鄂西紅豆離體培養(yǎng)及植株再生研究

何碧珠，郜祥雄，彭東輝，王榮文

(1 福建農(nóng)林大學 a 園藝學院，b 藝術與園林學院，福建 福州 350002；2 南靖縣奎洋鎮(zhèn)農(nóng)技站，福建 漳州 363605)

鄂西紅豆離體培養(yǎng)及植株再生研究

何碧珠1a，郜祥雄1a，彭東輝1b，王榮文2

(1 福建農(nóng)林大學 a 園藝學院，b 藝術與園林學院，福建 福州 350002；2 南靖縣奎洋鎮(zhèn)農(nóng)技站，福建 漳州 363605)

【目的】 對外植體采用特殊處理方法，并對不同培養(yǎng)時期的基本培養(yǎng)基進行調(diào)整，以建立高效、快速、繁殖系數(shù)高的鄂西紅豆再生技術體系。【方法】 以成熟度為80%的鄂西紅豆種子為外植體，通過向培養(yǎng)基中添加不同質(zhì)量濃度和配比的植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，篩選適宜的芽誘導培養(yǎng)基、繼代增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，并對誘導生根培養(yǎng)的試管苗進行煉苗移栽，觀察其成活率?！窘Y果】 最適芽誘導培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+維生素B10.1 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6.5 g/L+活性炭1.5 g/L，誘導率達85%；最適芽繼代增殖培養(yǎng)基為WPM+6-BA 1.5 mg/L+KT 0.3 mg/L+TDZ 0.02 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6.5 g/L+活性炭1.5 g/L；無根苗壯苗培養(yǎng)基為WPM+NAA 0.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L+IAA 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6.5 g/L+活性炭1.5 g/L。當無根苗生長到4～5 cm時形成完整植株并轉接到生根培養(yǎng)基上誘導生根，最適生根培養(yǎng)基為1/2WPM+IBA 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L+新型基因誘導生根劑0.05 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6.5 g/L+活性炭1.5 g/L?！窘Y論】 建立的鄂西紅豆再生技術體系可獲得75%～85%的正常萌芽，生根率達85%以上，瓶苗移栽成活率達90%。

鄂西紅豆；組織培養(yǎng)；高效繁殖；高效再生

鄂西紅豆(OrmosiahosieiHemsl & Wils)別名花櫚木、黑樟、烏樟絲、番紅木，屬于蝶形花科(Papilionaceae)紅豆樹屬，是我國特有鄉(xiāng)土種，國家二級珍稀瀕危植物[1]。紅豆樹木材是目前中國紅木家具的主要木材原料，集珍貴用材、藥用材、景觀利用、森林文化于一體，具有極高的經(jīng)濟價值和開發(fā)利用前景。

國際市場上紅豆樹木材被視為木中珍品，其材質(zhì)優(yōu)良，堅實耐腐，收縮性小，紋理美觀，可與桃花心木(Swieteniamahagoni)媲美，因此天然林資源遭到了大量砍伐，加之紅豆樹種群小，種子傳播擴散能力和自然再生能力差，造成現(xiàn)有天然資源大量減少，分布范圍日益縮小，成齡樹日益稀少，目前主要以風水林保留于村口和寺廟旁[2-4]。另一方面，由于鄂西紅豆樹結實年齡晚，且有大小年之分，一般在樹齡35年左右才開花結實，結果盛期在50年以后，而且通常需間隔3～5年才開花結果。因此，急需發(fā)展紅豆樹人工造林，擴大種群規(guī)模。

有關紅豆樹離體芽誘導并大量繁殖的研究尚未見報道，僅見范輝華等[5]用紅豆樹根蘗苗促萌形成的枝條為外植體進行組織培養(yǎng)誘導成苗，從外植體取材方式和不同濃度激素組合方面進行研究，但未形成大量完整植株。本研究通過對紅豆樹外植體滅菌途徑和材料處理方法的篩選、基本培養(yǎng)基的適時調(diào)整、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的選擇等，擬建立高效、快速、高繁殖系數(shù)的鄂西紅豆再生技術體系，以獲得大量完整的再生植株，培育出大量微體誘導繁殖的優(yōu)質(zhì)鄂西紅豆樹種苗，為鄂西紅豆樹的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 材 料

