慢性應(yīng)激抑郁癥大鼠學(xué)習(xí)記憶研究

摘要：目的 建立慢性抑郁癥SD大鼠模型，觀察抑郁癥模型大鼠不同時(shí)間段學(xué)習(xí)記憶功能。方法 隨機(jī)分為慢性抑郁癥模型組，正常對(duì)照組，慢性抑郁癥模型組分21d，42d，60 d亞組。觀察大鼠行為學(xué)改變，采用避暗試驗(yàn)方法記錄各組大鼠實(shí)驗(yàn)潛伏期（LT）及來(lái)回穿梭次數(shù)（EN）。結(jié)果 空白組避暗試驗(yàn)結(jié)果LT為（56.00±2.71）s、EN為（3.29±1.14）次，抑郁癥模型組：模型成功后21d（即模型當(dāng)天至成功第21d）避暗試驗(yàn)結(jié)果的LT為(47.81±3.31)s、EN為（2.76±0.92）次；慢性抑郁癥模型組42d避暗試驗(yàn)結(jié)果為L(zhǎng)T（38.51±1.28）s、EN為（5.15±1.21）次；慢性抑郁癥模型組60d避暗試驗(yàn)結(jié)果(46.73±2.61)s、EN為（2.35±1.01）次，慢性應(yīng)激性抑郁癥大鼠模型組與對(duì)照組比學(xué)習(xí)記憶能力明顯下降（P＜0.05）。結(jié)論 慢性抑郁癥模型大鼠在不同時(shí)間段學(xué)習(xí)記憶功能不同，證明慢性抑郁癥模型大鼠學(xué)習(xí)記憶等認(rèn)知功能受損。

關(guān)鍵詞：慢性應(yīng)激抑郁癥；學(xué)習(xí)記憶慢性應(yīng)激性抑郁癥（Chronic Stress Depression）會(huì)使人們的思維出現(xiàn)紊亂，因?yàn)樗饦O端的悲觀態(tài)度，而且這種悲觀態(tài)度往往會(huì)持續(xù)很長(zhǎng)時(shí)間，導(dǎo)致人們身心俱疲，什么都不想做[1]。由于社會(huì)壓力的增大，抑郁癥人群數(shù)量增多，給社會(huì)及家庭帶來(lái)極大的影響，慢性抑郁癥患臨床上可表現(xiàn)為學(xué)習(xí)能力、時(shí)間記憶力、空間想象力和邏輯思維能力等認(rèn)知功能的下降[2-3]。慢性應(yīng)激抑郁癥患者在各個(gè)不同方面表現(xiàn)認(rèn)知功能特別是學(xué)習(xí)記憶方面的功能障礙，經(jīng)典動(dòng)物模型可以模擬人體機(jī)能方面的變化反映。本研究在與建立慢性抑郁癥大鼠模型，檢測(cè)大鼠各個(gè)時(shí)間段學(xué)習(xí)記憶功能，為臨床治療方向提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1慢性應(yīng)激抑郁癥大鼠模型的制作6～8w齡健康成年Sprague-Dawley(SD)大鼠96只，體重（275±15）g均購(gòu)自河南科技大學(xué)第二附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)大鼠均采用單籠飼養(yǎng)。避免強(qiáng)烈的外界刺激，如強(qiáng)光以及高聲貝噪音刺激，24h晝夜一次循環(huán)。實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境7d后對(duì)所有大鼠進(jìn)行篩選，篩選通過(guò)條件大鼠要進(jìn)行嚴(yán)格管理，培養(yǎng)統(tǒng)一的生活習(xí)性，按照體重比例控制進(jìn)食量。大鼠按體重由小到大順序排列，編為1～120號(hào)，利用國(guó)際通用隨機(jī)數(shù)字表取得隨機(jī)數(shù)，隨后再將表中所得出隨機(jī)數(shù)從小到大順序依次嚴(yán)格安排編序號(hào)（按先后順序排列數(shù)字相同，從大到小或從小到大），模型組及空白對(duì)照組，n=72只?？瞻讓?duì)照組，在每次刺激實(shí)驗(yàn)組的大鼠時(shí)以相同的方法刺激抓取1～2次即可，以排除認(rèn)為刺激對(duì)大鼠的影響。

