一種改良蘇木素染液的配制方法

摘要：目的 準(zhǔn)確控制蘇木素染液配制過程中所需試劑的量，提高染色能力，節(jié)約成本。方法 準(zhǔn)確稱取蘇木素2g，量取無水酒精150ml，用無水酒精徹底溶解蘇木素，再依次加入碘酸鈉240mg、硫酸鋁鉀20g、檸檬酸1g。結(jié)果 新配蘇木素染液著色能力明顯提高且無氧化膜產(chǎn)生，使用時間周期長，無需過濾。結(jié)論 染液配制簡單，細(xì)胞核染色鮮艷，蘇木素用量少，減少浪費(fèi)。

關(guān)鍵詞：蘇木精；氧化；方法蘇木素-伊紅染色法，也就是我們常說的HE染色技術(shù)。是各個醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室最常用的染色方法，也是各病理科最經(jīng)典的染色技術(shù)。然而蘇木精染液的配制是HE染色技術(shù)的核心，它決定染色質(zhì)量的優(yōu)劣。一般Harris蘇木精染液的配制[1]時所需蘇木素多，配制較為繁瑣，也具有一定的危險。為了節(jié)約成本，減少浪費(fèi)，我們摸索一套自己的配制方法。

1 資料與方法

1.1一般資料蘇木素2g，無水酒精150ml，碘酸鈉240mg，硫酸鋁鉀20g，檸檬酸1g，蒸餾水800ml。

1.2方法取一只2000ml燒杯，蘇木素2g，無水酒精150ml，將酒精和蘇木素倒入燒杯中，將燒杯置于磁力攪拌器進(jìn)行攪拌10min，蘇木素完全溶解后，加入800ml蒸餾水，攪拌5min后，加入碘酸鈉240mg攪拌5min，再加入20g硫酸鋁鉀，攪拌40min。待蘇木紅也硫酸鋁鉀完全結(jié)合后，最后加入1g檸檬酸終止氧化，攪拌5min后加入甘油120ml，攪拌2h。棕色瓶盛裝，放入陰暗地方室溫保存2w后直接使用。

2 結(jié)果

蘇木素染液無需過濾，無沉渣和氧化膜形成。染液著色能力強(qiáng)，切片染色藍(lán)化后，細(xì)胞核著色清晰，細(xì)胞質(zhì)清晰可見，呈鮮艷的藍(lán)色。大大減少了試劑的消耗。

3 討論

蘇木精為一種無色或談灰黃色粉末，分子式為C16H14O6，分子量302.288。它是一種天然染料，是由中南美洲等地產(chǎn)的一種稱\"洋蘇木素樹\"（hematoxylon campechianum）的樹芯中提取出來的。蘇木素的配方很多，其原理是一樣的，都是先氧化，使蘇木素的分子結(jié)構(gòu)失去兩個氫原子，并使其中的一個苯環(huán)轉(zhuǎn)化成具有醌型結(jié)構(gòu)的苯環(huán)而成為蘇木紅（hematein）[2]，并在媒染劑的作用下，與細(xì)胞核染色質(zhì)結(jié)合。常用的氧化蘇木素的方法有兩種：一是自然氧化。但是氧化時間周期過長，而氧化的程度也難以掌握；所以現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室一般采用的是第二種方法，即人工氧化的方法，人工氧化就是在染液中加入氧化劑，達(dá)到快速氧化蘇木素的目的。氧化劑的種類很多，如高錳酸鉀、過氧化氫、氧化汞、碘酸鈉等，現(xiàn)在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都基本選擇氧化汞和碘酸鈉。因?yàn)椴捎醚趸趸K木素，存在以下問題：①需要煮沸；②蘇木素用量大且易產(chǎn)生大量的氧化物漂浮在染液的表面，污染切片，不易洗凈，以致影響鏡檢；③使用氧化汞對環(huán)境和人體都有一定的危害；④配制復(fù)雜，不易掌握氧化程度[3]，所以我們科室選用碘酸鈉。它的優(yōu)點(diǎn)是室溫就可以氧化蘇木素，氧化后產(chǎn)生的碘化鈉也是無害的，染液的穩(wěn)定性好。我們選用半氧化蘇木素，這樣染液中同時有蘇木素、蘇木紅、蘇木紅的活性氧化產(chǎn)物和非活性的超氧化產(chǎn)物的存在，染液效果穩(wěn)定，且使用時間長。通過四次配制，連續(xù)半年的使用，我們發(fā)現(xiàn)新配的蘇木素在37℃染色更佳。并且染色時不需要分化，也不需要額外地加入冰醋酸。新配的蘇木素經(jīng)滴染濾紙法檢測，色層環(huán)寬，呈深藍(lán)色，色環(huán)內(nèi)為大片暗橘黃色，染色力強(qiáng)、效果好[4]。在各種蘇木素染液配制中，1g蘇木素所使用的媒染劑極為懸殊，我們這里1g蘇木素，使用媒染劑為10g，減少了染液在染色過程中硫酸鋁鉀結(jié)晶的析出，防止結(jié)晶析出，污染切片。無水乙醇能較快溶解蘇木精。配制過程中加入2g檸檬酸，可抵消氧化劑的氧化，是蘇木精和蘇木紅在溶液中保持平衡，同時又增加了細(xì)胞核的選擇性，使細(xì)胞核染色清晰、細(xì)致，還可防止霉菌生長。甘油延緩了蘇木精染液蒸發(fā)，防止蘇木精過度氧化，延長了蘇木精染液的使用時間。

參考文獻(xiàn)：

[1]王伯沄，李玉松，黃高昇，等.編著.病理學(xué)技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000.133.

[2]梁英杰，凌啟波，張威，編著.臨床病理學(xué)技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2011.68.

[3]李紀(jì)理《改良Harris蘇木素液染色效果的觀察[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2008，7（9）：151.

[4]王穎，薛世泉，張澤兵，等.測試蘇木精和VG染液的滴染濾紙法[J].診斷病理學(xué)雜志2010.8：308.

編輯/許言