在福建省古田縣平湖沿河岸邊選擇優(yōu)良的野生鄂西紅豆作為母樹，取當年結實、籽粒飽滿、無病蟲害、成熟度約80%的莢果，用濕沙布包裹莢果后帶回實驗室，置4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 外植體的處理

用洗衣粉漂洗莢果表面后置流水下滴洗0.5～1 h，雙蒸水沖洗2～3遍，在超凈工作臺上用體積分數(shù)75%酒精消毒30 s后，再加入1 g/L升汞(HgCl2)處理13～15 min，用無菌水沖3～4遍，并用消毒濾紙吸干材料表面水分，將莢果放在滅菌培養(yǎng)皿上，用鑷子取出并選擇均勻飽滿的種子，使用適當機械力(用槍狀鑷夾住種子并用手術刀切下)去除堅硬種子外殼生長點部位的1/3，接入芽誘導培養(yǎng)基中，每瓶接2粒種子，接種后先暗培養(yǎng)8 d，萌發(fā)后移至溫度為(23±2) ℃的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，光照強度1 000～1 500 lx，光照時間12 h/d。

1.3 初代芽誘導

1.3.1 基本培養(yǎng)基對鄂西紅豆種子離體培養(yǎng)的影響 將處理好的種子分別接種于MS、1/2MS和WPM等基本培養(yǎng)基中[6-10]，每升附加蔗糖30 g，瓊脂粉6.5 g，pH值5.8，在 (23±2) ℃下暗培養(yǎng)8 d，萌發(fā)后再于光照強度1 000 lx、光照時間12 h/d條件下培養(yǎng)，測試不同基本培養(yǎng)基對種子離體培養(yǎng)的影響。每種培養(yǎng)基接10瓶，重復3次，每瓶接入2粒種子，培養(yǎng)40 d時測算誘導率(誘導率=(每組萌發(fā)種子粒數(shù)/每組接種種子粒數(shù))×100%)，從中篩選最適宜種子離體生長的基本培養(yǎng)基。

1.3.2 植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對種子離體培養(yǎng)的影響 種子培養(yǎng)初期以MS為基本培養(yǎng)基，每升附加維生素B10.1 mg，蔗糖30 g，瓊脂粉6.5 g，活性炭1.5 g，pH值5.8，然后將不同質(zhì)量濃度的6-BA、TDZ、NAA和KT進行組合(詳見表1)后加入，共計10個處理，每處理10瓶，重復3次，每瓶接入2粒種子，在 (23±2) ℃下培養(yǎng)，測試不同種類和質(zhì)量濃度的植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對種子培養(yǎng)的影響。培養(yǎng)40 d時測算誘導率。

1.4 繼代芽增殖

當種子抽出莖葉并長出胚根時，可觀察到下胚軸處分化出不定芽的現(xiàn)象，將已分化芽的下胚軸切下(在下胚軸切口處又會分化出新的不定芽)，并切取莖段，將其轉入增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)，以WPM為基本培養(yǎng)基，每升附加不同組合的植物生長調(diào)節(jié)劑(表2)，另加入蔗糖30 g、瓊脂粉 6.5 g、活性炭1.5 g，pH值5.8，于 (23±2) ℃下培養(yǎng)，光照強度1 500 lx，每日光照12 h。試驗共7個處理，每處理接種10瓶，重復3次，每瓶接入3個莖段，每組接種90個莖段，培養(yǎng)40 d時統(tǒng)計各處理的誘導芽數(shù)并測定芽苗長度，從中篩選最適宜的增殖培養(yǎng)基。

表1 鄂西紅豆種子離體培養(yǎng)時基本培養(yǎng)基中的不同植物生長調(diào)節(jié)劑組合Table 1 Different combinations of plant growth regulators in basic culturing mediumin vitro with Ormosia hosiei Hemsl & Wils seeds mg/L

表2 鄂西紅豆種子離體培養(yǎng)時的繼代芽增殖誘導培養(yǎng)基配方Table 2 Medium formulations for shoot induction in vitro with Ormosia hosiei Hemsl & Wils seeds mg/L

1.5 壯苗培養(yǎng)

