T-SPOT對(duì)青少年結(jié)核病診斷價(jià)值的研究

孫嬌 李瑩 王悅 孫秀華 孫炳奇

沈陽(yáng)市胸科醫(yī)院結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室，沈陽(yáng) 110044

T-SPOT對(duì)青少年結(jié)核病診斷價(jià)值的研究

孫嬌 李瑩 王悅 孫秀華 孫炳奇▲

沈陽(yáng)市胸科醫(yī)院結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室，沈陽(yáng) 110044

目的探討結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn) (T-SPOT)在青少年結(jié)核病診斷中的價(jià)值。方法回顧性分析本院2012年1月～2015年2月臨床確診為結(jié)核病并進(jìn)行T-SPOT檢測(cè)的162名青少年患者，并與結(jié)核抗體檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果T-SPOT對(duì)全體患者、肺結(jié)核患者和肺外結(jié)核患者檢測(cè)的陽(yáng)性率分別為63.58%、58.89%和69.44%，明顯高于結(jié)核抗體檢測(cè)的20.99%、23.33%和18.06%。結(jié)論T-SPOT診斷青少年結(jié)核病具有快速、準(zhǔn)確、陽(yáng)性率高的特點(diǎn)，對(duì)青少年人結(jié)核病具有極高的診斷價(jià)值。

結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn);青少年患者;結(jié)核病

全球約有1500萬(wàn)青少年暴露在結(jié)核病患者的環(huán)境中，其中不少人為“潛伏性結(jié)核感染”，即隨時(shí)有可能發(fā)展為傳染性結(jié)核病。全球每年新增的肺結(jié)核青少年人感染者超過(guò)65萬(wàn)，比世界衛(wèi)生組織此前估計(jì)的人數(shù)多出近1/4。青少年肺結(jié)核患者體內(nèi)存在的結(jié)核桿菌往往較少，因此取樣、檢測(cè)都更加困難，給臨床醫(yī)生正確診斷帶來(lái)了巨大的困難。近年來(lái)，結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)(T-SPOT testing，T-SPOT)因其具有高特異度和高靈敏度，被越來(lái)越廣泛地應(yīng)用于結(jié)核病的臨床診斷。本研究對(duì)青少年結(jié)核病患者T-SPOT檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行探討，希望能夠?yàn)榕R床診治提供更多的參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析本院2012年1月～2015年2月臨床確診為結(jié)核病并進(jìn)行T-SPOT檢測(cè)的青少年患者(年齡≤16歲)共162例，平均年齡(14.38±2.26)歲，其中男性78例，平均年齡(14.55±2.31)歲，女性84例，平均年齡(14.21±2.22)歲。初治患者147例，平均年齡(14.33±2.30)歲；復(fù)治患者15例，平均年齡(14.80± 1.78)歲；肺結(jié)核患者90人，平均年齡(14.77±1.60)歲；肺外結(jié)核患者72例，平均年齡(13.89±2.82)歲。初治和復(fù)治患者，肺結(jié)核和肺外結(jié)核分組標(biāo)準(zhǔn)均參照《肺結(jié)核診斷和治療指南》［1］。各組患者的年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。所有患者均排除糖尿病、艾滋病等免疫系統(tǒng)缺陷性疾病。在72例肺外結(jié)核患者中患病率最高的3種肺外結(jié)核病分別為結(jié)核性胸膜炎、頸淋巴結(jié)核和結(jié)核性腦膜炎，其在肺外結(jié)核病中所占比例分別為52.78%、16.67%、12.50%，其中有5名患者同時(shí)患有兩種或兩種以上的肺外結(jié)核病。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)液，F(xiàn)icoll-Hyperque淋巴細(xì)胞分離液；PBS緩沖液；T-SPOT試劑盒 (上海復(fù)星科技有限公司)，該試劑盒中含有包被小鼠抗人IFN-γ單克隆抗體的96孔微孔培養(yǎng)板；特異混合多肽ESAT-6及CFP-10(產(chǎn)地:Oxford Immunote Ltd.，Oxford，UK)；陽(yáng)性對(duì)照為植物血凝素(PHA)；細(xì)胞培養(yǎng)液為AIM-V培養(yǎng)基；濃縮的堿性磷酸酶標(biāo)記小鼠抗人IFN-γ單抗；底物顯色劑BCIP/NBT PLUS。

