全自動電泳系統(tǒng)檢測血紅蛋白結(jié)果分析

摘要：目的了解本市區(qū)血紅蛋白病的類型及陽性發(fā)生率。方法采用全自動蛋白電泳儀分析系統(tǒng)對12480 份患者標(biāo)本進(jìn)行測定分析。其中陽性結(jié)果再進(jìn)行基因檢測。結(jié)果在12480例患者中發(fā)現(xiàn)1460例，陽性發(fā)生率11.7%，其中α-地中海貧血表型陽性454例，陽性率3.2%，β地中海貧血表型陽性817例陽性率5.6%，異常血紅蛋白病189例，陽性率1.3%。結(jié)論血紅蛋白電泳技術(shù)的普及和應(yīng)用，能有效地篩查出高危患者，對進(jìn)一步進(jìn)行基因診斷和遺傳咨詢提供幫助。

關(guān)鍵詞：血紅蛋白電泳；地中海貧血；血紅蛋白病血紅蛋白電泳在異常血紅蛋白病的檢出和珠蛋白合成障礙性貧血的實驗室診斷中有非常重要的作用，依據(jù)定量測出HbA1、HbA2，HbF含量，將地中海貧血進(jìn)行初步分類為α地中海貧血簡稱α地貧或β地中海貧血簡稱β地貧，及異常血紅蛋白??；而地中海貧血是我國南方地區(qū)最常見的遺傳病之一，也是全世界最常見的遺傳病之一[1]，我國高發(fā)區(qū)以南方為主，尤其廣東，廣西，云南，貴州等省份，我市處于廣西地域，為了解血紅蛋白病的檢出情況，對2012年1月~2013年8月12480例血紅蛋白電泳結(jié)果分析如下。

1資料與方法

1.1一般資料12480份送檢標(biāo)本來源于2010 年8 月～2013 年10月我院門診與住院患者，年齡2～65歲，其中男性標(biāo)本5663份，女性標(biāo)本6817份。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本要求與處理血紅蛋白液（Hb）制備：采集枸櫞酸鈉抗凝血標(biāo)本2 mL，抗凝劑與血液之比1∶9，標(biāo)本離心(5 000 轉(zhuǎn)/ min) 5 min，去除血漿，用10 倍生理鹽水冼滌紅細(xì)胞3次，后取紅細(xì)胞50μl 加溶血素250 μL震蕩混勻室溫放置5 min后即可。

1.2.2血紅蛋白電泳，采用Microtech 696PC(藍(lán)鉆) 全自動蛋白電泳儀分析系統(tǒng)，操作過程包括：取待測（Hb）液，點樣，電泳。變性、染色、脫色，烘干，自動掃描定量測出結(jié)果。

1.2.3正常參考值成人男女HbA2為1.5%～3.5%，并且沒有出現(xiàn)異常血紅蛋白區(qū)帶。如HbA2<2.0%，或出現(xiàn)異常血紅蛋白帶(HbH、HbBart's)，判為α地中海貧血表型陽性；如HbA2>3.5%或出現(xiàn)異常血紅蛋帶(HbF>3.5%)，則判為β地中海貧血表型陽性。如出現(xiàn)HbE、HbG 區(qū)帶為其它血紅蛋白病。

1.3采用統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析

2結(jié)果

根椐上述陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：血紅蛋白電泳對12480 例送檢標(biāo)本篩查出α、β地貧表型陽性1460例，陽性率11.7%血紅蛋白病189 例。陽性率1.3%其中α地貧表型陽性454 例，陽性率3.2%；β地貧表型陽性817例，陽性率5.6%，異常血紅蛋白病189例，陽性率1.3%，見表1。

3討論

3.1血紅蛋白電泳目的是檢測并確認(rèn)正常和異常的血紅蛋白病[2]，根據(jù)各種血紅蛋白等電點不同，在pH8.6的緩沖液中，所帶電荷量不同，故將其分開成不同的區(qū)帶，能夠定量檢測HbA1、HbA2、HbF含量，并能同時檢測各種異常血紅蛋白含量，依據(jù)Hb各組含量計算，可將地貧初步分為α、β地貧，本組結(jié)果顯示，12480例地貧檢測者中檢出485例，陽性率11.7%，其中β地貧陽性率占5.6%居多。本市區(qū)地貧患者存在比例高于文獻(xiàn)9.77%[3]分析原因：可能與檢測方法有關(guān)，因本組檢查是采用全自動系統(tǒng)，受儀器設(shè)備和實驗室環(huán)境及相關(guān)因素影響，此外周邊外來人員增多有關(guān)，因此重示地貧篩查檢測。