當培養(yǎng)芽苗長至2～3 cm且莖上長出若干小葉時，用手術刀從芽叢上切下單株無根小苗并接到壯苗培養(yǎng)基上進行壯苗培養(yǎng)(木本植物經(jīng)壯苗培養(yǎng)有利于生根誘導以及移栽后成活率和苗木成品率的提高)。以WPM為基本培養(yǎng)基，每升附加不同質(zhì)量濃度NAA、IBA和IAA組合及蔗糖30 g、瓊脂粉6.5 g、活性炭1.5 g，pH值5.8，在 (23±2) ℃下培養(yǎng)，光照強度1 500 lx，每日光照12 h。培養(yǎng)50 d時測定新生莖的莖粗和長度。

1.6 生根培養(yǎng)

當經(jīng)壯苗培養(yǎng)的苗長到3～4 cm時，將其轉接到生根培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng)。以1/2 WPM為生根基本培養(yǎng)基，每升加入蔗糖30 g、瓊脂粉6.5 g、活性炭1.5 g，并附加不同質(zhì)量濃度的IBA和NAA，同時每組培養(yǎng)基中每升加入0.01～0.05 mg的新型基因誘導生根劑，pH值調(diào)至5.8，溫度 (23±2) ℃，光照強度 1 500 lx，每日光照培養(yǎng)12 h。試驗共9個處理，每處理接種10瓶，重復3次，每瓶接入2個植株，每組接種60個植株，培養(yǎng)30 d時統(tǒng)計生根率、平均生根數(shù)和最長根長，篩選最適宜的生根培養(yǎng)基。生根率=(每組生根組培苗數(shù)/每組接種組培苗數(shù))×100%；平均生根數(shù)=每組組培苗生的根數(shù)/每組接種組培苗數(shù)。

2 結果與分析

2.1 鄂西紅豆種子離體培養(yǎng)時初代芽誘導培養(yǎng)基的選擇

2.1.1 不同基本培養(yǎng)基對種子離體培養(yǎng)的影響 由表3和圖1可知，將處理好的種子培養(yǎng)40 d后，WPM培養(yǎng)基中的種胚長出淡綠的葉，莖段較細長，根較短無側根；隨無機鹽質(zhì)量濃度的降低，在1/2MS培養(yǎng)基中，芽長逐漸變短，莖變得細弱，葉色也逐漸開始發(fā)黃；MS培養(yǎng)基中，離體種胚莖段變得較長、較粗，葉色也變得深綠，并長出葉子。綜上認為，鄂西紅豆種胚誘導適宜的基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。

表3 不同基本培養(yǎng)基對鄂西紅豆離體種胚培養(yǎng)的影響Table 3 Effect of basic medium on Ormosia hosiei Hemsl & Wils embryo cultured in vitro

圖1 鄂西紅豆離體種胚在3種基本培養(yǎng)基中的生長情況

2.1.2 不同植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對離體種胚培養(yǎng)的影響 由表4可知，以MS為基本培養(yǎng)基，將鄂西紅豆種子接種于含有不同質(zhì)量濃度6-BA的培養(yǎng)基(M1-M3)中，40 d后的調(diào)查結果顯示，隨著6-BA質(zhì)量濃度的遞增，種子抽出莖葉的長度遞降，胚根長度變短甚至不萌發(fā)。在6-BA質(zhì)量濃度為0.5 mg/L 時，胚軸有少數(shù)突起的芽；當質(zhì)量濃度增加至1.0 mg/L時，誘導繁殖芽數(shù)量增加；但當6-BA質(zhì)量濃度增高到2.0 mg/L時，突起變少且不能分化為芽，并逐漸褐化。將鄂西紅豆種子接種于含有不同質(zhì)量濃度TDZ的培養(yǎng)基(M4-M6)中，在TDZ質(zhì)量濃度較高時，莖葉不抽出，甚至形成愈傷組織；在TDZ質(zhì)量濃度為0.01 mg/L時，即低質(zhì)量濃度TDZ有利于誘導繁殖叢生芽。與6-BA相比，低質(zhì)量濃度的TDZ更利于不定芽的分化，但對莖葉和胚根生長的抑制較為明顯，而且隨TDZ質(zhì)量濃度的升高，其對胚根發(fā)育的抑制增強；當其質(zhì)量濃度提高至0.04 mg/L時，種子無生長且褐化。