1.2慢性應(yīng)急抑郁癥大鼠模型的建立具體應(yīng)激為：禁食48h，冰水游泳(4℃、5min)，禁飲24h，熱水游泳(45℃、10min)，直流電擊足底(電流0.5mA、電壓60V，每隔30s刺激1次，刺激5s/次，共30min)，夾尾lmin，搖晃( l次/s、持續(xù)15min)，行為限制2h，鼠籠傾斜45° 24h、潮濕墊料10h、空瓶放置1h。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每種刺激至少給予2次，每天隨機(jī)給予1種刺激，每次應(yīng)激實(shí)驗(yàn)均在遠(yuǎn)離飼養(yǎng)間的另一實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。另大鼠購(gòu)置后培養(yǎng)適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境過(guò)程期間，逐步引導(dǎo)訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)含有蔗糖飲用水，在實(shí)驗(yàn)大鼠籠兩端分別放置2個(gè)飲水瓶，第1d，兩瓶?jī)?nèi)均含濃度為1％蔗糖水，而在實(shí)驗(yàn)的隨后的一段時(shí)間每籠實(shí)驗(yàn)大鼠一瓶1％蔗糖水，另外一瓶為純凈水。在應(yīng)激實(shí)驗(yàn)前1d，在應(yīng)激實(shí)驗(yàn)開(kāi)始進(jìn)行后的第22d和灌胃實(shí)驗(yàn)結(jié)束后第2d進(jìn)行動(dòng)物的基礎(chǔ)糖水、純水消耗性實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)密計(jì)算實(shí)驗(yàn)每只大鼠的總的液體消耗量、糖水消耗量、純水消耗量，最后可以計(jì)算大鼠的糖水偏愛(ài)(糖水偏愛(ài)=糖水消耗／總液體消耗×100％)。液體消耗實(shí)驗(yàn)：正常大鼠沒(méi)有快感缺失，喜飲糖水，慢性應(yīng)激抑郁癥大鼠的癥狀快感缺失，而對(duì)于糖水喜好程度明顯降低，而喜飲用糖水比例也較正常大鼠明顯降低，從而判斷大鼠慢性應(yīng)激抑郁癥模型建立成功。

1.3學(xué)習(xí)記憶實(shí)驗(yàn)（避暗試驗(yàn)）采用避暗試驗(yàn)箱進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，軟件分析系統(tǒng)進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶實(shí)驗(yàn)成績(jī)能力測(cè)試進(jìn)行綜合分析[4]。由于大鼠都有喜暗的生活習(xí)性及動(dòng)物本能，試驗(yàn)時(shí)將每只大鼠背部對(duì)著試驗(yàn)箱的暗室的洞口放入試驗(yàn)箱的明室內(nèi)，同時(shí)開(kāi)機(jī)系統(tǒng)開(kāi)始計(jì)時(shí)，進(jìn)行學(xué)習(xí)實(shí)驗(yàn)，由于動(dòng)物本能反應(yīng)，大鼠可很快自由進(jìn)入暗室內(nèi)，從放置時(shí)間到進(jìn)入暗室的時(shí)間，并記錄，于此同時(shí)接通暗室底部銅線電源，采用直流電進(jìn)行電擊實(shí)驗(yàn)，受到電刺激后大鼠會(huì)逃出暗室，研究大鼠記憶功能，記錄大鼠從明室第1次進(jìn)入暗室的時(shí)間即為本次實(shí)驗(yàn)大鼠LT，大鼠受直流電擊后逃避性地跑出實(shí)驗(yàn)暗室，一般情況下以10min內(nèi)大鼠進(jìn)出明暗室的次數(shù)即為本次實(shí)驗(yàn)的穿梭次數(shù)EN，在此過(guò)程中，記錄大鼠在明室內(nèi)和暗室內(nèi)的運(yùn)動(dòng)詳細(xì)軌跡，通過(guò)系統(tǒng)軟件統(tǒng)計(jì)其活動(dòng)時(shí)間和活動(dòng)路線距離總和，結(jié)果共同作為記憶成績(jī)表現(xiàn)為L(zhǎng)T和EN。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理及分析收集計(jì)數(shù)資料及計(jì)量資料均采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析避暗試驗(yàn)所得LT及EN，所得數(shù)據(jù)以（x±s）表示，數(shù)據(jù)采用單因素因素方差分析，組間比較用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

