丙型肝炎患者IL-2與肝功能及丙型肝炎病毒RNA的相關(guān)性分析

朱喜增 翟玉峰

河南省南陽市中心醫(yī)院感染科，河南南陽473009

丙型肝炎患者IL-2與肝功能
及丙型肝炎病毒RNA的相關(guān)性分析

朱喜增 翟玉峰▲

河南省南陽市中心醫(yī)院感染科，河南南陽473009

目的探討丙型肝炎患者白介素-2（IL-2）與肝功能及丙型肝炎病毒RNA（HCV-RNA）的相關(guān)性情況。方法收集南陽市中心醫(yī)院2009年1月～2014年1月收治的丙型肝炎患者60例作為丙型肝炎組，同時選取同期健康體檢者100例作為對照組。采用全自動生化分析儀檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總膽紅素（TBIL）、直接膽紅素（DBIL）情況，采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測IL-2，采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測HCV-RNA情況。分析丙型肝炎患者IL-2與HCV-RNA、肝功能的相關(guān)性。結(jié)果丙型肝炎組IL-2、ALT、AST、TBIL、DBIL水平均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=29.85、72.02、48.82、43.19、31.32，均P＜0.05），丙型肝炎患者IL-2與HCV-RNA呈負相關(guān)（r=-0.429，P＜0.05），與ALT、AST呈正相關(guān)性（r=0.503、0.512，P＜0.05）。結(jié)論丙型肝炎患者血清中的IL-2水平表達增高，HCV可促進IL-2的分泌，并與肝功能損傷有關(guān)。

丙型肝炎；IL-2；肝功能；HCV-RNA

丙型肝炎是常見的經(jīng)血液傳播傳染性疾病，目前全世界有1.5億人感染丙型肝炎，其中有近60%發(fā)展成慢性肝病，有20%逐步演變?yōu)楦斡不１透窝灼鸩‰[匿，臨床癥狀不明顯［1-2］，有近80%急性感染期患者無明顯的臨床癥狀。同時丙型肝炎檢測普及率、公眾認知度較低，潛伏期長，臨床上漏診率大，在得不到及時治療的情況下，易演變成肝硬化和肝癌。丙型肝炎作為炎性反應(yīng)容易引起一些炎癥因子的變化，如白介素不同程度的變化，白介素-2（IL-2）是常見炎癥因子之一，其變化與丙型肝炎發(fā)生發(fā)展有著重要的關(guān)系。本研究通過對丙型肝炎患者臨床資料進行分析，擬探討丙型肝炎患者IL-2與肝功能及HCV-RNA的相關(guān)性，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取南陽市中心醫(yī)院（以下簡稱“我院”）2009年1月～2014年1月收治的丙型肝炎患者60例作為丙型肝炎組，其中男31例，女19例，年齡19～54歲，平均（36.7±10.5）歲；患者有不同程度的發(fā)熱、頭痛、乏力、納差、惡心、嘔吐，肝臟腫大、質(zhì)地偏軟，臨床檢查均為丙型肝炎抗體陽性患者。選取同期我院健康體檢者100例作為對照組，其中男65例，女35例，年齡20～56歲，平均（35.2±11.8）歲。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

兩組研究對象抽取晨起空腹靜脈血5 mL，離心機3000 r/min，離心15 min，分離血清，放置-70℃冰箱凍存。

1.2.1 IL-2檢測采用酶聯(lián)免疫吸附測定ELISA方法，應(yīng)用尚柏生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司生產(chǎn)的IL-2試劑盒，通過雙抗體兩步法夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測。標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本加入已經(jīng)包被了人IL-2單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板之中，通過溫箱孵育一定時間，將沒有完全結(jié)合的成分沖洗出去，加入酶標(biāo)工作液，通過溫箱孵育，將沒有完全反應(yīng)的成分洗滌出去。先后順序加入底物A和底物B，底物TMB在辣根過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)變?yōu)樗{色產(chǎn)物，通過酸作用下逐漸變?yōu)辄S色，黃色的深淺程度和樣品中IL-2濃度呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)。通過分光光度計在450 nm波長之下測定OD值，按照說明書要求計算IL-2的含量。IL-2標(biāo)準(zhǔn)品的回歸方程式，計算樣品濃度。樣品的濃度=計算樣品濃度×稀釋倍數(shù)。

1.2.2 丙型肝炎RNA定量檢測主要是采用QIAamp Viral RNA Mini Kit按照說明書對丙型肝炎病毒RNA進行提取。通過丙型肝炎病毒核酸擴增熒光定量檢測試劑盒，實施RT-PCR，首先引物和探針的設(shè)計選擇了5'非編碼區(qū)，對其進行擴增，擴增成為156 bp的片段，在LightCycler 2.0上進行擴增檢測，加上體積為15μL樣品，10μL的試劑，建立總體積達到25μL的反應(yīng)體系。通過定量PCR，對標(biāo)本中的丙型肝炎RNA進行定量分析。

1.2.3 肝功能的各項指標(biāo)檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總膽紅素（TBIL）、直接膽紅素（DBIL）情況采用全自動生化分析儀進行檢測。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察兩組IL-2、ALT、AST、TBIL、DBIL。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 19.0對數(shù)據(jù)進行分析，正態(tài)分布計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗；相關(guān)性采用直線相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組的IL-2、ALT、AST、TBIL、DBIL情況

丙型肝炎組IL-2、ALT、AST、TBIL、DBIL水平均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。見表1。

