材料置于40℃水浴鍋中展開(kāi)，用防脫載玻片撈取，置35℃烘箱24h；松針切8um厚度，染色條件為伊紅5min，蘇木精1min條件下，獲得的切片效果較好。

關(guān)鍵詞：樟子松；松針；石蠟切片

樟子松又名海拉爾松，是我國(guó)三北地區(qū)主要優(yōu)良造林樹(shù)種之一。樟子松葉兩針一束，稀有三針。石蠟切片技術(shù)是觀察研究動(dòng)植物形態(tài)發(fā)育和內(nèi)部構(gòu)造的重要技術(shù)，但對(duì)于不同植物組織制片需要不同的具體條件，切片的質(zhì)量不僅和材料自身的特性以及實(shí)驗(yàn)操作的室溫相關(guān)，還和固定、脫水、透明、浸蠟、染色等每一步驟的規(guī)范操作和時(shí)間控制相關(guān)，因而需要根據(jù)植物的組織結(jié)構(gòu)特點(diǎn)摸索適用的制片方法。本實(shí)驗(yàn)在傳統(tǒng)植物石蠟切片技術(shù)的基礎(chǔ)上，結(jié)合樟子松松針結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，對(duì)固定、脫水、粘片、染色等環(huán)節(jié)進(jìn)行了摸索，以便更好地觀察松針的微觀形態(tài)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料采自春季凈月潭公園樟子松林，選取新鮮、幼嫩松針進(jìn)行石蠟制片。

1.2 試劑配制

FAA固定劑：70%乙醇：冰醋酸：37%甲醛=90： 5： 5

乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)梯度溶液：70%、80%、85%、90%、95%、100%

伊紅染液：稱取1g伊紅溶于100ml蒸餾水中，加入1～2%冰醋酸10滴。

其他試劑常規(guī)配制。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

依據(jù)傳統(tǒng)的石蠟切片流程：固定、脫水、透明、浸蠟、包埋及修蠟、切片、粘片、脫蠟及染色、封片，著重在脫水、透明、透蠟、包埋、染色等步驟根據(jù)樟子松松針的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)進(jìn)行摸索改進(jìn)。選取染色效果優(yōu)良、完整的切片在OlympusDPController數(shù)碼顯微系統(tǒng)下進(jìn)行顯微觀察并拍照。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同固定、包埋時(shí)間對(duì)切片的影響

單一固定劑使用時(shí)乙醇會(huì)使原生質(zhì)收縮，甲醛的滲透力較慢，冰醋酸使組織發(fā)脹，混合固定劑FAA使用方便，效果較好，應(yīng)用也最廣。松針質(zhì)地較堅(jiān)硬，F(xiàn)AA固定液配制中使用70%乙醇，滲透力最好，同時(shí)具備一定的脫水效果。實(shí)驗(yàn)中曾采用過(guò)1h、1.5h、2h固定時(shí)間，1h、1.5h都會(huì)在切片階段發(fā)生較嚴(yán)重的碎片現(xiàn)象，2h切片效果好。（圖A1、A2）

由于實(shí)驗(yàn)時(shí)間在春夏之交，溫度有較為明顯的變化，加上材料質(zhì)地較硬，故選擇熔點(diǎn)較高的蠟包埋。包埋后將蠟塊置于4℃冰箱中充分凝固。切片操作分別在蠟塊凝固3d、5d、7d進(jìn)行，放置3d、5d的蠟塊在切片過(guò)程中均出現(xiàn)較為嚴(yán)重的材料與石蠟的分離情況，放置7d的蠟塊較少出現(xiàn)上述情況，說(shuō)明凝固效果比較好，也使浸蠟更為充分。（圖B1、B2）

2.2 不同切片厚度對(duì)切片效果的影響

在其他實(shí)驗(yàn)條件不變的情況下，曾選擇5um、8um、10um厚度進(jìn)行切片，5um切片容易出現(xiàn)不完整現(xiàn)象，8um、10um切片效果未有明顯差異。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，切片的質(zhì)量除了與前面的固定、脫水等步驟相關(guān)外，切片刀是決定因素，刀片必須鋒利，否則在切片時(shí)蠟片會(huì)自行卷起或皺起，或會(huì)使組織出現(xiàn)傷痕，甚至使切片破碎、不完整。（圖C1、C2）

A1 固定2h，凝固3d；A2 固定2h，凝固7d；

B1 固定2h，厚度5um；B2 固定2h，厚度8um；

C1 固定1h，染色4min；C2 固定2h，染色4min

3 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)合材料特點(diǎn)對(duì)傳統(tǒng)石蠟切片方法進(jìn)行條件摸索，除上述提及的固定、浸蠟、包埋及切片外，脫水、粘片、染色等環(huán)節(jié)如果處理不當(dāng)也會(huì)影響切片效果。為使材料不致收縮，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了適合松針的乙醇梯度，同時(shí)松針在無(wú)水乙醇中的浸泡時(shí)間略長(zhǎng)，保證脫水徹底。本實(shí)驗(yàn)由于所切取的材料小，又輕又薄，故粘片時(shí)只需將其置于39℃水浴鍋中，讓其充分展開(kāi)，再用防脫載玻片撈取，擺正位置，吸去多余水分， 置35℃烘箱24h即可。該方法操作簡(jiǎn)便，在后續(xù)步驟中很少出現(xiàn)脫片現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)中首先選取少數(shù)材料染色以摸索適合的染色時(shí)間，伊紅染色時(shí)間依次按3min、4min、5min進(jìn)行實(shí)驗(yàn)探索，最終確定伊紅中浸泡5min，蘇木精中浸泡1min為宜。石蠟切片是組織學(xué)常規(guī)制片技術(shù)中最為廣泛應(yīng)用的方法，本實(shí)驗(yàn)在借鑒傳統(tǒng)植物石蠟切片技術(shù)基礎(chǔ)上摸索了一套適合樟子松松針石蠟切片的制作條件和方法。切片的質(zhì)量不僅和材料自身的特性以及實(shí)驗(yàn)操作的室溫相關(guān)，還和每一步驟的規(guī)范操作與控制相關(guān)，所以還需要在不斷摸索和探討中加以完善。

參考文獻(xiàn)：

[1] 楊捷頻.常規(guī)石蠟切片方法的改良[J].生物學(xué)雜志，2006，23（1）：0045-0046.

[2] 朱莉艷.石蠟切片龜裂的原因分析[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2008，18（10）：634-635.

[3] 帥煥麗，楊途熙，魏安智，等.杏花芽石蠟切片方法的改良 [J] .果樹(shù)學(xué)報(bào).2011，28（3）：536-539.