表4 不同植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對鄂西紅豆離體種胚培養(yǎng)的影響Table 4 Effect of different plant growth regulators on Ormosia hosiei Hemsl & Wils embryo cultured in vitro

由表4還可以看出，在低質(zhì)量濃度的6-BA或TDZ中加入一定質(zhì)量濃度的NAA，更有利于莖葉的抽出與生長，且NAA質(zhì)量濃度為0.5 mg/L的效果比0.1 mg/L更好。表4中6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L組合(M8)對鄂西紅豆離體種胚的培養(yǎng)效果最好，莖葉抽出最高，葉色深綠，胚軸處有3～4個不定芽長出，胚根長。另外，隨著KT質(zhì)量濃度的增加，其對胚軸伸長的促進作用增強。

綜上可知，最有利于種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+維生素B10.1 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6.5 g/L+活性炭1.5 g/L。

2.2 鄂西紅豆種子離體培養(yǎng)時繼代芽增殖培養(yǎng)基的選擇

由表5可知，不同質(zhì)量濃度的激素配比對鄂西紅豆種子離體培養(yǎng)時繼代芽的增殖具有不同的效果。將抽出莖葉并長出胚根的種子接種在增殖培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，40 d后觀察發(fā)現(xiàn)，在不加任何激素的WPM基本培養(yǎng)基(w1)中，接種的材料不能增殖，伸長極慢甚至不伸長，最終老化而死亡。當培養(yǎng)基中附加6-BA 為1.0和1.5 mg/L(w2和w3)時，叢生芽的增殖隨6-BA質(zhì)量濃度的增加而增多，且叢生有效芽苗變多；當6-BA質(zhì)量濃度為2.0 mg/L(w4)時，叢生芽密集，但不伸長，有效苗少，不利于下一步的增殖和生根培養(yǎng)。當培養(yǎng)基中附加TDZ 0.01～0.04 mg/L(w5-w7)時，芽叢的增殖隨TDZ質(zhì)量濃度的增加而增多，但有效芽苗變少；當TDZ質(zhì)量濃度為0.04 mg/L(w7)時，芽叢密集但不伸長，有效苗少，有的變成愈傷組織，不利于后續(xù)的增殖、壯苗和生根培養(yǎng)。另據(jù)觀察，芽生長速度隨著NAA和KT質(zhì)量濃度的增加而增快。表5結果表明，培養(yǎng)基以WPM+6-BA 1.5 mg/L+KT 0.3 mg/L+TDZ 0.02 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6.5 g/L+活性炭1.5 g/L對芽的增殖與伸長效果最好，平均誘導芽數(shù)達3.0個，芽苗平均長3.9 cm，且生長旺盛健壯，利于生根成苗及移栽成活。圖2為鄂西紅豆種子離體培養(yǎng)40 d后繼代芽在增殖培養(yǎng)基中的生長情況。

表5 不同配方培養(yǎng)基對鄂西紅豆種子離體培養(yǎng)時繼代芽增殖的影響Table 5 Effect of different medium on buds induction of Ormosia hosiei Hemsl & Wils seeds cultured in vitro

注：同列數(shù)據(jù)后標不同小寫字母者表示差異顯著(P<0.05)，下表同。

Note:Different lowercase letters indicate significant difference (P<0.05).The same below.

圖2 鄂西紅豆種子離體培養(yǎng)時繼代芽在增殖培養(yǎng)基中的生長情況(40 d)

2.3 鄂西紅豆種子離體培養(yǎng)時壯苗培養(yǎng)基的選擇

將繼代芽經(jīng)增殖培養(yǎng)得到的芽叢用手術刀切下帶愈傷組織的單株無根小苗并接到壯苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)7 d內(nèi)就可以長出新芽和新葉，且苗生長也更快；由表6可看出，培養(yǎng)50 d后新生莖平均長度為3.35 cm，莖粗3.91 mm。