2.2 T-SPOT與結(jié)核抗體檢測(cè)陽(yáng)性率的比較

1.3 實(shí)驗(yàn)步驟

在162名結(jié)核病患者中，T-SPOT檢測(cè)陽(yáng)性為103例，陽(yáng)性率為63.58%；結(jié)核抗體檢測(cè)陽(yáng)性為34例，陽(yáng)性率為20.99%，T-SPOT檢測(cè)陽(yáng)性率明顯高于結(jié)核抗體檢測(cè)(P＜0.01)。在肺結(jié)核及肺外結(jié)核患者中，T-SPOT檢測(cè)陽(yáng)性率均明顯高于結(jié)核抗體檢測(cè)(P＜0.01)(表2)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2000年以來(lái)，廣東一次能源消費(fèi)總量快速增長(zhǎng)，由2000年的7 983萬(wàn)tce增加到了2015年的 25 662萬(wàn)tce，增速呈放緩趨勢(shì)，由“十五”和“十一五”期間10%以上的年均增長(zhǎng)降至“十二五”期間2.8%的年均增長(zhǎng)，比全國(guó)“十二五”年均增長(zhǎng)低0.6%。分能源品種來(lái)看，2011年以后煤炭消費(fèi)逐年下降，石油消費(fèi)增速放緩、天然氣和一次電力消費(fèi)保持較快增速，其中一次電力消費(fèi)年均增速接近8%。

得益于國(guó)家政策對(duì)新能源電動(dòng)汽車(chē)的強(qiáng)力支持，電動(dòng)汽車(chē)產(chǎn)業(yè)發(fā)展飛速，動(dòng)力電池銷(xiāo)量快速增長(zhǎng)，隨之報(bào)廢的動(dòng)力電池也日漸增多。據(jù)統(tǒng)計(jì)[1]，截至 2017年底，國(guó)內(nèi)新能源電動(dòng)汽車(chē)的保有量已達(dá)180萬(wàn)輛，而新能源汽車(chē)的動(dòng)力電池壽命為4 ～ 5年，早期投入使用的電動(dòng)汽車(chē)電池在2018年迎來(lái)報(bào)廢初期，預(yù)計(jì)2020年報(bào)廢量將超過(guò)23萬(wàn)t（21 GW·h），如圖1所示。

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)和Kappa一致性檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 T-SPOT與結(jié)核抗體檢測(cè)結(jié)果的比較

軍隊(duì)是個(gè)鍛煉人的地方，大多士兵退役之后，憑借自己的奮斗取得事業(yè)成功，但并不是所有人都能得到很好的發(fā)展。謝清森告訴記者，離開(kāi)部隊(duì)，很多士兵不能很好地適應(yīng)新的生活、融入新的環(huán)境。

英國(guó)研究人員報(bào)告說(shuō)，他們建立的最新模型顯示，全球每年新增的肺結(jié)核青少年感染者超過(guò)65萬(wàn)，遠(yuǎn)高于世界衛(wèi)生組織2012年估計(jì)的53萬(wàn)。

表1 T-SPOT與結(jié)核抗體檢測(cè)結(jié)果的比較(n)

如果存在陽(yáng)性對(duì)照無(wú)反應(yīng)即說(shuō)明受檢對(duì)象的細(xì)胞免疫功能可能存在一定的減退，如果陰性對(duì)照出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，那么可能存在操作不當(dāng)所致的污染或者是機(jī)體處于某種病毒急性感染的狀態(tài)(如流感或者急性肝炎導(dǎo)致IFN-γ大量產(chǎn)生)。

