氣相色譜/三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法測定牛奶及奶粉中213種農(nóng)藥多殘留

王 敬, 艾連峰*, 馬育松, 張海超, 李 瑋, 于 猛

(1. 河北出入境檢驗(yàn)檢疫局, 河北 石家莊 050051; 2. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院, 河北 保定 071000)

研究論文

氣相色譜/三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法測定牛奶及奶粉中213種農(nóng)藥多殘留

王 敬1, 艾連峰1*, 馬育松1, 張海超1, 李 瑋1, 于 猛2

(1. 河北出入境檢驗(yàn)檢疫局, 河北 石家莊 050051; 2. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院, 河北 保定 071000)

在系統(tǒng)優(yōu)化固相萃取吸附劑填料類型、洗脫溶劑種類及體積的基礎(chǔ)上,建立了牛奶和奶粉中213種農(nóng)藥殘留的氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)方法。試樣用乙腈均質(zhì)提取,采用石墨化炭黑/氨基柱(ENVI-Carb/NH2)凈化后,用GC-MS/MS多反應(yīng)離子監(jiān)測(MRM)模式進(jìn)行檢測,外標(biāo)法定量。結(jié)果表明,197種農(nóng)藥在10～1 000 μg/L，16種農(nóng)藥在50～1 000 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)均大于0.99,方法的檢出限(S/N=3)為0.03～7.59 μg/kg,定量限(S/N=10)為0.10～21.94 μg/kg,平均添加回收率為66.9%～120.1%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.23%～17.6%。該方法樣品處理簡單快速,相比其他多殘留分析方法凈化效果好,靈敏度和選擇性高,適用于日常檢測工作。

氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜;農(nóng)藥殘留;牛奶;奶粉

三聚氰胺事件后,乳品安全問題從未遠(yuǎn)離公眾視野;肉毒桿菌污染、多美滋奶粉硝酸鹽含量超標(biāo)等各類“奶粉門”事件層出不窮,甚至母乳中檢出農(nóng)藥殘留,各種農(nóng)藥、獸藥、激素等藥品的超標(biāo)、違規(guī)使用,正成為乳品質(zhì)量安全的源頭之禍[1-3]。研究表明,奶中農(nóng)藥殘留污染對(duì)人體健康的危害屬于長時(shí)期、微劑量及慢性細(xì)微毒性效應(yīng)。這種毒性效應(yīng)起病緩慢、持續(xù)期長、涉及面廣、影響人數(shù)多,可以在人體生理、自身免疫功能、致癌、致畸及致突變等方面反映出來[3]。在世界經(jīng)濟(jì)一體化趨勢不斷加快的今天,發(fā)達(dá)國家豎起的“技術(shù)壁壘”日益強(qiáng)化,作為乳及乳制品的進(jìn)出口大國,我國的乳品屢遭質(zhì)疑。各國政府不斷修訂了乳及乳制品中農(nóng)藥最高殘留限量,新修訂的標(biāo)準(zhǔn)越來越嚴(yán),限量越來越低,且大多數(shù)國家及地區(qū)對(duì)殺蟲劑、除草劑和殺菌劑3類農(nóng)藥都進(jìn)行了較多的限定[4]。日本共制訂了300多種農(nóng)藥在奶中的農(nóng)藥殘留最大限量值,且大多數(shù)農(nóng)藥已達(dá)到了“一律不準(zhǔn)”,其中殺撲磷更是低至0.001 mg/kg; 2014年8月1日實(shí)施的中國香港《食物內(nèi)除害劑殘余規(guī)例》制訂了牛奶中142種農(nóng)藥殘留限量,其中殺撲磷低至0.001 mg/kg,七氯為0.006 mg/kg,異狄氏劑為0.000 8 mg/kg,嘧菌環(huán)胺更是低至0.000 4 mg/kg;歐盟共制訂了460多種農(nóng)藥在奶中的最大殘留限量值,其中林丹低至0.001 mg/kg;美國共制訂了牛奶中190余種農(nóng)藥的最大殘留限量,其中樂果低至0.002 mg/kg;澳大利亞共制訂了牛奶中227種農(nóng)藥的最大殘留限量,其中醚菌酯低至0.001 mg/kg。其中,歐盟、日本和澳大利亞在乳及乳制品中農(nóng)藥殘留方面的規(guī)定最嚴(yán)格,限定的種類最多。我國2014年8月1日實(shí)施的GB 2763-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[5]則僅僅規(guī)定了奶類中狄氏劑的限量為0.006 mg/kg。無論是農(nóng)藥品種,還是農(nóng)藥殘留指標(biāo)數(shù)都遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于發(fā)達(dá)國家和國際組織,使我國的乳品安全問題存在隱患。

