四川松樹內(nèi)生擬盤多毛孢的多樣性及其防病效果

劉 韓，劉應(yīng)高，李姝江，帥 偉，劉燕云

(1 四川省甘孜州林業(yè)科學(xué)研究所，四川 康定 626001；2 四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，四川 成都 611130)

四川松樹內(nèi)生擬盤多毛孢的多樣性及其防病效果

劉 韓1,2，劉應(yīng)高2，李姝江2，帥 偉1，劉燕云1

(1 四川省甘孜州林業(yè)科學(xué)研究所，四川 康定 626001；2 四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，四川 成都 611130)

【目的】 對四川松樹內(nèi)生擬盤多毛孢Pestalotiopsis的生態(tài)分布及其對松樹病害的防治效果進(jìn)行分析，為松樹病害無公害治理提供理論與實(shí)踐基礎(chǔ)?！痉椒ā?對分布于四川的松樹內(nèi)生擬盤多毛孢的多樣性進(jìn)行調(diào)查統(tǒng)計(jì)，分析樹種、松樹組織、海拔和季節(jié)對內(nèi)生擬盤多毛孢定殖率、Shannon-Weiner指數(shù)和相似性指數(shù)的影響。在此基礎(chǔ)上，篩選對松落針病菌、爛皮病菌、赤枯病菌有拮抗作用的內(nèi)生擬盤多毛孢，浸漬法檢測其對松針的致病性，采用噴霧法和針刺法分別對室內(nèi)盆栽濕地松苗接種拮抗菌和3種病原菌，計(jì)算發(fā)病率、病情指數(shù)和防治效果?！窘Y(jié)果】 濕地松、馬尾松、火炬松中內(nèi)生擬盤多毛孢的多樣性明顯高于華山松和云南松，內(nèi)生擬盤多毛孢在針葉中的分布多于枝和干，其多樣性在海拔較低地區(qū)(400～600 m)相對較高，不同季節(jié)則以春季多樣性最高。此外，散沫擬盤多毛孢(P.lawsoniae)、小孢擬盤多毛孢(P.microspor)和石楠擬盤多毛孢(P.photiniae)對松落針病菌、松爛皮病菌、松赤枯病菌3種病原均有拮抗作用，抑制率達(dá)38.49%～77.42%，其中P.lawsoniae的作用最為明顯，且在致病性測定中對松針無傷害作用。室內(nèi)對濕地松苗病害的防治試驗(yàn)中，P.lawsoniae孢子原液及稀釋液(50倍液和500倍液)對3種病害均表現(xiàn)出了較好的防治效果，防治效果達(dá)40.90%～89.77%。【結(jié)論】 松樹內(nèi)生擬盤多毛孢資源豐富，對松樹病害具有生物防治潛力，其中P.lawsoniae對松樹落針病、爛皮病和赤枯病具有良好的生防前景。

內(nèi)生擬盤多毛孢；多樣性；松樹病害；生物防治

內(nèi)生真菌作為一類特殊而普遍存在于植物組織內(nèi)的類群，可以與宿主建立一系列復(fù)雜的包括互惠、拮抗和中性且三者之間可以相互轉(zhuǎn)化的關(guān)系[1]，有極大的科學(xué)研究價(jià)值和開發(fā)利用潛力。擬盤多毛孢(Pestalotiopsis)作為植物內(nèi)生真菌的重要類群，長期以來被當(dāng)作植物病原菌[2-5]進(jìn)行研究。目前，對該菌的研究主要集中在分類學(xué)[6-7]、生物學(xué)特性[8]及活性次生代謝物質(zhì)[9-10]等方面，也有關(guān)于其在殼斗科、樟科、棕櫚科植物中多樣性的報(bào)道[11]，但作為四川分布最廣且最為重要的造林樹種之一的松樹，針對其內(nèi)生擬盤多毛孢多樣性及生態(tài)分布的系統(tǒng)性研究尚屬空白。

