深低溫冷凍同種異體肌腱移植的實驗研究

摘要：目的研究深低溫冷凍同種異體肌腱移植的治療肌腱缺損的可行性以及移植后異體肌腱的形態(tài)學(xué)和生物力學(xué)的變化情況。方法采用兔跟腱缺損修復(fù)模型，共對照研究20只兔，將20只兔分為對照組和研究組，每組10只，對照組兔采用自體跟腱移植，研究組兔采用經(jīng)深低溫冷凍的同種異體跟腱移植，并于術(shù)后15d及術(shù)后1月對兩組兔的移植跟腱進行整體性觀察及組織學(xué)研究情況。結(jié)果兩組兔的移植跟腱在整體性觀察、組織學(xué)檢驗結(jié)果大致相同。結(jié)論深低溫冷凍同種異體肌腱移植具有與自體肌腱移植大致相同的形態(tài)學(xué)及組織學(xué)特性，可代替自體肌腱進行移植，可用于治療肌腱缺損。

關(guān)鍵詞：深低溫；異體；移植在骨科手術(shù)中經(jīng)常需要進行肌腱移植用以修復(fù)肌腱缺損以及韌帶重建[1]，尤其以手部肌腱缺損修復(fù)以及膝關(guān)節(jié)交叉韌帶重建較為多見，但選用自體肌腱移植則會因肌腱來源而受到很大的限制[2]，隨著科學(xué)技術(shù)以及醫(yī)療水平的不斷發(fā)展，對同種異體肌腱移植的免疫學(xué)研究逐漸成熟，可通過對異體肌腱進行深低溫處理，使異體組織抗原明顯降低，并可長期保存[3]，通過這種方法可突破自體肌腱移植的來源限制，對臨床上治療肌腱缺損以及韌帶斷裂重建有十分重要的意義。文章通過研究深低溫冷凍同種異體肌腱移植的治療肌腱缺損的可行性以及移植后異體肌腱的形態(tài)學(xué)和組織學(xué)的變化情況，為臨床應(yīng)用提供實驗室依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料文章選用健康白兔作為研究對象，共選用20只健康雄白兔，所有白兔在月齡、體重、飼養(yǎng)方面基本相同，將20只白兔隨機分為對照組與研究組，每組各10只。并另取10只雄白兔取雙側(cè)跟腱供研究組移植使用。

1.2儀器與設(shè)備采用-85℃深低溫冷凍箱、DCS-25T電子萬能試驗機、手術(shù)顯微鏡、普通光學(xué)顯微鏡以及函數(shù)記錄儀。

1.3深低溫冷凍同種異體肌腱制作將另取的10只雄白兔用地西泮注射液麻醉，麻醉后白兔取俯臥位固定四肢，消毒鋪單，小腿后側(cè)切口處再次使用2%利多卡因注射液局部麻醉，切開后暴露跟腱全長，并將跟腱取下，取跟腱共20條，每條跟腱長度約為4cm左右，將取出的跟腱用生理鹽水沖洗干凈，并放入無菌聚乙烯袋中密封，在普通冰箱（約-20℃左右）中放置6h后放入深低溫冷凍箱（-85℃）冷凍2w，使用前應(yīng)取出在常溫下放置12h緩慢復(fù)溫，移植前使用30℃生理鹽水浸泡5min。

1.4手術(shù)方法對照組10只白兔地西泮麻醉后在切口處使用2%利多卡因局麻，白兔取俯臥位固定四肢，消毒鋪單，將雙側(cè)跟腱取下對調(diào)移植，移植后逐層縫合；研究組10只白兔在同樣的麻醉消毒下將雙側(cè)跟腱切下，將先前制作好的深低溫冷凍同種異體分別移植，移植后逐層縫合。所有白兔術(shù)后雙后肢均給予半屈曲40°石膏固定，同時將研究組10只白兔做好標(biāo)記。

1.5術(shù)后處理所有白兔均按照標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)，切口定期換藥直至愈合。所有白兔均未出現(xiàn)死亡、傷口感染、石膏脫落情況。術(shù)后3w去除外固定，自由活動，術(shù)后1月對白兔進行形態(tài)學(xué)及組織學(xué)檢查。

1.6觀察指標(biāo)