乳及乳制品的脂肪含量高,基質(zhì)較為復(fù)雜,且農(nóng)藥含量極低,對(duì)于農(nóng)藥殘留分析是一個(gè)極大的挑戰(zhàn)。目前,國內(nèi)外的研究范圍大多數(shù)還停留在檢測一類農(nóng)藥品種水平,對(duì)于同時(shí)測定不同種類農(nóng)藥的報(bào)道較少[6-15]。鄭軍紅等[2]利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定牛奶中128種農(nóng)藥殘留,但并未涉及日常檢出率高、脂溶性強(qiáng)、易蓄積、難降解的有機(jī)氯、擬除蟲菊酯等農(nóng)藥;GB/T 23210-2008《牛奶和奶粉中511種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法》[16]由于采用GC-MS進(jìn)行測定,使得許多農(nóng)藥的檢出限已經(jīng)無法滿足目前的限量要求,例如牛奶中異狄氏劑的檢出限為0.050 0 mg/L,樂果的檢出限為0.016 7 mg/L,殺撲磷的檢出限為0.008 3 mg/L等?？傮w上,國內(nèi)外對(duì)于乳品中農(nóng)藥多殘留的研究不論是在檢測農(nóng)藥的數(shù)量上還是在農(nóng)藥種類的選擇上,都存在一些不足。與傳統(tǒng)的GC-MS相比,三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜具有極高的選擇性、極強(qiáng)的抗干擾能力、高靈敏度和高通量離子傳輸效率及準(zhǔn)確定量的特點(diǎn),這使得該技術(shù)在復(fù)雜基質(zhì)背景下仍能完成目標(biāo)物的準(zhǔn)確鑒定。本文利用固相萃取-氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),建立了牛奶及奶粉中213種農(nóng)藥殘留的高通量檢測方法,測定的農(nóng)藥種類較全,涵蓋了有機(jī)磷類、有機(jī)氯類、擬除蟲菊酯類和氨基甲酸酯類等農(nóng)藥;并且采用多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式和基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行定量,減小了基質(zhì)效應(yīng),降低了背景干擾,提高了分析靈敏度,可滿足國內(nèi)外對(duì)乳品中農(nóng)藥殘留量的檢測要求。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 7890A型氣相色譜儀,Agilent 7000B型三重四極桿質(zhì)譜儀(美國Agilent公司);石墨化炭黑/氨基固相萃取柱(ENVI-Carb/NH2, 500 mg/500 mg, 6 mL, Supelco公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(Heidolph公司)、PT 3100型均質(zhì)器、Turbo Vap LV型氮吹濃縮儀(Zymark公司);Milli-Q純化系統(tǒng)(Millipore公司)等。

213種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(Dr. Ehrenstorfer和Sigma公司);乙腈、丙酮、正己烷均為色譜純(Dikma公司);甲苯、無水硫酸鈉和氯化鈉均為分析純(氯化鈉使用前在140 ℃下烘烤4 h,在干燥器內(nèi)冷卻至室溫,貯于密封瓶中;無水硫酸鈉在650 ℃灼燒4 h,在干燥器內(nèi)冷卻至室溫,貯于密封瓶中)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:稱取約5～10 mg(精確到0.1 mg)農(nóng)藥各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分別置于10 mL容量瓶中,根據(jù)各物質(zhì)的溶解性選用甲苯或丙酮溶解并定容至刻度，得到單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,置于-20 ℃冰箱中保存。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:由于檢測的農(nóng)藥品種較多,為確保較高的靈敏度,將農(nóng)藥分成A、B兩組,并根據(jù)其在儀器上的響應(yīng)確定混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中各農(nóng)藥的濃度,移取一定量的各單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于容量瓶中,用丙酮-正己烷(1∶1, v/v)定容并配制成100 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液,置于-20 ℃冰箱保存。

基質(zhì)空白標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確吸取適量混合標(biāo)準(zhǔn)工作液,用樣品空白提取液配制成系列基質(zhì)空白標(biāo)準(zhǔn)溶液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.2樣品前處理