3.1.1根據(jù)發(fā)病機制α珠蛋白生成障礙性貧血 引起本病的基因異常多數(shù)是基因缺失，α基因缺失數(shù)目多少與α珠蛋白鏈缺乏程度及臨床表現(xiàn)嚴(yán)重性平行。但少數(shù)患者并無α基因缺失，而是由于α基因發(fā)生點突變或數(shù)個堿基缺失，影響了RNA加工、mRNA翻譯或?qū)е潞铣傻摩林榈鞍祖湶环€(wěn)定，最終引起α珠蛋白鏈缺乏。當(dāng)α珠蛋白鏈缺乏時，沒有足夠的α珠蛋白鏈與β鏈配對形成HbA，剩余的β鏈形成HbH(β4)，而β親氧力過高，不宜運輸氧，且不穩(wěn)定，發(fā)生沉淀，形成包涵體，引起溶血。當(dāng)α鏈完全缺如時，胎兒期無HbF(α2γ2)形成，僅有Hb Barts(γ4)，而γ4有極高親氧力，不能向組織釋放足夠氧，以致胎兒缺氧而死。血紅蛋白電泳分析HbH占5%～40%，HbA2減至1%～2%，HbF(包括微量：Hb Basts)＜3%，其余為HbA。α珠蛋白生成障礙性能超群貧血正常人自父母雙方各繼承2個α珠蛋白基因(αα/αα)，合成足夠的α珠蛋白鏈。若自父母繼承一個或一個以上有缺陷的α基因，則導(dǎo)致α珠蛋白生成障礙性貧血，臨床表現(xiàn)的嚴(yán)重程度取決于異常α基因的數(shù)目。若一個基因異常(α-/αα)患者無血液學(xué)異常表現(xiàn)：若2個α基因異常(α-/α-或-/αα)，紅細(xì)胞呈小細(xì)胞低色素性改變，無顯著性溶血和貧血；若3個α基因異常(-/α-)，有代償性溶血性貧血表現(xiàn)，如血紅蛋白H??；若4個α基因異常，無α珠蛋白鏈生成，導(dǎo)致胎兒水腫綜合征(Hb Barts)。

3.1.2 β珠蛋白生成障礙性貧血 正常人自父母雙方各繼承一個正常β珠蛋白基因，合成正常量的β珠蛋白鏈。若自父母繼承了異常β基因，則導(dǎo)致本病。自父母一方繼承一個異常β基因，從另一方繼承一個正常β基因，患者則為雜合子，即β珠蛋白生成障礙性貧血，有約半量β鏈合成，病情減輕。紅蛋白電泳示HbA2增高(3%～8%)，HbF正?；蜉p度增高，一般≤5%。

若自父母雙方各繼承一個異常β基因，則患者為純合子，即β0珠蛋白生成障礙性貧血，沒有或極少β鏈生成，病情嚴(yán)重。血紅蛋白電泳或堿變性實驗見HbF顯著增高，大多占血紅蛋白的60%～90%，少數(shù)<30%。HbA2可正常，減少或輕度增加。HbA缺如(純合子)或少量(雙雜合子)，β鏈與α鏈合成比率為0～0.3。

3.2綜上所述，地貧屬于珠蛋白基因缺失或突變形成的遺傳性疾病，普遍以無明顯癥狀的攜帶者存在，會遺傳傳給下一代。如果夫婦雙方為同型雜合子則孕育重型地貧患兒機率高，臨床癥狀典型。地貧暫無有效的治療方法，防治是主要措施，提高預(yù)防意識，避免出生缺陷；現(xiàn)階段國內(nèi)用于診斷為基因診斷，但是基因診斷技術(shù)高，費用高，一些機構(gòu)難以運行，則常用于血紅蛋白電泳聯(lián)合血液學(xué)特點來篩查地貧. 血紅蛋白電泳能篩查地貧的高危人群，是一個介于篩查與確診的試驗，為進(jìn)一步進(jìn)行基因診斷和遺傳咨詢提供基礎(chǔ)。有些情況還應(yīng)結(jié)合其他篩查方法才能作準(zhǔn)確診斷性報告[4]。有條件的地方應(yīng)開展基因診斷技術(shù)，以減少地貧漏檢的可能性，對遺傳性地貧疾病進(jìn)行產(chǎn)前診斷具有重要意義。

參考文獻(xiàn)：

[1]黃凌.917 例血紅蛋白電泳結(jié)果分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2009，27(3):226-227.

[2]周秀琴，童順桃，譚衛(wèi)荷，等.全自動電泳分析系統(tǒng)篩查地中海貧血的臨床應(yīng)用[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008，29(13):1594-1595.

[3]胡志恒，石玉玲，陳建蕓，等.地中海貧血篩查及基因檢查的結(jié)果分析[J].華南國防醫(yī)學(xué)雜志2010，24(1):63-64.

[4]陳方平，覃西.血液檢驗學(xué)[M].第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:130.

編輯/肖慧