1.6.1形態(tài)學(xué)檢查主要觀察項目為白兔行走奔跑情況，雙后肢活動度及肌力，以及移植吻合口的形態(tài)學(xué)肉眼觀察結(jié)果。

1.6.2組織學(xué)檢查研究新鮮跟腱、深低溫冷凍處理后的跟腱以及移植1月后的跟腱及其吻合處組織，進行病理切片、HE染色，觀察不同類型時期的跟腱組織學(xué)變化。

2結(jié)果

移植1個月后，兩組白兔活動情況基本相同，研究組白兔切口愈合良好，未見明顯紅腫及滲出，深低溫冷凍同種異體跟腱肉眼觀察跟腱有光澤，光學(xué)顯微鏡下可見跟腱束結(jié)構(gòu)清晰，無病理學(xué)改變，電鏡下可見跟腱細胞膠原纖維平行排列，細胞胞質(zhì)稍厚，有6只白兔移植跟腱發(fā)現(xiàn)部分跟腱細胞內(nèi)有髓樣小體，空泡稍變性，對照組白兔切口愈合良好，無明顯紅腫及滲出，自體跟腱肉眼觀察有光澤，光學(xué)顯微鏡下跟腱束結(jié)構(gòu)清晰，無病理學(xué)改變，電鏡下可見跟腱膠原纖維排列平行，綜上所述，兩組白兔的移植跟腱檢查結(jié)果基本相同。

3討論

肌腱是人與動物體內(nèi)的一種致密結(jié)締組織，是參與機體運動的重要部分，其主要構(gòu)成有：腱細胞、腱基質(zhì)及膠原纖維束等。但機體運動導(dǎo)致肌腱受傷、壞死、缺損較為多見，尤其為人類，由于交通事故等原因引起的外傷常引起肌腱及韌帶的損傷及缺損，因此，肌腱移植在骨科中較為多見，但自體肌腱移植術(shù)后雖可修復(fù)缺損的肌腱，但均造成取腱處正常運動結(jié)構(gòu)的損壞，雖近期內(nèi)表現(xiàn)不明顯，但長期則會誘發(fā)原正常運動結(jié)構(gòu)的退變畸形等，而同種異體肌腱來源廣泛而充足，且取材方便，通過同種異體肌腱的移植，可大大縮短手術(shù)時間，更重要的在于對患者健康部位不再造成新的損傷[1]，因此，臨床中應(yīng)用同種異體肌腱移植治療肌腱及韌帶缺損的方法逐漸增多。雖然同種異體肌腱移植的應(yīng)用逐漸增多，但需考慮人體正常的免疫機制，未經(jīng)處理的異體肌腱移植后可出現(xiàn)明顯的免疫排斥，因此，必須對同種異體肌腱進行一定的處理，盡可能的減少排異反應(yīng)的出現(xiàn)，以提高移植成功率。本研究中研究組有6只白兔移植跟腱發(fā)現(xiàn)部分跟腱細胞內(nèi)有髓樣小體，空泡稍變性，可見有細胞器受損，考慮為受體腱細胞侵入到移植跟腱時出現(xiàn)了輕度排異反應(yīng)。雖然有輕度排異反應(yīng)出現(xiàn)，但不影響整體跟腱移植的成功，因此，深低溫冷凍處理的同種異體肌腱移植是可行的。

4結(jié)論

本實驗研究通過對異體組織進行深低溫冷凍處理，從而達到降低組織抗原的目的，并將深低溫冷凍同種異體肌腱成功移植，移植后通過光學(xué)顯微鏡及電鏡對異體移植肌腱進行檢查并于自體肌腱移植進行對比，對比研究后得出：深低溫冷凍同種異體肌腱移植后與自體肌腱移植有基本相同的治療效果，可以供臨床上使用深低溫冷凍同種異體肌腱移植治療肌腱缺損提供可靠的實驗室依據(jù)。

參考文獻:

[1]徐光輝，孫康，徐強，等.深低溫冷凍異體肌腱移植的組織學(xué)和生物力學(xué)研究[J].中國矯形外科雜志，2008，16（24）：1883-1886.

[2]孫康，王立德，張羽飛，等.同種異體材料移植重建膝關(guān)節(jié)交叉韌帶[J].中國矯形外科雜志，2001，2：174-176.

[3]戰(zhàn)杰，田立杰，許楊，等.深低溫冷凍同種異體肌腱移植的遠期療效觀察[J].實用手外科雜志，2002，16（1）：47-48.編輯/申磊