E-selectin和sICAM-1在兒童肺炎支原體感染中的價(jià)值

李蘇亮，葉 蕓(西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，西安 710077;通訊作者，E-mail:yeyun236@163．com)

肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae，MP)是兒童呼吸道感染的常見病原體之一，其導(dǎo)致的肺炎及肺外并發(fā)癥對(duì)兒童健康危害嚴(yán)重［1，2］。MP在感染性疾病中的地位越來(lái)越受到各國(guó)學(xué)者的關(guān)注，臨床診斷MP感染的方法很多，但尚無(wú)早期、快速、特異性較高的檢測(cè)手段［3］。近年來(lái)的研究顯示，黏附分子(adhesion molecules，AMs)在兒童肺炎支原體肺炎的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。本研究旨在通過(guò)探討E-選擇素與可溶性細(xì)胞間黏附分子-1在肺炎支原體患兒中的變化，評(píng)價(jià)其在MP感染診斷中的應(yīng)用價(jià)值，對(duì)判斷病情和臨床治療提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1．1 標(biāo)本來(lái)源

選取我院兒科2013-12～2014-05住院并確診為肺炎支原體肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP)，且臨床資料完整的患兒共90例，其中急性期患兒48例(男22例，女26例)，年齡3-12歲，平均年齡為(5．5±3．2)歲;恢復(fù)期患兒42例(男20例，女22例)，年齡3-12歲，平均年齡為(5．8±2．6)歲。所有入選患兒均符合《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］。急性期的判定標(biāo)準(zhǔn)為發(fā)病10 d內(nèi)，有MPP的癥狀和體征且經(jīng)抗生素治療無(wú)效，未經(jīng)激素和免疫抑制劑治療?；謴?fù)期判定標(biāo)準(zhǔn)為退熱2周以上，所有MPP臨床癥狀和體征消失。選取同期體檢的40例健康兒童作為對(duì)照組(男18例，女22例)，年齡3-12 歲，平均年齡為(5．6 ±3．1)歲。本項(xiàng)研究得到了院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，并獲得了所有研究對(duì)象或患者親屬的同意。

1．2 血標(biāo)本的采集

所有患者和對(duì)照組分別晨起空腹采取肘靜脈血3 ml于EDTA抗凝試劑管中，混合10-20 min后，標(biāo)本采集后30 min內(nèi)于2-8℃離心20 min左右(2 000-3 000 r/min)，分離上清液，置于Ep管。統(tǒng)一編號(hào)保存將標(biāo)本放于-80℃保存。

1．3 主要試劑與儀器

急性期與恢復(fù)期肺炎支原體肺炎患兒血漿MPIgM抗體滴度采用賽樂迪亞-麥克Ⅱ肺炎支原體抗體檢測(cè)試劑盒，由日本富士瑞必歐株式會(huì)社生產(chǎn)，以血漿滴度方式報(bào)告結(jié)果?？扇苄约?xì)胞間黏附分子-1 ELISA試劑盒，購(gòu)自上海邦景實(shí)業(yè)有限公司。E選擇素ELISA試劑盒，購(gòu)自上海科鑒生物有限公司。Thermo Scientific Multiskan FC酶標(biāo)儀由賽默飛世爾(上海)儀器有限公司生產(chǎn)。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSSl8．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。非參數(shù)資料用Person χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析;E-selectin與sICAM-1呈偏態(tài)分布，用中位數(shù)(四分位數(shù)間距)表示，多組間比較用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)判斷各組間差異的顯著性;然后采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)進(jìn)一步做兩兩比較。E-selectin與sICAM-1之間的關(guān)系采用Spearman相關(guān)分析;診斷效能用ROC曲線評(píng)價(jià)，總體診斷效能用AUC及95%可信區(qū)間表示，以P＜0．05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 各組一般資料比較

三組患兒在年齡、性別分布上差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0．05)，急性期與恢復(fù)期MP-IgM抗體滴度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．001，見表1)。

2．2 三組血漿E-selectin與sICAM-1測(cè)定結(jié)果

經(jīng)非參數(shù)Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，三組血漿E-selectin和sICAM-1水平在組間均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P ＜0．05，見表2)。

2．3 血漿E-selectin與sICAM-1相關(guān)性分析

結(jié)果顯示，急性期肺炎支原體肺炎患者血漿E-selectin 與 sICAM-1 呈正相關(guān)(r=0．758，P ＜0．01，見圖1)。

2．4 血漿E-selectin與sICAM-1在診斷急性期肺炎支原體肺炎中作用分析

從圖2中ROC曲線可見，E-selectin診斷急性期肺炎支原體肺炎的AUC為0．852(95%可信區(qū)間為0．751-0．952)，最佳臨界點(diǎn)為4．65ng/ml，其敏感度為80．0%，特異度為78．5%;sICAM-1診斷急性期肺炎支原體肺炎的AUC為0．859(95%可信區(qū)間為0．764-0．954)，最佳臨界點(diǎn)為 42．50 ng/ml，其敏感度為80．5%，特異度為80．0%。

表1 各組一般資料比較 (例)Table 1 Baseline data of children with mycoplasma pneumoniae infection and normal controls(cases)

表2 三組血漿E-selectin和sICAM-1水平比較 (ng/ml)Table 2 Comparison of plasma E-selectin and sICAM-1 levels between three groups (ng/ml)

圖1 血漿E-Selectin與sICAM-1相關(guān)性分析Figure 1 The correlation analysis between plasma E-selectin and sICAM 1 in children with acute Mycoplasma pneumoniae infection