將繼代芽經(jīng)增殖培養(yǎng)得到的芽叢接入不同質(zhì)量濃度激素配比的壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)50 d，結果發(fā)現(xiàn)在只加入一種生長激素NAA或IBA的培養(yǎng)基中，鄂西紅豆苗生長慢，植株瘦弱，葉片少且顏色偏黃。同時加入NAA和IBA明顯有利于植株的生長，且隨著IBA質(zhì)量濃度的增加促生效果更好。當同時加入NAA、IBA和IAA時，其對新生莖的伸長效果更顯著，新生莖平均長度超過4.0 cm，在NAA 0.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L+IAA 1.0 mg/L的組合中，植株長勢最好，新生莖長度為4.29 cm，莖粗5.12 mm，枝葉多，葉色深綠。表6結果表明，WPM+NAA 0.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L+IAA 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6.5 g/L+活性炭1.5 g/L為適宜的壯苗培養(yǎng)基，瓶苗生長旺盛、健壯，利于生根成苗。圖3為鄂西紅豆種子離體培養(yǎng)時單株小苗轉接入壯苗培養(yǎng)基的生長情況。

表6 不同配方培養(yǎng)基對鄂西紅豆種子離體培養(yǎng)時壯苗培養(yǎng)的影響(50 d)Table 6 Effect of different medium on strong plantlet of Ormosia hosiei Hemsl & Wils seeds cultured in vitro after 50 d

圖3 鄂西紅豆種子離體培養(yǎng)時單株小苗轉接入壯苗培養(yǎng)基的生長情況

2.4 鄂西紅豆種子離體培養(yǎng)時生根培養(yǎng)基的選擇

由表7可以看出，在1/2WPM培養(yǎng)基中加入不同的植物生長激素，培養(yǎng)30 d后，就生根率、生根數(shù)、最長根長而言，IBA比NAA更有利于鄂西紅豆生根，且嫩枝基部不形成愈傷組織。生根率隨著IBA質(zhì)量濃度(從0.5 mg/L到1.5 mg/L)的增加而增大，而嫩枝除了生根外，高度幾乎沒有增加。加入低質(zhì)量濃度的NAA(0.5 mg/L)對生根無效，且會長出愈傷組織，隨著NAA質(zhì)量濃度的增加，生根率提高，嫩枝生長勢比加入IBA的組別高。

表7 不同配方培養(yǎng)基對鄂西紅豆種子離體培養(yǎng)過程中嫩枝生根的影響Table 7 Effect of different medium on rooting of Ormosia hosiei Hemsl & Wils seeds cultured in vitro

由表7還可以看出，新型基因誘導生根劑的質(zhì)量濃度對鄂西紅豆生根有顯著影響，隨著新型基因誘導生根劑質(zhì)量濃度的增加，生根率、生根數(shù)均增加。此外，同時加入IBA和NAA，生根率也有顯著提高，且嫩枝明顯長高，其中1/2WPM+IBA 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L+新型基因誘導生根劑 0.05 mg/L效果最好，培養(yǎng)30 d后觀察到平均生根率為86.0%，每個嫩枝平均長4.16條根，最長根長為6.15 cm。雖然1/2WPM+IBA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L的培養(yǎng)基也表現(xiàn)出較高的生根率，但根質(zhì)量不好，有些會發(fā)黑，不能移植。圖4反映了不同植物生長激素對鄂西紅豆組培苗生根的影響。

圖4 不同植物生長激素對鄂西紅豆組培苗生根的影響
Fig.4 Effect of different plant growth regulators on rooting of tissue cultured plantlets ofOrmosiahosieiHemsl & Wils

2.5 鄂西紅豆組培苗的煉苗移栽

誘導生根培養(yǎng)出的試管苗生長至5～6 cm高時，一般可長出3～5條根，3～6片葉，葉長2～3 cm。將試管苗先移至自然光下煉苗4～5 d，再打開瓶蓋煉苗1～2 d；然后取出植株，洗去附著在根系上的培養(yǎng)基，將小苗移栽到配好的基質(zhì)中，基質(zhì)成分為泥炭土、黃土、細砂、珍珠巖，體積比為50∶30∶10∶5。移栽容器為8 cm口徑的塑料小盆，每盆種植1株，共種植100株。移栽瓶苗先在溫室里培養(yǎng)2～3周，溫度控制在(25±2) ℃，相對濕度75%～85%。然后轉到遮去50%光照的條件下培養(yǎng)4周，最后移栽于室外苗圃，但應避免在陽光直射環(huán)境下培養(yǎng)，1個月后調(diào)查成活率可以達到90%以上，獲得了鄂西紅豆健壯、完整的植株(圖5)。