落針病、爛皮病、赤枯病都是對松樹為害嚴(yán)重的病害，受害樹種可達(dá)十余種，從苗木、幼樹到成年樹均可受害，重者可致成片松樹死亡，給許多林區(qū)造成了重大損失，目前對3種病害防治方法的報(bào)道主要是營林措施和化學(xué)藥劑施用[12-14]，但化學(xué)防治往往會(huì)產(chǎn)生巨大藥害。隨著無污染、低成本、作用持久的生物農(nóng)藥在植物病害防治中的廣泛應(yīng)用，越來越多的學(xué)者采用有益微生物對松樹病害進(jìn)行防治。諸如利用木霉對松落針病[15]、松爛皮病[16]的初步抑菌研究及用綠粘帚霉與堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌對松赤枯病的協(xié)同控制研究[17]等。有報(bào)道指出[18]，內(nèi)生擬盤多毛孢對蘋果炭疽病菌(Glomerellacingulata)、番茄灰霉病菌(Botrytiscirerea)、玉米大斑病菌(Exserohilumturcicum)等6種植物病原真菌有較強(qiáng)的抑制作用，但松樹內(nèi)生擬盤多毛孢對松樹本身病害的防治效果至今尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)在前期對四川松樹內(nèi)生擬盤多毛孢分離鑒定[19]的基礎(chǔ)上，探討內(nèi)生擬盤多毛孢在不同松樹種、松樹不同組織、不同季節(jié)和不同海拔的分布規(guī)律，同時(shí)從內(nèi)生擬盤多毛孢資源中篩選對松樹病害病原有良好拮抗作用的菌株，并將其應(yīng)用于病害的生物防治中，以期為松樹病害的無公害治理提供重要的理論與實(shí)踐依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 供試擬盤多毛孢 從四川松樹林區(qū)采集的濕地松(PinuselliotiiEngelm)、馬尾松(PinusmassonianaLanb.)、云南松(PinusyunnanensisFaranch)、華山松(PinusarmandiiFranch.)和火炬松(PinustaedaLinn.)松樹樣本上分離得到11種內(nèi)生擬盤多毛孢[19]，即雕刻擬盤多毛孢(Pestalotiopsiscarver(Guba) P.L.Zhu,Q.X.Ge & T.Xu)、木防已擬盤多毛孢(Pestalotiopsiscocculi(Guba) G.C.Zhao & Li.)、山桃草擬盤多毛孢(Pestalotiopsisgaurae(Guba) A.R.Liu,T.Xu & L.D.Guo,comb.nov.)、異角狀擬盤多毛孢(Pestalotiopsisheterocornis(Guba) Y.X.Chen & G.Wei)、散沫擬盤多毛孢(Pestalotiopsislawsoniae(Mundk. & Kheswalla) Y.X.Chen)、胡枝子擬盤多毛孢(Pestalotiopsislespedezae(Sydow) Bilgrami)、小孢擬盤多毛孢(Pestalotiopsismicrospora(Speg.) Batista & Peres)、忽視擬盤多毛孢(Pestalotiopsisneglecta(Thüm.) Steyaert)、橄欖色擬盤多毛孢(Pestalotiopsisolivacea(Guba) G.C.Zhao & J.He)、石楠擬盤多毛孢(Pestalotiopsisphotiniae(Thüm.) Y.X.Chen)和尤韋可擬盤多毛孢(Pestalotiopsisuvicola(Speg.) Steyaert)。

1.1.2 供試病原菌 包括松落針病菌(Lophodermiumpinastri(Schrad.ex Fr.) Chev)、松爛皮病菌(CenangiumferruginosumFr.ex Fr.)、松赤枯病菌(Pestalotiopsisfunereal(Desm.) Steyaert)，由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)森林保護(hù)省級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 內(nèi)生擬盤多毛孢的多樣性分析

按照不同松樹種、松樹不同組織(枝、葉、干)、不同季節(jié)(春、夏、秋、冬)和不同海拔高度(400，500，600，2 000 m)，對獲得的松樹內(nèi)生擬盤多毛孢菌株進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

1.3 內(nèi)生擬盤多毛孢的抑菌活性

采用平板對峙法[20]測定11種內(nèi)生擬盤多毛孢的抑菌活性，每株內(nèi)生菌重復(fù)3次，培養(yǎng)5d后測量病菌生長半徑，按下式計(jì)算菌落生長抑制率：菌落生長抑制率=(對照菌落凈生長半徑-處理菌落生長趨向半徑)/對照菌落凈生長半徑×100%；以此為依據(jù)篩選出拮抗效果最佳的擬盤多毛孢菌。