3 討論

肺炎支原體是一種基因組很小、無(wú)細(xì)胞壁、具有多形性且自身不能合成膽固醇的原核生物［5］。MP在人類感染性疾病中的地位越來(lái)越受到各國(guó)學(xué)者的關(guān)注，臨床診斷 MP感染的方法很多［6，7］，但是均存在一定的局限性［8］。AMs是指由細(xì)胞產(chǎn)生、存在于細(xì)胞表面、介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間或細(xì)胞與基質(zhì)間相互接觸和結(jié)合的一類分子，在許多疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用［9］。E-selectin是AMs中選擇素超家族成員之一，主要由毛細(xì)血管和后微靜脈的內(nèi)皮細(xì)胞分泌。E選擇素存在于活化的血管內(nèi)皮細(xì)胞表面。炎癥組織釋放的白細(xì)胞介素-1(IL-1)及腫瘤壞死因子(TNF)等細(xì)胞因子可活化脈管內(nèi)皮細(xì)胞，刺激E選擇素的合成，并通過(guò)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的相互作用發(fā)揮重要作用［10］。sICAM-1屬于AMs中免疫球蛋白家族成員之一，在血管內(nèi)皮細(xì)胞中高度表達(dá)，參與白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的黏附、滲出并促進(jìn)炎癥的發(fā)生［11］。

圖2 血漿E-selectin和sICAM-1診斷急性期肺炎支原體肺炎的ROC曲線圖Figure 2 ROC of diagnostic parameters for children with Mycoplasma pneumoniae infection

本研究結(jié)果顯示，急性期肺炎支原體肺炎患者M(jìn)P-IgM滴度水平顯著高于恢復(fù)期患者;急性期肺炎支原體肺炎患者血漿E-selectin和sICAM-1水平顯著高于恢復(fù)期患者和健康對(duì)照組，三組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0．05)。經(jīng)Spearman相關(guān)性分析表明，急性期患兒血漿E-selectin與sICAM-1呈正相關(guān)(P＜0．05)。在炎癥過(guò)程中 E-selectin與 sICAM-1通過(guò)相互作用，形成網(wǎng)絡(luò)，參與細(xì)胞增殖功能的調(diào)控，與肺炎支原體肺炎的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

目前肺炎支原體抗體檢測(cè)被臨床廣泛應(yīng)用于肺炎支原體感染的診斷，但是由于其在患兒血清中出現(xiàn)較晚，且具有檢測(cè)過(guò)程耗時(shí)較長(zhǎng)、易受其他因素干擾、特異度不高等缺點(diǎn)，因此并不是急性肺炎支原體感染的最佳檢測(cè)指標(biāo)。本研究中，從診斷急性期肺炎支原體肺炎的ROC曲線可見血漿E-selectin和sICAM-1對(duì)急性肺炎支原體感染具有較高的特異度及靈敏度。血漿E-selectin與sICAM-1對(duì)急性肺炎支原體感染具有良好的診斷效能，且具有耗時(shí)短、花費(fèi)少等優(yōu)點(diǎn)，具有臨床推廣價(jià)值。

綜上所述，急性期肺炎支原體肺炎患者血漿E-selectin和sICAM-1水平顯著升高，在肺炎支原體肺炎發(fā)病、發(fā)展、預(yù)后中有重要的臨床價(jià)值。血漿E-selectin和sICAM-1結(jié)合其他臨床指標(biāo)，可以用于臨床診斷急性期和恢復(fù)期MMP，也可作為判斷疾病嚴(yán)重程度和評(píng)價(jià)臨床療效的重要指標(biāo)之一。

［1］Xu YC，Zhu LJ，Xu D，et al．Epidemiological characteristics and meteorological factors of childhood Mycoplasma pneumoniae pneumonia in Hangzhou［J］．World J Pediatr，2011，7(3):240-244．

［2］Youn YS，Lee KY，Hwang JY，et al．Difference of clinical features in childhood Mycoplasma pneumoniae pneumonia［J］．BMC Pediatr，2010，6(10):48-50．

［3］Zhang L，Zong ZY，Liu YB，et al．PCR versus serology for diagnosing Mycoplasma pneumoniae infection:a systematic review＆meta-analysis［J］．Indian J Med Res，2011，134(9):270-280．

［4］胡亞美，江載芳．諸福棠實(shí)用兒科學(xué)［M］．7版．北京人民衛(wèi)生出版社，2003:1204-1205．

［5］Chang HY，Prince OA，Sheppard ES，et al．Processing is required for a fully functional protein P30 in Mycoplasma pneumoniae gliding and cytadherence［J］．J Bacteriol，2011，193(20):5841-5846．

［6］Michelow IC，Olsen K，Lozano J，et al．Diagnostic utility and clinical significance of naso-and oropharyngeal samples used in a PCR assay to diagnose Mycoplasma pneumoniae infection in children with community-acquired pneumonia［J］．J Clin Microbiol，2004，42(7):3339-3341．

［7］Zhang L，Zong ZY，Liu YB，et al．PCR versus serology for diagnosing Mycoplasma pneumoniae infection:a systematic review＆meta-analysis［J］．Indian J Med Res，2011，134(9):270-280．

［8］李蘇亮，葉蕓，邢麗麗．兒童肺炎支原體感染及其耐藥性分析［J］．世界臨床藥物，2012，33(1):34-36．

［9］Farahani E，Patra HK，Jangamreddy JR，et al．Cell adhesion molecules and their relation to(cancer)cell stemness［J］．Carcinogenesis，2014，35(4):747-759．

［10］Graczyk M，Przybyszewski M，Kuz＇miński A，et al．Role of E-selectin and platelet endothelial cell adhesion molecule 1 in gastritis in food allergy patients［J］．Postepy Dermatol Alergol，2013，30(5):271-276．

［11］Witkowska AM，Borawska MH．Soluble intercellular adhesion molecule-1(sICAM-1):an overview［J］．Eur Cytokine Netw，2004，15(2):91-98．