表8 鄂西紅豆組培苗的移栽成活率及生長情況Table 8 Survival rate and growth of tissue cultured plantlets of Ormosia hosiei Hemsl & Wils after transplanting

圖5 移栽成活的鄂西紅豆組培苗

3 討論與結論

3.1 討 論

采用鄂西紅豆種胚進行鄂西紅豆的組織培養(yǎng)主要包括4個環(huán)節(jié)，即成熟度80%種胚的誘導、繼代芽的增殖、單株無根苗的壯苗培養(yǎng)以及生根誘導。通過反復試驗，本研究成功建立了一套鄂西紅豆離體再生和高效繁殖技術體系，并成功運用三維立體空間(此專利已授權)進行產(chǎn)業(yè)化、規(guī)?；a(chǎn)，為鄂西紅豆的大面積種植提供了技術支持，但同時也應注意以下幾個方面的問題：

3.1.1 基本培養(yǎng)基的選擇 臧新等[11]用MS和B5等培養(yǎng)基對南方紅豆杉的離體胚進行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)不同培養(yǎng)基對胚的誘導影響差別不大。而本研究發(fā)現(xiàn)，不同基本培養(yǎng)基對鄂西紅豆離體種胚培養(yǎng)影響較大。MS培養(yǎng)基能促進根系產(chǎn)生和莖葉生長，是鄂西紅豆離體種胚培養(yǎng)最適宜的基本培養(yǎng)基。MS培養(yǎng)基對南方紅豆杉莖段生長亦較佳，但莖瘦弱且不利其根系的生長。1/2MS培養(yǎng)基不適于鄂西紅豆的種胚培養(yǎng)，可能是鄂西紅豆莖伸長生長需要高質(zhì)量濃度的無機鹽離子，根生長則以低質(zhì)量濃度無機鹽離子為宜，而莖葉和根的平衡生長則需要大量元素的協(xié)調(diào)配比。

3.1.2 外植體的選擇 從野生鄂西紅豆優(yōu)良母樹上選取當年結實、成熟度為80%且籽粒飽滿的種子為材料。接種時發(fā)現(xiàn)有些種子的種胚已萌動，有些未萌動。萌動后的鄂西紅豆種子具有較強的生長勢和生理活性，而且此時內(nèi)源激素含量高于其他時期；而未萌動的種子中發(fā)芽抑制物的含量較高[12-13]，會抑制種子的萌發(fā)生長。試驗中觀察發(fā)現(xiàn)，萌動后成熟度為80%的種胚更容易誘導出芽，這可能與鄂西紅豆種胚內(nèi)源激素隨種胚成熟度而發(fā)生變化有關，而常規(guī)木本植物種子育苗時需要經(jīng)過一定時間的沙藏處理才能發(fā)芽，而且出芽參差不齊。

3.1.3 增殖培養(yǎng)中的問題 在增殖培養(yǎng)中存在一個矛盾：若要提高增殖倍數(shù)，常需增加植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的用量，但得到的芽苗往往比較細弱；而若要讓苗長得完整、強壯，則增殖倍數(shù)就會相對降低。本研究結果表明：芽的增殖隨6-BA質(zhì)量濃度的增加而增加，且叢生芽生長旺盛，有效芽苗多；當6-BA質(zhì)量濃度大于1.5 mg/L時，叢生芽密集，但不伸長，有的變成愈傷組織，有效苗少。因此以WPM+6-BA 1.5 mg/L+KT 0.3 mg/L+TDZ 0.02 mg/L+NAA 0.5 mg/L培養(yǎng)基對芽的增殖與伸長效果最好，平均誘導芽數(shù)達3.0個，芽苗平均長達3.9 cm，且生長旺盛健壯，利于擴繁及生根成苗。這與黃烈健等[14]對馬占相思優(yōu)樹的研究結果相似。

3.1.4 生根過程中的問題 在誘導生根過程中，發(fā)現(xiàn)在芽的繼代增殖環(huán)節(jié)中，如果長時間未進行繼代，培養(yǎng)基體積變小，有些芽可直接生根，說明在誘導生長過程中合理適時調(diào)整培養(yǎng)基配比有利于木本植物的生根。但為了避免繼代芽直接生根而導致試管苗生根過程緩慢，在繼代培養(yǎng)環(huán)節(jié)中，間隔1個半月應更換繼代培養(yǎng)基。上述培養(yǎng)基對紅豆樹生根的影響可能是生根培養(yǎng)基中加入的生根劑所致，陸孝建[15]的研究中也有同樣的問題，有待進一步研究。