1.2.2.1提取

牛奶:稱取試樣約10 g(精確到0.01 g)于50 mL離心管中,加入5 g氯化鈉和20 mL乙腈,于渦旋振蕩器上振蕩2 min, 5 000 r/min轉(zhuǎn)速下離心10 min,然后將上清液經(jīng)裝有10 g無水硫酸鈉的漏斗過濾至120 mL雞心瓶中。殘?jiān)儆?0 mL乙腈重復(fù)以上提取過程,合并提取液,于40 ℃水浴濃縮至近干,用5 mL乙腈-甲苯(3∶1, v/v)溶解所得濃縮液,待凈化。

奶粉:稱取試樣約5 g(精確到0.01 g)于50 mL離心管中,加入20 mL 40～45 ℃水充分溶解并浸泡30 min,加入5 g氯化鈉和20 mL乙腈,余下操作同牛奶樣品。

1.2.2.2凈化

將上述提取液通過石墨化炭黑/氨基固相萃取柱(使用前用10 mL乙腈-甲苯(3∶1, v/v)活化),再用20 mL乙腈-甲苯(3∶1, v/v)溶液分兩次洗脫,控制流速為0.5 mL/min,收集全部流出液于同一離心管中,于40 ℃下用氮?dú)獯蹈?加入1 mL丙酮-正己烷(1∶1, v/v)定容,超聲溶解30 s,過0.22 μm有機(jī)相微孔濾膜,濾液供GC-MS/MS測定。

1.2.3氣相色譜條件

色譜柱:DB-1701毛細(xì)管柱(30 mm×0.25 mm×0.25 μm);色譜柱升溫程序:50 ℃保持1 min,然后以30 ℃/min升溫至130 ℃,再以6 ℃/min升溫至280 ℃,再以10 ℃/min升溫至310 ℃,保持5 min;載氣:氦氣,純度≥99.999%;流速:1.30 mL/min,恒流;進(jìn)樣口溫度:290 ℃;進(jìn)樣量:1 μL;進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣,1.5 min后打開分流閥。

1.2.4質(zhì)譜條件

離子源:電子轟擊離子(EI)源;離子源溫度:250 ℃;四極桿溫度:150 ℃; GC-MS/MS接口溫度:280 ℃。溶劑延遲時(shí)間:5 min;碰撞氣(氮?dú)?N2))流速:1.5 mL/min,猝滅氣(氦氣(He))流速:2.25 mL/min。采用多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式,每個(gè)農(nóng)藥選取2個(gè)特征MRM反應(yīng),其中一個(gè)作為定量離子對(duì),一個(gè)作為定性離子對(duì)(見表1)。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取溶劑的優(yōu)化

本文考察的農(nóng)藥覆蓋了有機(jī)磷、有機(jī)氯、氨基甲酸酯類、擬除蟲菊酯類、酰胺類、雜環(huán)類等極性和溶解度差異較大的多種類農(nóng)藥,因此要求提取溶劑對(duì)目標(biāo)物有足夠的溶解性和穩(wěn)定性。牛奶的主要成分為水(含量在86%～89%之間),其他成分主要為脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖等,實(shí)驗(yàn)對(duì)目前應(yīng)用較多的溶劑如丙酮、乙腈、乙酸乙酯和二氯甲烷進(jìn)行了篩選。結(jié)果發(fā)現(xiàn),用丙酮和乙酸乙酯提取時(shí),溶出的樣品雜質(zhì)、脂肪較多;而用二氯甲烷提取時(shí)容易乳化。乙腈通用性強(qiáng),對(duì)農(nóng)藥溶解度較大,且具有沉淀蛋白質(zhì)的作用,用乙腈提取不僅能沉淀蛋白質(zhì)而且脂肪提出物和溶出雜質(zhì)很少,且滲透能力強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)考察了牛奶與乙腈的不同體積比(2∶1、1∶1、1∶2、2∶3)對(duì)沉淀蛋白質(zhì)效果的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),當(dāng)牛奶與乙腈的體積比為1∶2時(shí),經(jīng)離心分離后樣品溶液澄清透明,蛋白質(zhì)幾乎沉淀完全。

由于氨基甲酸酯等農(nóng)藥水溶性強(qiáng),奶粉直接用乙腈提取,回收率受很大的影響。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),奶粉在加入有機(jī)溶劑提取前加入水浸泡30 min,可以提高提取效率。

