腦血疏口服液對急性腦梗死大鼠的神經(jīng)保護作用

艾 鑫 ，劉 翠

腦血疏口服液對急性腦梗死大鼠的神經(jīng)保護作用

艾 鑫 ，劉 翠

目的 研究腦血疏口服液對急性腦梗死大鼠神經(jīng)保護作用及其機制。方法 90只SD大鼠隨機分為腦梗死對照組、腦梗死干預(yù)組、假手術(shù)組。灌服10 d后根據(jù)改良Longa等方法制作大鼠左側(cè)大腦中動脈阻塞模型。依照Longa FZ法對大鼠進行神經(jīng)功能評分，后于相應(yīng)時間點斷頭取腦，HE染色觀察大鼠腦組織病理變化，檢測大鼠腦組織超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。結(jié)果 動物模型建立后2 h，腦梗死對照組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分與假手術(shù)組比較明顯增高，腦梗死干預(yù)組較腦梗死對照組明顯降低(P<0．05)。腦梗死對照組可見明顯缺血性形態(tài)學(xué)改變，腦梗死干預(yù)組較同期腦梗死對照組大鼠腦組織病理變化有較明顯改善。大鼠腦組織中SOD含量隨時間推移而逐漸降低，而MDA含量隨時間推移而逐漸增加。且各時間點腦梗死對照組與假手術(shù)組、腦梗死干預(yù)組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)。假手術(shù)組與腦梗死干預(yù)組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0．05)。結(jié)論 腦血疏口服液能夠改善大鼠急性腦梗死后神經(jīng)功能缺損和腦組織結(jié)構(gòu)，提高SOD活性，降低MDA含量，發(fā)揮拮抗自由基損傷作用，具有神經(jīng)保護作用。

腦梗死；腦血疏口服液； 超氧化物歧化酶；丙二醛；神經(jīng)保護作用；大鼠

腦梗死是嚴重威脅人類健康和生命的常見病、多發(fā)病。腦血疏口服液(國藥準字220070059，國家中藥保護品種)是根據(jù)“氣為血之帥，血為氣之母”的中醫(yī)氣血理論及長期臨床經(jīng)驗研制的中藥(2 類)新藥，具有益氣、活血、化瘀之功效[1]。本實驗觀察腦血疏口服液對大鼠腦梗死后腦組織中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量及動物蘇醒后神經(jīng)行為學(xué)評分、腦組織病理變化的影響，探討腦血疏口服液對腦梗死后腦損傷的保護作用，為腦血疏口服液防治中樞神經(jīng)系統(tǒng)缺血性損傷提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 動物分組與給藥方法 清潔級Sprague-Dawley(SD)大鼠90只，雄性，體重200 g～250 g，由西安交通大學(xué)動物中心提供，動物合格證號：SCXK(陜)2007-001。隨機分為腦梗死對照組、腦梗死干預(yù)組、假手術(shù)組，每組30只大鼠。各組按動物模型建立后不同時間點分為3個亞組：6 h、12 h和24 h，每亞組10只大鼠。動物模型建立前10 d開始，每8 h灌服腦血疏口服液1 mL/kg，腦梗死對照組及假手術(shù)組只灌服等體積生理鹽水。

1．2 動物模型的建立 根據(jù)改良Longa等[2]方法制作大鼠左側(cè)大腦中動脈阻塞(MCAO)模型。頸部正中切開，暴露左側(cè)頸總動脈(CCA)、頸外動脈(ECA)、頸內(nèi)動脈(ICA)。 腦梗死對照組和腦梗死干預(yù)組采用線栓阻塞大腦中動脈24 h，模擬急性腦梗死。假手術(shù)組大鼠切開頸正中皮膚，分理出頸內(nèi)動脈、頸外動脈，但不進行動脈夾閉及結(jié)扎。

1．3 大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分 依照Longa FZ五級評分法，動物模型建立后2 h對大鼠進行神經(jīng)功能評分。

2 結(jié) 果

2．1 大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分 動物模型建立后2 h，腦梗死對照組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分與假手術(shù)組比較明顯增高，腦梗死干預(yù)組較腦梗死對照組明顯降低(P<0．05)。詳見表1。

組別n神經(jīng)行為學(xué)評分假手術(shù)組100腦梗死對照組102.35±0.84腦梗死干預(yù)組101.74±0.971) 與腦梗死對照組比較,1)P<0.05。

2．2 大鼠腦組織病理變化 采用HE染色，光鏡下觀察，假手術(shù)組大鼠腦神經(jīng)元細胞層次較多，結(jié)構(gòu)排列致密，神經(jīng)細胞形態(tài)完整，結(jié)構(gòu)清晰，數(shù)目多，細胞無腫脹，核深染，核仁明顯。腦梗死對照組大鼠腦組織皮層組織結(jié)構(gòu)疏松呈篩網(wǎng)狀，神經(jīng)細胞數(shù)目減少，排列無規(guī)則，細胞腫脹明顯，神經(jīng)元脫失嚴重。且隨時間推移，損傷程度較前加重。腦梗死干預(yù)組各時間點與腦梗死對照組比較，皮層組織結(jié)構(gòu)相對致密，神經(jīng)元脫失減少，神經(jīng)細胞腫脹現(xiàn)象減輕，損傷均有不同程度的減輕。