1.4 3種拮抗內(nèi)生擬盤多毛孢對松針的致病性

1.4.1 菌懸液的準(zhǔn)備 將對3種病原菌有拮抗作用的內(nèi)生擬盤多毛孢接種于PDA平板上，25～28 ℃培養(yǎng)，產(chǎn)孢后用無菌水配成孢子懸液(104CFU/mL)備用。

1.4.2 致病性測定 選取3年生濕地松為試驗(yàn)對象。采用浸漬法[21]，稱取去除針鞘的整條松針0.5g(5～7枝)，體積分?jǐn)?shù)75%酒精消毒10s后，用無菌水清洗3次，然后向保鮮膜封口的1.5mL無菌離心管中加入1mL孢子液，使松針基部浸入其中。設(shè)原液、稀釋50倍液、稀釋500倍液3個(gè)梯度，以未接菌的培養(yǎng)液(CK1)和無菌水(CK2)為對照。25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每處理重復(fù)3次。于培養(yǎng)24，48，72h觀察記載致病情況，傷害級(jí)別分為5級(jí)(0～4)：0，無明顯反應(yīng)，針葉與對照差別不大；1，1/4以下的針葉出現(xiàn)癥狀；2，1/4～1/2的針葉出現(xiàn)癥狀；3，1/2～2/3 的針葉出現(xiàn)癥狀； 4，2/3以上的針葉出現(xiàn)癥狀。級(jí)別數(shù)值越大表示所受傷害越嚴(yán)重。

1.5 散沫擬盤多毛孢對松樹病害的防治試驗(yàn)

1.5.1 散沫擬盤多毛孢和病原菌懸液的準(zhǔn)備 將散沫擬盤多毛孢和3種病原菌分別接種于PDA平板上，25～28 °C培養(yǎng)，產(chǎn)孢后用無菌水配成孢子懸液(104CFU/mL)備用。

1.5.2 散沫擬盤多毛孢與病原菌的接種與處理 以3年生盆栽濕地松為試驗(yàn)對象，將散沫擬盤多毛孢孢子液采用噴霧法對種苗進(jìn)行噴霧，每隔7d噴施1次，共3次。設(shè)原液、稀釋50倍液、稀釋500倍液3個(gè)梯度，以無菌水為對照，每處理30盆。1個(gè)月后采用針刺接種法[22]將爛皮病菌懸液接種于幼苗的枝干處，將落針病菌和赤枯病菌懸液接種于針葉處，每處理接種100個(gè)點(diǎn)，并對接種部位進(jìn)行保濕。

病原菌接種30d后，按下列方法進(jìn)行病害調(diào)查統(tǒng)計(jì)，并計(jì)算發(fā)病率、病情指數(shù)和防治效果。病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為：0級(jí)，無病斑；1級(jí)，發(fā)病枝條比例或病斑占針葉比例1/3以下；2級(jí)，發(fā)病枝條比例或病斑占針葉比例為1/3～2/3；3級(jí)，發(fā)病枝條比例或病斑占針葉比例為2/3～4/5；4級(jí)，整株死亡。計(jì)算公式為：發(fā)病率(%)=(發(fā)病部位數(shù)/總接種部位數(shù))；病情指數(shù)=[(各病級(jí)數(shù)×代表級(jí)值)/(總數(shù)×發(fā)病最高的病級(jí)數(shù))]×100；防治效果(%)=[(對照病情指數(shù)-處理病情指數(shù))/對照病情指數(shù)]。

1.6 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel2010和SPSS13.0軟件分析處理，用LSD法進(jìn)行差異顯著性多重比較(P<0.05)。

2 結(jié)果與分析

2.1 松樹內(nèi)生擬盤多毛孢的多樣性

2.1.1 松樹種的影響 表1結(jié)果顯示，5種不同松樹間內(nèi)生擬盤多毛孢的組成差異較大。從分離獲得的內(nèi)生擬盤多毛孢菌株數(shù)量和種數(shù)來看，馬尾松、濕地松分別獲得了82株和71株目標(biāo)菌株，而華山松只分離到8株；濕地松上分離到了所有11種中的10種，而華山松和云南松上只分離到了2種。在定殖率的統(tǒng)計(jì)分析中，目標(biāo)菌株在馬尾松、濕地松和火炬松中的定殖率顯著高于云南松、華山松。從Shannon-Weiner多樣性指數(shù)來看，5種松樹內(nèi)生擬盤多毛孢種的Shannon-Weiner指數(shù)從高到低的順序依次為濕地松>馬尾松>火炬松>云南松和華山松。在分離到的11個(gè)種中，濕地松上有2個(gè)種是其他松樹上沒有分離到的，而火炬松也有1個(gè)種是獨(dú)有的，并且只分離到1株。