表1 兩組的IL-2、ALT、AST、TBIL、DBIL情況（x±s）

2.2 丙型肝炎患者IL-2和HCV-RNA、ALT、AST相關(guān)性

丙型肝炎患者IL-2與HCV-RNA呈負相關(guān)（r= -0.429，P＜0.05），與ALT、AST呈正相關(guān)（r=0.503、0.512，P＜0.05）。

3 討論

由于丙型肝炎病毒誘發(fā)嚴(yán)重的肝臟系統(tǒng)損傷，目前我國大概有4000萬丙型肝炎患者，其中80%有不同程度的慢性肝病，近30%患者發(fā)展成為肝硬化，10%肝硬化患者演變?yōu)楦伟?。丙型肝炎患者有不同程度的疲勞無力、食欲衰減、皮膚發(fā)生瘀青，但是有部分患者沒有明顯的癥狀，機體處于一種亞健康狀態(tài)［3-4］。如果臨床治療不及時，很容易演變?yōu)楦斡不⒏伟?。ALT和AST是肝功能評價的重要指標(biāo)，如果兩項指標(biāo)高于40 U可以提示肝功能異常［5-6］。

ALT反映的是肝病的活動程度，AST反映的是肝細胞損害的嚴(yán)重程度［7-8］。當(dāng)肝細胞受到輕度損傷，細胞膜通透性明顯增加，細胞中的ALT溢出，當(dāng)肝細胞損傷的較為嚴(yán)重，甚至發(fā)生壞死時，線粒體中的AST會釋放出來，因而AST/ALT比例明顯降低，病情嚴(yán)重時上述比例會明顯升高［9-10］。如果AST/ALT＞1提示肝細胞有廣泛的壞死；如果AST/ALT＜1提示有慢性肝炎，如果AST/ALT＞2則說明可能存在肝硬化［11-12］。在肝細胞壞死時，0.31≤AST/ALT≤0.63提示預(yù)后較好，在1.20≤AST/ALT≤2.26提示患者將發(fā)展成為肝衰竭甚至病死［13-14］。

膽紅素是由紅蛋白轉(zhuǎn)變而來，膽紅素是血液中紅細胞血紅素進行代謝之后的廢棄物，其可以在肝臟的作用下，通過膽管排出到十二指腸中［15-16］。引起膽紅素偏高的原因較多，如慢性肝炎、肝硬化、急性黃疸、肝壞死等，另外溶血型黃疸和血型不吻合的輸血反應(yīng)等也可能引起膽紅素升高［17-19］。

IL-2又稱T細胞生長因子，其是由活化的CD4+T細胞和CD8+T細胞產(chǎn)生的具有廣泛生物活性的細胞因子，也是所有T細胞亞群的生長因子，同時促進活化B細胞增殖，故為調(diào)控免疫應(yīng)答的重要因子，此外其還參與抗體反應(yīng)、造血和腫瘤監(jiān)視。IL-2屬于Th1類細胞因子，可以促進CD4+T細胞、CLTs和B細胞增殖。當(dāng)急性丙肝病毒感染向自限性發(fā)展時，其會出現(xiàn)IL-2升高，而向著慢性感染發(fā)展時，IL-2水平明顯降低。另外IL-2水平的變化還可以反映丙型肝炎抗病毒治療情況。有資料顯示［20-21］，單獨CD4+CD25+T細胞按照1∶1共同培養(yǎng)，其分別加入不同濃度的IL-2，當(dāng)IL-2濃度為2000 U/mL時，可以明顯抑制CD4+CD25+T細胞增殖能力。

本研究結(jié)果表明，丙型肝炎患者的IL-2、ALT、AST、TBIL、DBIL、HCV-RNA均高于健康人，丙型肝炎患者IL-2與HCV-RNA呈負相關(guān)，與ALT、AST呈正相關(guān)。說明丙型肝炎患者血清中的IL-2水平明顯增高，丙型肝炎的病情發(fā)展會促進IL-2的分泌，其可以反映肝功能損傷情況。此外，IL-2介導(dǎo)免疫反應(yīng)可以有效地促進體內(nèi)丙型肝炎病毒清除，但也會因此加重肝細胞的損傷。

綜上所述，丙型肝炎患者血清中的IL-2表達水平增高，HCV可促進IL-2的分泌，IL-2表達水平增高與肝功能損傷有關(guān)。

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Relation analysis of IL-2 and liver function,HCV-RNA in HCV patients

ZHU Xizeng ZHA I Yufeng▲
Department of Infection,Nanyang Central Hospital,He'nan Province,Nanyang 473009,China

ObjectiveTo approach relation of IL-2 and liver function,HCV-RNA in HCV patients.MethodsFrom January 2009 to January 2014,60 HCV patients in Nanyang Central Hospital were selected as HCV group,and 100 healthy check-up persons were selected as control group.The ALT,AST,TBIL,DBIL were detected by fully automatic biochemical analyser,the IL-2 was detected by ELISA,the HCV-RNA was detected by RT-PCR.The correlation of IL-2 and HCV-RNA,liver function in HCV patients were detected.ResultsThe IL-2,ALT,AST,TBIL,DBIL of HCV group were higher than those of control group,the differences were statistically significant(t=29.85,72.02,48.82, 43.19,31.32,all P＜0.05).There was negative correlation between IL-2 and HCV-RNA in HCV patients(r=-0.429, P＜0.05),positive correlation between IL-2 and ALT,AST(r=0.503,0.512,P＜0.05).ConclusionIL-2 is higher level in sera of HCV-infected patients,HCV can promote IL-2 secretion,which is associated with liver function injury.

HCV;IL-2;Liver function;HCV-RNA

R512.63

A

1673-7210(2015）01(c）-0085-03

2014-10-13本文編輯：蘇暢）

▲通訊作者