2.2 固相萃取柱的選擇

牛奶基質(zhì)比較復(fù)雜,含有大量的脂肪和蛋白質(zhì),奶粉中還含有大量的糖,且涉及的農(nóng)藥種類及數(shù)量較多,因此需要去除蛋白質(zhì)、脂肪等干擾物。盡管脂肪不溶于乙腈提取劑,但提取過程中仍會(huì)攜帶出少量的脂肪。實(shí)驗(yàn)選取了PSA、C18、QuEChERS法和ENVI-Carb/NH2柱等進(jìn)行了比較,發(fā)現(xiàn):PSA、QuEChERS法和C18對(duì)雜質(zhì)的去除效果不好,基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)明顯,樣品中還存在較多的干擾物質(zhì),對(duì)結(jié)果的測定有一定的干擾,有的農(nóng)藥的添加回收率異常,甚至高達(dá)210%; ENVI-Carb/NH2柱對(duì)含部分脂肪和脂溶性雜質(zhì)的樣品凈化較好[17], ENVI-Carb能很好地吸附天然產(chǎn)物中的色素及固醇類等系列化合物[18],對(duì)于各種極性的分析物具有更廣泛的保留范圍并容易洗脫,可以改善多殘留分析結(jié)果;NH2柱是弱陰離子吸附柱,能出色地分離結(jié)構(gòu)異構(gòu)體,并且對(duì)于樣品中的一些強(qiáng)極性雜質(zhì)、有機(jī)酸、色素和金屬離子(與金屬離子產(chǎn)生配合作用)等具有良好的凈化效果[19],通過ENVI-Carb/NH2柱后,回收率和重現(xiàn)性較好,從而起到凈化的效果。

比較了甲醇-二氯甲烷(1∶99, v/v)和乙腈-甲苯(3∶1, v/v)的洗脫效果,發(fā)現(xiàn)后者回收率高且干擾較小。選用乙腈作為洗脫劑,加入不同體積分?jǐn)?shù)的甲苯(0、5%、10%、15%、20%、25%和30%)調(diào)節(jié)洗脫強(qiáng)度,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在洗脫劑體積不變的條件下,隨著甲苯濃度的增加,洗脫下來的雜質(zhì)相應(yīng)減少;當(dāng)甲苯濃度超過25%后,回收率降低,因此選用乙腈-甲苯(3∶1, v/v)作為洗脫劑。在洗脫體積的選擇上,分別用5、10、15、20和25 mL乙腈-甲苯(3∶1, v/v)混合液進(jìn)行洗脫并收集。結(jié)果發(fā)現(xiàn),回收率隨著洗脫劑的體積增加而增加,但當(dāng)體積達(dá)到20 mL后,繼續(xù)增加洗脫液對(duì)回收率的影響不大。

表1 213 種農(nóng)藥的保留時(shí)間、特征離子及其碰撞能量，在牛奶中的線性相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限，在牛奶和奶粉中的平均回收率及精密度( n = 6)Table 1 Retention times ( tR ) ，characteristic ions and their collision energies，correlation coefficients ( r) ，LODs and LOQs in milk，average recoveries and RSDs ( n = 6) in milk and milk powder of the 213 pesticides

表1 ( 續(xù))Table 1 ( Continued)

表1 ( 續(xù))Table 1 ( Continued)

表1 ( 續(xù))Table 1 ( Continued)

表1 ( 續(xù))Table 1 ( Continued)

表1 ( 續(xù))Table 1 ( Continued)

2.3 農(nóng)藥品種的篩選

結(jié)合國內(nèi)外對(duì)乳及乳制品中農(nóng)藥殘留種類的考察范圍,另外補(bǔ)充一些近年來在乳品中受關(guān)注比較多的農(nóng)藥種類,本文對(duì)235種農(nóng)藥進(jìn)行了考察。實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn):①對(duì)于單一標(biāo)準(zhǔn)品,在GC-MS/MS上不出峰或信號(hào)低的有17種(甲胺磷、咪酰胺、霜脲氰、吡蚜酮、吡蟲啉、吡氟禾草靈、多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈、辛硫磷、苯菌靈、烯酰嗎啉、雙甲脒、氧化樂果、涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜); ②對(duì)于敵敵畏與敵百蟲、溴氰菊酯和四溴菊酯這兩對(duì)農(nóng)藥,由于敵百蟲在一定溫度下會(huì)降解生成敵敵畏,四溴菊酯在一定溫度下降解生成溴氰菊酯,所以這兩對(duì)農(nóng)藥的保留時(shí)間和質(zhì)譜參數(shù)相同,國際上的限量標(biāo)準(zhǔn)是以二者殘留量之和表示,所以對(duì)于回收率等檢測指標(biāo),只考察了其中一種農(nóng)藥,即分別選取了敵敵畏和溴氰菊酯[20]; ③一級(jí)質(zhì)譜母離子太小導(dǎo)致選擇性差的農(nóng)藥未選(敵螨普母離子為m/z69); ④加入樣品后受基質(zhì)影響嚴(yán)重導(dǎo)致定量效果差的農(nóng)藥如百菌清、克菌丹未選。除去以上22種農(nóng)藥不出峰、響應(yīng)差或干擾嚴(yán)重外,其余213種可進(jìn)行準(zhǔn)確的定性和定量分析。