由表2可以看出，馬尾松、濕地松和火炬松間內(nèi)生擬盤多毛孢群落的相似性基本處于中等相似水平，相似性系數(shù)為0.5～0.75，而馬尾松、濕地松、火炬松與華山松、云南松的相似性均為低相似水平，相似性系數(shù)低于0.5，華山松與云南松2種松樹間的群落相似性系數(shù)為1，達(dá)到完全相似。由此可見，馬尾松、濕地松、火炬松的內(nèi)生擬盤多毛孢種組成差異較大，而云南松與華山松內(nèi)生擬盤多毛孢種組成無差異，二者內(nèi)生擬盤多毛孢群落相似性完全相同，并與其他松樹種間存在較大差異。

表1 四川省不同松樹種中內(nèi)生擬盤多毛孢的多樣性Table 1 Diversity of endophytic Pestalotiopsis from different pines in Sichuan

注：同列數(shù)據(jù)后標(biāo)不同小寫字母表示在P<0.05水平上差異顯著(LSD法)。下同。

Note:DifferentlowercaselettersineachcolumnindicatesignificantdifferenceatP<0.05levelbyLSDtest.Thesamebelow.

表2 四川省不同松樹種中內(nèi)生擬盤多毛孢群落間的相似性系數(shù)Table 2 Similarity coefficients of endophytic Pestalotiopsis from different pines in Sichuan

2.1.2 松樹組織的影響 由表3可知，松樹內(nèi)生擬盤多毛孢菌的分布具有明顯的組織?；?，即目標(biāo)菌株主要分布于松樹的針葉中，其在葉部的定殖率顯著高于枝和干，干的定殖率最低；3種松樹組織中內(nèi)生擬盤多毛孢的Shannon-Weiner多樣性指數(shù)同樣也以葉部最大。對3種松樹組織間內(nèi)生擬盤多毛孢群落相似性系數(shù)的分析結(jié)果(表4)顯示，葉與枝、干的群落相似性系數(shù)分別為0.71和0.53，均處于中等相似水平；而枝與干的相似性系數(shù)為0.80，說明枝和干上分離到的內(nèi)生擬盤多毛孢的種較為相似。

表3 不同松樹組織間內(nèi)生擬盤多毛孢的多樣性Table 3 Diversity of endophytic Pestalotiopsis indifferent tissues of pines

表4 不同松樹組織內(nèi)生擬盤多毛孢群落間的相似性系數(shù)Table 4 Similarity coefficients of endophytic Pestalotiopsisfrom different pine tissues

2.1.3 海拔的影響 由表5可知，松樹內(nèi)生擬盤多毛孢菌的分布與海拔高度密切相關(guān)，垂直分布帶譜明顯。在海拔較低的地區(qū)(400～600m)，內(nèi)生擬盤多毛孢菌種的數(shù)量和定殖率相對較高，定殖率和Shannon-Weiner多樣性指數(shù)總體上均呈現(xiàn)出隨海拔升高而升高的趨勢；而在高海拔區(qū)域(2 000m)，定殖率和Shannon-Weiner多樣性指數(shù)均顯著低于其他區(qū)域。

表5 不同海拔松樹內(nèi)生擬盤多毛孢的多樣性Table 5 Diversity of endophytic Pestalotiopsis of pines in different altitudes

表6 不同海拔松樹內(nèi)生擬盤多毛孢群落間的相似性系數(shù)Table 6 Similarity coefficients of endophytic Pestalotiopsisof pine in different altitudes

從群落的相似性系數(shù)(表6)來看，海拔2 000m與400～600m的相似性系數(shù)分別為0.20，0.22和0.21，均處于較低的相似水平?？梢?，高海拔地區(qū)松樹內(nèi)生擬盤多毛孢菌的物種多樣性和定殖率均明顯低于低海拔地區(qū)。