慢性應(yīng)激抑郁癥大鼠制作成功后后大鼠有抑郁癥表現(xiàn)，檢測(cè)大鼠腦電波可收集典型的腦電波活動(dòng)模型。模型制作點(diǎn)燃成功率為92.4%。空白組避暗試驗(yàn)結(jié)果LT為（56.00±2.71）s、EN為（3.29±1.14）次，抑郁癥模型組：模型成功后21d（即模型當(dāng)天至成功第21d）避暗試驗(yàn)結(jié)果的LT為(47.81±3.31)s、EN為（2.76±0.92）次；慢性抑郁癥模型組42d避暗試驗(yàn)結(jié)果為L(zhǎng)T（38.51±1.28）s、EN為（5.15±1.21）次；慢性抑郁癥模型組60d避暗試驗(yàn)結(jié)果(46.73±2.61)s、EN為（2.35±1.01）次，慢性應(yīng)激性抑郁癥大鼠模型組與對(duì)照組比學(xué)習(xí)記憶能力明顯下降（P＜0.05）。見(jiàn)表1、圖1。

圖1避暗實(shí)驗(yàn)潛伏期趨勢(shì)圖

3討論

腦功能障礙特別是認(rèn)知功能障礙是目前神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者治愈康復(fù)回歸社會(huì)生活的主要阻礙因素之一[5]，尤為重要，目前國(guó)內(nèi)外多方研究已經(jīng)得到證實(shí)，即使通過(guò)多種手段臨床治療預(yù)后良好或無(wú)明顯神經(jīng)功能障礙如運(yùn)動(dòng)語(yǔ)言等的慢性應(yīng)激性抑郁癥患者，基本大部分會(huì)存在不同程度的認(rèn)知功能損害主要表現(xiàn)為文字或非文字學(xué)習(xí)記憶功能，不同程度認(rèn)知管理能力及其他認(rèn)知如思維、學(xué)習(xí)等區(qū)域功能不同程度缺失[6]。

選擇適當(dāng)?shù)哪Ｐ褪怯行а芯恳钟舭Y發(fā)病機(jī)制及治療的捷徑。目前已有多種抑郁癥模型，但尚無(wú)一種動(dòng)物模型能完全模擬人類抑郁癥的所有臨床、病理、生理學(xué)特征[7]。慢性應(yīng)激性抑郁模型，具有慢性、自發(fā)性、可復(fù)發(fā)性的特點(diǎn)，是一種目前極佳的抑郁癥模型。能基本反映人能抑郁癥基本特征。

慢性應(yīng)激性抑郁癥\"（Chronic Stress Depression）會(huì)使人們的思維出現(xiàn)紊亂，因?yàn)樗饦O端的悲觀態(tài)度，而且這種悲觀態(tài)度往往會(huì)持續(xù)很長(zhǎng)時(shí)間，導(dǎo)致人們身心俱疲，什么都不想做[8]。由于社會(huì)壓力的增大，抑郁癥人群數(shù)量增多，給社會(huì)及家庭帶來(lái)極大的影響，慢性抑郁癥患臨床上可表現(xiàn)為學(xué)習(xí)能力、時(shí)間記憶力、空間想象力和邏輯思維能力等認(rèn)知功能的下降[9]。

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，慢性應(yīng)激抑郁癥大鼠制作成功后后大鼠有抑郁癥表現(xiàn)，檢測(cè)大鼠腦電波可收集典型的腦電波活動(dòng)模型。模型制作點(diǎn)燃成功率為92.4%。慢性應(yīng)激性抑郁癥大鼠模型組與對(duì)照組比學(xué)習(xí)記憶能力明顯下降（P＜0.05）。；認(rèn)知功能損害為主要表現(xiàn)，隨著抑郁癥的時(shí)間延長(zhǎng)，抑郁癥引起腦功能損害越明顯，特別是認(rèn)知功能損害更加明顯，且有關(guān)數(shù)據(jù)表明，部分認(rèn)知功能損害是由于顱內(nèi)壓力增大，導(dǎo)致腦功能異常引起，屬于可逆性損害，隨著時(shí)間遷延，導(dǎo)致部分認(rèn)知功能損害為不可逆性損害，為永久性腦功能損害，表現(xiàn)在認(rèn)知功能這一塊為更加明顯突出。對(duì)于抑郁癥認(rèn)知功能損害研究，主要表現(xiàn)為癡呆，而癡呆表現(xiàn)歸為皮質(zhì)下性，包括意識(shí)執(zhí)行思維困難、思維能力明顯緩慢、注意力高度不集中、情感淡漠或漠視外界事物、精神運(yùn)動(dòng)速度不積極或精神行為能力的不自主性等[8]。關(guān)于抑郁癥有研究進(jìn)一步表明存在明顯額葉部分主要功能執(zhí)行功能減弱和注意力、行為力、精神思維能力的缺損，這也是是認(rèn)知功能及學(xué)習(xí)記憶損害中最突出的表現(xiàn)。

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