2.4 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

對(duì)213種農(nóng)藥的母離子、子離子、碰撞能量等一系列質(zhì)譜參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。首先選擇母離子,對(duì)每一種農(nóng)藥以適宜的質(zhì)量濃度進(jìn)行全掃描(full scan),并從一級(jí)質(zhì)譜圖中選擇適當(dāng)?shù)碾x子作為母離子;其次選擇子離子,對(duì)選定的母離子用子離子掃描的方式確定二級(jí)質(zhì)譜圖,從中選擇適宜的離子作為子離子;對(duì)每一組母離子/子離子分別選擇不同的碰撞能量進(jìn)行掃描,得到最優(yōu)的碰撞能量(見表1)。圖1為優(yōu)化條件下213種農(nóng)藥的MRM圖。

圖1 213種農(nóng)藥(分為2組)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的MRM圖Fig.1 MRM Chromatograms of the 213 pesticides in two groups

2.5 基質(zhì)效應(yīng)

減少基質(zhì)效應(yīng)影響的方法一般有:加入同位素標(biāo)記的目標(biāo)物;更多的凈化步驟或進(jìn)樣前稀釋;基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液;分析物保護(hù)劑的加入等。其中,同位素標(biāo)記物的種類少、價(jià)格昂貴;而更多的凈化和稀釋會(huì)增加樣品前處理步驟,不僅耗時(shí)費(fèi)力,減少目標(biāo)物的覆蓋范圍,而且可能使目標(biāo)物的定量限偏高,從而降低其靈敏度[21]。為了較好地減少基質(zhì)效應(yīng)的影響,本實(shí)驗(yàn)采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行校正。基質(zhì)效應(yīng)(matrix effect，ME)=B/A×100%,其中,A為純?nèi)軇┲修r(nóng)藥的響應(yīng)值,B為空白樣品基質(zhì)中添加相同含量農(nóng)藥的響應(yīng)值。實(shí)驗(yàn)通過測定基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均響應(yīng)值(B,n=3)和分析物在純?nèi)軇┲械钠骄憫?yīng)值(A,n=3)的比值來考察基質(zhì)效應(yīng)的大小,結(jié)果如圖2所示?？梢钥闯?在不同樣品基質(zhì)中,至少60%分析物的響應(yīng)信號(hào)增強(qiáng),而且不同基質(zhì)在同一基質(zhì)效應(yīng)范圍內(nèi)化合物的數(shù)量不同,這是由于同一目標(biāo)物在不同基質(zhì)中所受的基質(zhì)效應(yīng)大小不同;奶粉中目標(biāo)物的基質(zhì)效應(yīng)較牛奶中的顯著,主要原因是牛奶含水量高,水分的增加在一定程度上稀釋了基質(zhì)共萃取物的濃度,從而降低了基質(zhì)效應(yīng)。其中,有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)相對(duì)較弱,有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)較強(qiáng)。因此,本文采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定,能夠很好地解決峰形較寬、保留時(shí)間漂移的問題,基本抵消了基質(zhì)效應(yīng)的干擾。

圖2 牛奶、奶粉樣品基質(zhì)中213種農(nóng)藥(20 μg/kg)在 GC-MS/MS分析中的基質(zhì)效應(yīng)Fig.2 Matrix effects of the 213 pesticides (20 μg/kg) in extracts of milk and milk power during GC-MS/MS analysis