2.1.4 季節(jié)的影響 由表7可知，松樹內(nèi)生擬盤多毛孢的定殖率呈現(xiàn)出春季>秋季>夏季>冬季的趨勢；其Shannon-Weiner多樣性指數(shù)在春季為1.92，明顯高于其他3個(gè)季節(jié)，且也顯示出與定殖率一樣的變化趨勢，即春、秋季的多樣性大于夏季和冬季。從不同季節(jié)內(nèi)生擬盤多毛孢群落的相似性系數(shù)(表8)來看，春季、夏季和秋季間的群落相似性較高，相似性系數(shù)均大于0.75；而冬季與其他3個(gè)季節(jié)的相似性均處于0.5～0.6，屬于中等相似水平。所以從群落相似性系數(shù)來看，松樹內(nèi)生擬盤多毛孢的分布隨季節(jié)變化并不明顯。

表7 不同季節(jié)松樹內(nèi)生擬盤多毛孢的多樣性Table 7 Diversity of endophytic Pestalotiopsis ofpines in different seasons

表8 不同季節(jié)松樹內(nèi)生擬盤多毛孢群落間的相似性系數(shù)Table 8 Similarity coefficient of endophytic Pestalotiopsis ofpines in different seasons

2.2 內(nèi)生擬盤多毛孢對松樹病害病原的拮抗作用

將11種內(nèi)生擬盤多毛孢菌與供試病原菌進(jìn)行對峙培養(yǎng)，測量病菌趨向半徑并計(jì)算抑制率，結(jié)果(表9)顯示，散沫擬盤多毛孢(P.lawsoniae)、小孢擬盤多毛孢(P.microspor)和石楠擬盤多毛孢(P.photiniae)對3種病原均有一定的拮抗作用，抑制率都在35%以上，其余內(nèi)生擬盤多毛孢對病原菌的抑制作用不明顯。其中，P.lawsoniae對松落針病菌(L.pinastri)的抑制作用最為明顯，抑制率高達(dá)77.42%，病原菌的生長被顯著抑制，菌絲萎縮并有明顯的拮抗帶出現(xiàn)(圖1)；其對松爛皮病菌(C.ferruginosum)和松赤枯病菌(P.funereal)的抑制率也均超過60%，且與其余擬盤多毛孢的抑制率差異顯著。

表9 內(nèi)生擬盤多毛孢對松樹病害病原的拮抗作用Table 9 Antagonistic effect of endophytic Pestalotiopsis on pathogens of pines

注：數(shù)據(jù)均為3次重復(fù)的“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”。

Note:Dataare“means±SD”ofthreereplications.

2.3 3種拮抗內(nèi)生擬盤多毛孢對濕地松的致病性

由表10可以看出，浸漬法檢測中，3種內(nèi)生擬盤多毛孢各處理幾乎沒有活性或活性較低。散沫擬盤多毛孢(P.lawsoniae)原液、50倍液、500倍液處理72h后均對松針無傷害(與無菌培養(yǎng)液和無菌水處理相同)；小孢擬盤多毛孢(P.microspor)和石楠擬盤多毛孢(P.photiniae)原液在處理72h時(shí)松針出現(xiàn)了一定的干蔫現(xiàn)象，且二者50倍液均有輕微傷害現(xiàn)象，甚至P.photiniae的500倍液也對松針有輕微傷害。由拮抗作用和致病性檢測結(jié)果可知，散沫擬盤多毛孢(P.lawsoniae)適用于松樹病害的防治。

圖1 散沫擬盤多毛孢對松落針病菌的拮抗作用
A.松落針病菌(對照);B.散沫擬盤多毛孢與松落針病菌的對峙培養(yǎng)
Fig.1AntagonisticeffectofPestalotiopsis lawsoniaeonLophodermium pinastri
A.L.pinastri (CK);B.confrontcultureofP.lawsoniaewithL.pinastri

表10 3種拮抗內(nèi)生擬盤多毛孢對濕地松的傷害級(jí)別Table 10 Injury grade of antagonistic endophytic Pestalotiopsis on Pinus elliotii

注：CK1.無菌培養(yǎng)液；CK2.無菌水。

Note:CK1.Sterileculturesolution;CK2.Sterilewater.