3.2 結 論

本研究以野生優(yōu)良鄂西紅豆母樹成熟度80%的種子為外植體，建立了鄂西紅豆種胚植株再生及繁殖技術體系。初代芽誘導培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+維生素B10.1 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6.5 g/L+活性炭1.5 g/L；繼代芽增殖培養(yǎng)基為WPM+6-BA 1.5 mg/L+KT 0.3 mg/L+TDZ 0.02 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6.5 g/L+活性炭1.5 g/L；壯苗培養(yǎng)基為WPM+NAA 0.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L+IAA 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6.5 g/L+活性炭1.5 g/L，生根培養(yǎng)基為1/2WPM + IBA 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L+新型基因誘導生根劑0.05 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6.5 g/L+活性炭1.5 g/L。

研究結果表明：采用鄂西紅豆成熟度80%的種子進行種胚組織培養(yǎng)并繁育生產(chǎn)用苗，在技術上完整、可靠，通過該技術建立的再生體系可獲得75%～85%的正常萌芽，且繼代增殖效果良好，經(jīng)壯苗和生根培養(yǎng)生根率達85%以上，瓶苗移栽成活率可達90%以上。

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Tissue culturing and plantlet regeneration ofOrmosiahosieiHemsl & Wils

HE Bi-zhu1a,GAO Xiang-xiong1a,PENG Dong-hui1b,WANG Rong-wen2

(1 aCollegeofHorticulture,bCollegeofLandscapeArchitecture,FujianAgricultureandForestryUniversity,Fuzhou,Fujian350002,China;2AgrotechnicalStation,KuiyangTown,NanjingCounty,Zhangzhou,Fujian363605,China)

【Objective】 An efficient,fast and high propagation coefficient sterile culturing system forOrmosiahosieiHemsl & Wils was established by treating explant with special methods and adjusting basic culture medium at different culturing periods.【Method】 UsingO.hosieiHemsl & Wils seeds with 80% maturity as explants,plant growth regulating substances with different concentrations and combinations were added in the medium to screen appropriate medium for bud induction,subculture multiplication,strong plantlet and rooting.The plantlets were also hardened and transplanted to get the survival rate.【Result】 The optimum medium for bud induction was MS+6-BA 0.5 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+B1Vitamin 0.1 mg/L+Sugar 30 g/L+Agar 6.5 g/L+Activated Carbon 1.5 g/L and the obtained induction rate of embryo was 85%;the optimum medium for bud subculture multiplication was WPM+6-BA 1.5 mg/L+KT 0.3 mg/L+TDZ 0.02 mg/L+NAA 0.5 mg/L+Sugar 30 g/L+Agar 6.5 g/L+Activated Carbon 1.5 g/L;and the optimum medium for strong plantlet was WPM+NAA 0.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L+IAA 1.0 mg/L+Sugar 30 g/L+Agar 6.5 g/L+Activated Carbon 1.5 g/L.A complete plant was formed when the bud grew up to 4-5 cm and it was then transferred to the rooting medium,with the optimum medium of 1/2 WPM+IBA 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L+ABT powder 0.05 mg/L+Sugar 30 g/L+Agar 6.5 g/L+Activated Carbon 1.5 g/L.【Conclusion】 The established sterile culturing system forO.hosieiHemsl & Wils obtained normal budding rate,rooting rate and plantlets transplanting survival rate of 75%-85%,>85% and 90%,respectively.

OrmosiahosieiHemsl & Wils;tissue culture;efficient propagation;efficient regeneration

時間:2015-11-11 16:16DOI：10.13207/j.cnki.jnwafu.2015.12.009

2014-04-10

國家林業(yè)局林業(yè)公益行業(yè)科研專項(201204604)；中央財政林業(yè)科技推廣示范項目(閩[2015]TG18)

何碧珠(1960-)，女，福建福州人，高級實驗師，主要從事園藝植物生物技術及遺傳資源研究。 E-mail:954196684@qq.com

S722.3+7

A

1671-9387(2015)12-0049-09

網(wǎng)絡出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1390.S.20151111.1616.018.html