2.6 方法的線性范圍、檢出限和定量限

實(shí)驗(yàn)采用空白的牛奶和奶粉樣品基質(zhì)的提取液(按1.2.2節(jié)方法制備)配制不同質(zhì)量濃度的農(nóng)藥基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液,用峰面積對(duì)質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明,霜霉威、四氟醚唑、水胺硫磷、滅菌丹、烯丙菊酯、氟吡甲禾靈、纈霉威、噻嗪酮、乙嘧酚磺酸酯、乙氧氟草醚、嘧螨酯、炔草酯、苯醚菊酯、氟丙菊酯、丙硫克百威和苯醚甲環(huán)唑等16種農(nóng)藥在50～1 000 μg/L,其余197種農(nóng)藥在10～1 000 μg/L范圍內(nèi)呈線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.993 9～0.999 9。方法的檢出限(S/N=3)為0.03～7.59 μg/kg,定量限(S/N=10)為0.10～21.94 μg/kg。牛奶樣品中213種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限結(jié)果見表1。

2.7 方法的回收率和精密度

在陰性的牛奶和奶粉樣品中添加20、40、100 μg/kg的霜霉威、四氟醚唑、水胺硫磷、滅菌丹、烯丙菊酯、氟吡甲禾靈、纈霉威、噻嗪酮、乙嘧酚磺酸酯、乙氧氟草醚、嘧螨酯、炔草酯、苯醚菊酯、氟丙菊酯、丙硫克百威和苯醚甲環(huán)唑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,10、20、100 μg/kg的其余197種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,靜置30 min,待農(nóng)藥被樣品充分吸收后,按1.2.2節(jié)方法進(jìn)行處理,做回收率試驗(yàn),每個(gè)水平平行測定6次,計(jì)算精密度,結(jié)果見表1。結(jié)果表明,213種農(nóng)藥在牛奶及奶粉樣品中的平均加標(biāo)回收率為66.9%～120.1%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.23%～17.6%,回收率和精密度能夠滿足國內(nèi)外對(duì)乳品檢測的要求。

3 結(jié)論

通過對(duì)樣品凈化步驟的優(yōu)化,本文建立了簡單、高效測定牛奶和奶粉中213種農(nóng)藥殘留的方法。該方法采用乙腈均質(zhì)提取、石墨化炭黑/氨基固相萃取柱凈化后用GC-MS/MS分析。與其他多殘留分析方法相比,具有涵蓋農(nóng)藥種類全、凈化效果好、操作簡單快捷等優(yōu)點(diǎn),可用于牛奶和奶粉中農(nóng)藥殘留的日常檢測。

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Determination of 213 pesticide residues in milk and milk power by gas chromatography-triple quadrupole tandem mass spectrometry

WANG Jing1, AI Lianfeng1*, MA Yusong1, ZHANG Haichao1, LI Wei1, YU Meng2

(1.HebeiEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau,Shijiazhuang050051,China; 2.CollegeofFoodScienceandTechnology,AgriculturalUniversityofHebei,Baoding071000,China)

On the basis of the optimization of solid phase extraction adsorbent, eluting solvent types and amounts, a gas chromatography-triple quadrupole tandem mass spectrometry (GC-MS/MS) method was established for the determination of 213 pesticide residues in milk and milk power. The samples were extracted by acetonitrile, cleaned-up with an ENVI-Carb/NH2solid-phase extractant, and determined by GC-MS/MS using external standard method. The linear ranges were from 10 to 1 000 μg/L for 197 pesticides, from 50 to 1 000 μg/L for the other 16 pesticides with the correlation coefficients higher than 0.99. The limits of detection (LODs,S/N=3) varied over the range of 0.03 to 7.59 μg/kg, and limits of quantification (LOQs,S/N=10) ranged from 0.10 to 21.94 μg/kg. The average recoveries in different matrices were in the range of 66.9%-120.1% with the relative standard deviations (RSDs) of 1.23%-17.6%. This method is simple, rapid, sensitive and reliable for meeting the requirements for the simultaneous identification and quantification of the multi-residues in milk and milk power.

gas chromatography-triple quadrupole tandem mass spectrometry (GC-MS/MS); pesticide residues; milk; milk power

10.3724/SP.J.1123.2015.07012

國家質(zhì)檢總局科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013IK154);河北檢驗(yàn)檢疫局科研項(xiàng)目(HE2014K018).

2015-07-10

O658

:A

:1000-8713(2015)11-1175-11

*通訊聯(lián)系人.Tel:(0311)85980742,E-mail:ai_lianfeng@126.com.