2.4 散沫擬盤多毛孢對松樹病害的室內(nèi)防治效果

由表11可知，接種3種病原菌30d后，散沫擬盤多毛孢對松樹3種病害均表現(xiàn)出良好的保護(hù)效果，說明松樹病原的定殖、生長受到了抑制，從而降低了病原菌危害寄主的幾率。

表11 散沫擬盤多毛孢對松樹病害的室內(nèi)防治效果Table 11 Control effects of Pestalotiopsis lawsoniae on pine diseases in laboratory

注：各數(shù)據(jù)均為30次重復(fù)的“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”。CK.無菌水。

Note:Dataare“means±SD”ofthirtyreplications.CK.Sterilewater.

對松落針病菌(L.pinastri)，P.lawsoniae孢子原液和稀釋液均表現(xiàn)出了很好的防治效果，防治效果超過60%；對松爛皮病菌(C.ferruginosum)的防治效果也均在50%以上，對松赤枯病菌(P.funereal)的防效大于40%。P.lawsoniae對3種病原的防治效果隨其稀釋倍數(shù)的增加而降低。因此，若將P.lawsoniae用于這3種病害的林間防治，對松落針病和松爛皮病可以施用500倍液，對松赤枯病應(yīng)施用50倍液。

3 討 論

本研究結(jié)果表明，松樹內(nèi)生擬盤多毛孢的多樣性受松樹種類、松樹組織類型、海拔高度和季節(jié)的影響，其在濕地松、馬尾松、火炬松上的定殖率明顯高于華山松和云南松，結(jié)合Cannon等[23]、Jeewon等[24]的報(bào)道，說明內(nèi)生擬盤多毛孢沒有明顯的宿主專一性。松樹針葉中的內(nèi)生擬盤多毛孢分布最多，多于枝、干，這一結(jié)果與李曼等[11]的研究結(jié)果不一致，可能是由于宿主不同，或者是內(nèi)生真菌在植物不同器官和組織中占據(jù)有不同的生態(tài)位，而內(nèi)生擬盤多毛孢的組織選擇偏向性在松樹上表現(xiàn)為葉片。本研究結(jié)果還表明，內(nèi)生擬盤多毛孢的多樣性有海拔差異性，這與王梅霞等[25]的研究結(jié)果一致，原因可能是內(nèi)生真菌類群的分布除了受宿主植物種類的影響外，還受其他因素如地理位置、氣候、環(huán)境、降雨量等外在條件的影響。在關(guān)于不同季節(jié)內(nèi)生擬盤多毛孢的多樣性研究中，Albrectsen等[26]認(rèn)為其在春季多樣性最高，可能是受當(dāng)季的水分、溫度相互作用的影響。由于影響內(nèi)生擬盤多毛孢分布和組成的因素較多，機(jī)制也較為復(fù)雜，因此，宿主植物、內(nèi)生真菌和環(huán)境之間的相互作用機(jī)制還需進(jìn)一步探討。