2．3 大鼠腦組織SOD、MDA含量 動物模型建立后6 h，腦梗死對照組大鼠腦組織中SOD含量明顯低于假手術(shù)組及腦梗死干預(yù)組。隨時間推移，腦梗死對照組及腦梗死干預(yù)組大鼠腦組織中SOD含量進一步降低，且各時間點腦梗死對照組與假手術(shù)組、腦梗死干預(yù)組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)。假手術(shù)組與腦梗死干預(yù)組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0．05)。

各組大鼠腦組織中MDA含量變化趨勢基本相同：隨時間推移而逐漸增加。其中以腦梗死對照組增加最為明顯。各時間點腦梗死對照組大鼠腦組織中MDA含量均高于假手術(shù)組及腦梗死干預(yù)組(P<0．05)，假手術(shù)組與腦梗死干預(yù)組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0．05)。詳見表2。

組別 SOD(U/mg) 6h12h24h MDA(nmol/mg) 6h12h24h假手術(shù)組 311.61±23.171)320.84±19.241)299.55±26.821)11.98±4.031)12.59±1.571)12.03±3.981)腦梗死對照組223.79±21.56 201.34±18.52 178.13±14.37 15.25±2.92 18.13±3.86 21.45±3.50 腦梗死干預(yù)組289.52±31.731)279.12±25.791)265.49±20.451)12.86±3.201)13.89±2.271)14.85±3.411) 與腦梗死對照組比較,1)P<0.05。

3 討 論

腦梗死患者多有動脈粥樣硬化性基礎(chǔ)病變，加之循環(huán)血液中纖維蛋白原、脂蛋白等含量增多，引起血液黏稠度增加，易導(dǎo)致血管內(nèi)血栓形成。腦梗死是一個復(fù)雜的缺血性級聯(lián)反應(yīng)過程，嚴重缺血造成腦組織能量很快耗竭，細胞內(nèi)鈣超載，受鈣離子調(diào)節(jié)的多種酶類被激活，引起磷脂分解和細胞骨架破壞，生成大量的自由基，導(dǎo)致細胞產(chǎn)生不可逆損傷，還包括轉(zhuǎn)錄因子的合成及炎性反應(yīng)介質(zhì)的產(chǎn)生等參與，腦梗死具體發(fā)病機制尚未完全闡明[3-5]。

目前國內(nèi)外研究已證實，急性腦梗死與自由基的大量產(chǎn)生、自由基清除酶功能降低，以及脂質(zhì)過氧化反應(yīng)密切相關(guān)[6，7]。MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的最終產(chǎn)物，SOD是體內(nèi)重要的抗氧化酶，保護細胞免受損傷。乳酸含量和乳酸脫氫酶活力反映了細胞酸中毒水平，可間接反映細胞損傷程度。腦缺血時由于組織氧和能量代謝的物質(zhì)供應(yīng)不足，ATP生成減少，離子泵失效，Na+-K+-ATP酶活性的降低，使大量Na+內(nèi)流、K+外流，Cl-和H2O被動進入細胞內(nèi)，引起神經(jīng)細胞急性滲透性腫脹死亡。

腦血疏口服液的成分主要包括黃芪、水蛭、石菖蒲、牛膝、牡丹皮、大黃、川芎等，近年針對腦血疏口服液方劑中主要成分黃芪、水蛭、川芎等有較多的研究。黃芪含有黃芪皂苷、黃酮、多種氨基酸和微量元素，具有益氣活血，抗脂質(zhì)過氧化和消除氧自由基，擴張冠狀動脈血管，增加血流量，防止血栓形成，增強纖維蛋白溶解活性[8]，組方重用黃芪旨在補氣升陽，達到氣行則血行之功效。上述研究從藥理學(xué)角度為腦血疏口服液治療腦出血提供了理論依據(jù)。

水蛭主要含蛋白質(zhì)、多種氨基酸、微量元素和水蛭素。其中水蛭素是目前最有效的凝血酶特異抑制劑，其含有的多種生物活性成分，具有抗凝、抗血栓、抗炎、抗腫瘤、抗纖維化、腦保護等多種藥理藥效作用[9]?？鼓撬位钚越M分的主要作用，有研究通過體內(nèi)外抗凝血指標測定，證實水蛭中的抗凝血活性組分及作用[10，11]。認為其提取物所含的游離氨基酸可能是其抗凝血作用的有效成分[12]?；钚越M分作用于凝血過程，抑制凝血酶及纖維蛋白溶酶，阻斷凝血反應(yīng)的進行，達到抗凝作用。川芎可以透過血腦屏障，解除腎上腺素引起的血管平滑肌痙攣，擴張血管，改善微循環(huán)，增加血流速度，降低血液黏度，改善血液微循環(huán)和供血不足[13]。

本研究結(jié)果表明，腦血疏口服液能明顯降低MDA含量，提高SOD活性，發(fā)揮拮抗自由基損傷作用，這可能是腦血疏口服液抗腦缺血損傷的作用機制之一。

使用腦血疏口服液可以通過抗凝、溶栓和腦保護多個方面治療腦梗死，具有良好效果，是治療腦梗死較理想的藥物。

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(本文編輯 王雅潔)

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10．3969/j．issn．1672-1349．2015．11．011

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2015-06-14)