用8m l肝素鈉抗凝真空采血管采集患者外周靜脈血，加入Ficoll淋巴細(xì)胞分離液中18～25℃，1600×g，離心28min。用吸液管吸取白色、云霧狀PBMCs層并轉(zhuǎn)移至15ml尖底離心管中，加入RPMI 1640細(xì)胞培養(yǎng)液至10m l。600×g離心7min，棄去上清液用1ml培養(yǎng)液重懸沉淀。加RPMI 1640細(xì)胞培養(yǎng)液至10ml，350×g離心7 min，棄去上清液加350μl AIM-V培養(yǎng)液重懸沉淀。每個(gè)患者樣本使用4個(gè)檢測(cè)孔，每個(gè)檢測(cè)孔加入100μl細(xì)胞終溶液(含有25萬(wàn)個(gè)活細(xì)胞)

表2 T-SPOT與結(jié)核抗體檢測(cè)陽(yáng)性率的比較［n(%)］

3 討論

在162名結(jié)核病患者中，T-SPOT和結(jié)核抗體檢測(cè)均為陽(yáng)性共30例，均為陰性共55例；T-SPOT檢測(cè)陽(yáng)性而結(jié)核抗體檢測(cè)陰性共73例，T-SPOT檢測(cè)陰性而結(jié)核抗體檢測(cè)陽(yáng)性共4例，這兩種方法的一致性比較結(jié)果為Kappa=0.1788，即兩者的一致性較差(表1)。

建立農(nóng)業(yè)園區(qū)，進(jìn)一步豐富農(nóng)副產(chǎn)品，有效帶動(dòng)鄉(xiāng)村旅游業(yè)的發(fā)展，若鄉(xiāng)村旅游業(yè)沒(méi)有得到持續(xù)性新元素注入，則很難確保游客被吸引?？梢越ㄔO(shè)花卉苗木種植基地，也可以結(jié)合當(dāng)?shù)氐乩硖攸c(diǎn)，讓游客充分體驗(yàn)農(nóng)村生活的樂(lè)趣。此外，構(gòu)建農(nóng)村科技園，在進(jìn)行果樹(shù)種植過(guò)程中，可以為游客準(zhǔn)備自己動(dòng)手的場(chǎng)所，讓游客切身體驗(yàn)農(nóng)活的樂(lè)趣?？梢詫⑧l(xiāng)村畜牧場(chǎng)向農(nóng)民開(kāi)放，促使游客更近距離的接觸鄉(xiāng)村風(fēng)情，也可以讓游客參與到牲畜喂養(yǎng)中。

在本研究中,膿腫的直徑≥5cm,置管引流組在住院天數(shù)、膿腔消失時(shí)間明顯優(yōu)于細(xì)針抽吸組(P<0.05)。雖然置管引流術(shù)對(duì)患者術(shù)后的護(hù)理和生活會(huì)造成一些不便,但對(duì)于膿腫直徑≥5cm的患者,置管引流組較細(xì)針抽吸組患者的住院時(shí)間和膿腔消失時(shí)間等明顯更短,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。因此對(duì)于膿腫直徑≥5cm的患者而言,應(yīng)用超聲引導(dǎo)下經(jīng)皮肝穿刺置管引流術(shù)進(jìn)行治療較細(xì)針抽吸術(shù)更適合,療效更顯著。此臨床還應(yīng)注意:①臨床醫(yī)師應(yīng)嚴(yán)格掌握患者適應(yīng)癥,對(duì)于配合度較差、機(jī)體狀況較差者,禁止使用;②穿刺前應(yīng)明確最佳穿刺路徑,避免發(fā)生氣胸等并發(fā)癥;③操作過(guò)程中應(yīng)將針尖處于膿腫液化的中央部位。

酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)技術(shù)(enzyme-linked immunospot assay，ELISPOT)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的細(xì)胞因子檢測(cè)技術(shù)［2-4］，它能夠在單細(xì)胞水平檢測(cè)細(xì)胞因子的分泌情況，比ELISA更靈敏，能從(20～30)萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出1個(gè)分泌該蛋白的細(xì)胞，因此僅需要少量標(biāo)本，在檢測(cè)抗原特異性細(xì)胞數(shù)量的同時(shí)也反映其功能，并與臨床結(jié)果相關(guān)。目前研究認(rèn)為，T-SPOT能夠敏感地診斷活動(dòng)性結(jié)核?。?-7］，在筆者的研究中，將T-SPOT檢測(cè)與傳統(tǒng)結(jié)核抗體檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，兩者都是針對(duì)結(jié)核分枝桿菌的免疫學(xué)檢測(cè)，結(jié)果顯示，在162例臨床確診的青少年結(jié)核患者中，T-SPOT檢測(cè)出103例陽(yáng)性，而結(jié)核抗體僅檢測(cè)出34例陽(yáng)性，檢測(cè)陽(yáng)性率分別為63.58%和20.99%，T-SPOT檢測(cè)的陽(yáng)性率明顯高于結(jié)核抗體。

另外筆者的研究數(shù)據(jù)顯示，在全體青少年患者中，肺外結(jié)核患者為72例，占全體患者的44.44%。肺外結(jié)核［8-10］由于發(fā)病形式多樣、多臟器性，發(fā)病遲緩，臨床特征不典型［11-12］，獲得細(xì)菌學(xué)依據(jù)困難，有些需手術(shù)或穿刺活檢確診，很多患者不能接受，因此肺外結(jié)核誤診、漏診極為常見(jiàn)，常因此而延誤治療，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后。在筆者的研究中，T-SPOT對(duì)肺外結(jié)核檢測(cè)的陽(yáng)性率可以達(dá)到69.44%，遠(yuǎn)高于結(jié)核抗體的18.06%，因此TSPOT檢測(cè)可為肺外結(jié)核診斷和治療提供重要依據(jù)。

綜上所述，T-SPOT在青少年結(jié)核病的診斷與鑒別診斷方面有重要臨床應(yīng)用價(jià)值［13］，尤其是不宜獲得痰標(biāo)本的低齡青少年患者和肺外結(jié)核患者，此檢測(cè)的診斷意義更大，并且整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作相對(duì)簡(jiǎn)單快速，能夠早期提供靈敏特異的結(jié)果，幫助臨床醫(yī)師作出正確診斷［14-15］，但由于此項(xiàng)檢測(cè)價(jià)格較貴，且不是結(jié)核病診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，因此不建議作為臨床診斷的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，應(yīng)更多地用于診斷困難患者的輔助檢測(cè)手段。

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Study on diagnostic value of T-SPOT for adolescent tuberculosis

SUN Jiao LIYing WANG Yue SUN Xiu-hua SUN Bing-qi▲
Laboratory of Tuberculosis,Shenyang Chest Hospital,Shenyang 110044,China

ObjectiveTo evaluate the value of tuberculosis infection T cell-SPOT testing(T-SPOT)in the diagnosis of adolescent tuberculosis.Methods162 adolescent patients clinically diagnosed with tuberculosis and given T-SPOT in our hospital from January 2012 to February 2015 were analyzed retrospectively and the results was compared with the tuberculosis antibody detection result.ResultsThe positive rates of T-SPOT for all patients,pulmonary tuberculosis patients and extra pulmonary tuberculosis patientswas 63.58%,58.89%and 69.44%respectively,which was significantly higher than that of tuberculosis antibody detection(20.99%,23.33%and 18.06%respectively).ConclusionT-SPOT has the features of rapidness,accuracy and high positive rate in the diagnosis of adolescent tuberculosis,which is of high diagnostic value for adolescent tuberculosis.

Tuberculosis infection T cell-SPOT testing;Adolescent patients;Tuberculosis

R52

A

1674-4721(2015)09(c)-0135-03

2015-04-13 本文編輯:許俊琴)

▲通訊作者