內(nèi)生真菌與宿主之間形成了和諧的共生關(guān)系，利用內(nèi)生真菌進(jìn)行病害生物防治具有先天優(yōu)勢，這一理論已被普遍認(rèn)同[27-28]。本研究利用分離自四川松樹林區(qū)的11種松樹內(nèi)生擬盤多毛孢對松落針病、松爛皮病和松赤枯病進(jìn)行拮抗作用試驗(yàn)，結(jié)果顯示其中3種有抑菌活性，且對松落針病菌抑制作用較強(qiáng)，說明這3種松樹內(nèi)生擬盤多毛孢具有對松樹病害進(jìn)行生物防治的潛力，其中以散沫擬盤多毛孢(P.lawsoniae)的拮抗作用最強(qiáng)。目前有報(bào)道指出，散沫擬盤多毛孢(P.lawsoniae)和石楠擬盤多毛孢(P.hotiniae)對馬尾松均有致病作用[7]，小孢擬盤多毛孢(P.microspor)為油茶葉枯病的病原[29]，結(jié)合本試驗(yàn)3種擬盤多毛孢的致病性測定結(jié)果，推測可能是某些擬盤多毛孢在不同植物或器官中可以表現(xiàn)為內(nèi)生或病原狀態(tài)，或者在一定條件下還可以轉(zhuǎn)變，然而三者致病機(jī)制的異同還有待進(jìn)一步探討。就本試驗(yàn)中散沫擬盤多毛孢(P.lawsoniae)對松樹3種病原菌的拮抗作用和致病性測定結(jié)果來看，該菌更適合于松樹病害的生物防治。另外，在盆栽防治試驗(yàn)中，散沫擬盤多毛孢(P.lawsoniae)原液和稀釋液對松落針病、爛皮病和赤枯病均有不同程度的防治效果；前期研究結(jié)果[19]顯示，散沫擬盤多毛孢(P.lawsoniae)在5種松樹上均能分離到，說明該菌在松樹體內(nèi)適生能力較強(qiáng)，這一特點(diǎn)是該菌用于防治松樹病害的一大優(yōu)勢。由于內(nèi)生擬盤多毛孢一直被作為病原菌進(jìn)行研究，在病害生物防治上剛剛起步，本研究以散沫擬盤多毛孢(P.lawsoniae)作為生防材料尚屬首次。下一步應(yīng)深入研究該菌是否可以產(chǎn)生抑菌活性物質(zhì)，進(jìn)而探明其抑菌機(jī)理，為將其制成用于松樹病害防治的高效、穩(wěn)定、環(huán)保的生物制劑奠定基礎(chǔ)。

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Diversity traits of endophyticPestalotiopsisfrom pine trees in Sichuan and its control effect

LIU Han1,2,LIU Ying-gao2,LI Shu-jiang2,SHUAI Wei1,LIU Yan-yun1

(1GanziInstituteofForestryResearch,Kangding,Sichuan626001,China; 2CollegeofForestry,SichuanAgriculturalUniversity,Chengdu,Sichuan611130,China)

【Objective】 Ecological distribution of endophyticPestalotiopsisfrom pine species in Sichuan and its control effect on pine diseases were analyzed to provide theoretical and practical basis for pollution-free control of pine diseases.【Method】 The diversity of endophyticPestalotiopsisfrom pine species in Sichuan was investigated,and the effects of species,tissues,altitudes,and seasons on colonization rate,Shannon-Weiner index, and coefficient similarity of endophyticPestalotiopsiswere analyzed.Then,endophyticPestalotiopsiswith resistance againstLophodermiumpinastri,CenangiumferruginosumandPestalotiopsisfunerealwere screened.The pathogenicity of endophyticPestalotiopsiswas determined by impregnation method.The antagonistic fungus and pathogen were inoculated inPinuselliotiiby spraying and needle-punching methods.Incidence,disease index,and control effect were also calculated.【Result】 EndophyticPestalotiopsisinPinuselliotii,Pinusmassoniana,Pinustaedahad significantly higher diversity than that inPinusarmandiiandPinusyunnanensis.Distribution of endophyticPestalotiopsiswas more in needles than in branches and stems.Highest endophytic diversity was found in low altitude (400-600 m) in spring.EndophyticP.lawsoniae,P.microsporeandP.photiniaeshowed antagonistic effect against three tested pine pathogens (L.pinastri,C.ferruginosumandP.funereal) with inhibition rates of 38.49%-77.42%.P.lawsoniaewas the most effective one without injure effect on needles in the pathogenicity determination.In the controlled experiment in laboratory,the spore stock solution and diluent solution (50 and 500 times) ofP.lawsoniaehad positive control effects against all three diseases with inhibition rates of 40.90%-89.77%.【Conclusion】 The endophytic species ofPestalotiopsisfrom the pine species were rich and potentially functional against pine diseases.P.lawsoniaewas a good candidate for the bio-control of the three pine diseases (L.pinastri,C.ferruginosumandP.funereal).

endophyticPestalotiopsis;diversity;pine disease;biocontrol

時(shí)間:2015-11-11 16:16

10.13207/j.cnki.jnwafu.2015.12.008

2014-04-18

四川省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目(09ZA068)

劉 韓(1983-)，女，四川金堂人，工程師，碩士，主要從事林木微生物資源及病害防治研究。 E-mail:sumer.lisj@gmail.com

S763.15

A

1671-9387(2015)12-0041-08

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