RP-HPLC法測定復(fù)方醋酸潑尼松龍滴鼻液中醋酸潑尼松龍的含量

摘要：目的 建立高效液相色譜法測定復(fù)方醋酸潑尼松龍滴鼻液中醋酸潑尼松龍的含量的方法。方法 采用Phenomenex Gemini C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱，以乙腈-水（35：65）為流動相，流速為1.0mL·min-1，檢測波長為246nm。結(jié)果 醋酸潑尼松龍在在0.009642~0.2411mg·ml-1范圍內(nèi)濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系（r2=1），平均回收率為101.01%，RSD為0.7%（n=9）。結(jié)論 本方法簡便、快速、結(jié)果準確性、重現(xiàn)性好。

關(guān)鍵詞：含量測定；復(fù)方醋酸潑尼松龍滴鼻液；RP-HPLC

Determination of Prednisolone Acetate in the Co-prednisolone Acetate Nose Drops by RP-HPLC

LE Li-yuan

(Shaoyang Institute for Food And Drug Control， Shaoyang 422001，Hunan，China)

Abstract：Objective To establisha method for determination content of prednisolone acetate in the co-prednisolone acetate nose drops by RP-HPLC.MethodsPhenominix Gemini C18 （250mm×4.6mm，5μm）column was used and acetonitrile -water（35：65）was used as mobile phase， the flow rate was 1.0mLomin-1，the detecting wave-length was at 246nm.ResultsThere was a good linear relationship between the concentration of prednisolone acetate and peak area within a range of 0.009642~0.2411mg·ml-1（r2=1）.The average recover was 101.01%，with RSD=0.7%（n=9）.ConclusionThemethod is highly repeatable and accurate.

Key words：Determination of content;Prednisolone acetate nose drops; RP-HPLC復(fù)方醋酸潑尼松龍滴鼻液為湘鄉(xiāng)市人民醫(yī)院常用醫(yī)院制劑，為腎上腺皮質(zhì)激素類外用藥物，具有抗炎、抗過敏和抑制免疫等多種藥理作用，外用于治療過敏性、非感染性皮膚病和一些增生性皮膚疾患，如皮炎、濕疹、神經(jīng)性皮炎、脂溢性皮炎及瘙癢癥等。該制劑臨床主要用于鼻的過敏與自身免疫性炎癥疾病。原醫(yī)院制劑檢驗標準中醋酸潑尼松龍采用提取后再用紫外-可見分光光度法測定，操作繁瑣且誤差較大。為減少測量誤差，方便實驗操作，本文按國家藥品標準工作手冊[1]建立了RP-HPLC法測定醋酸潑尼松龍含量，操作簡單靈敏，結(jié)果準確，重現(xiàn)性好。

1儀器與試藥

1.1儀器Waters2695系列液相色譜儀，安捷倫1260系列液相色譜儀；色譜柱：Phenomenex Gemini C18（250mm×4.6mm，5μm）。

1.2試劑與試藥醋酸潑尼松龍對照品由中國食品藥品檢定研究院提供（醋酸潑尼松龍，批號：100124-200303，含量99.2%），復(fù)方醋酸潑尼松龍滴鼻液由湘鄉(xiāng)市人民醫(yī)院制劑室提供，甲醇、乙腈、三乙胺、磷酸均為色譜純，磷酸二氫鉀為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：Phenomenex Gemini C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-水（35：65）；進樣量：10μl；檢測波長：246 nm；柱溫：35℃[2]。

2.2對照品溶液的制備取醋酸潑尼松龍對照品0.01217g，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，再精密量取10ml，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得。

2.3供試品溶液的制備取本品10瓶，搖勻，精密量取供試品5ml，置200ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，取續(xù)濾液即得。

2.4線性關(guān)系試驗精密稱取醋酸潑尼松龍對照品24.30mg，置50ml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml、5ml、5ml、5ml、5ml，分別置100ml、100ml、50ml、25ml、10ml量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液各10μl，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度（C）為橫座標，峰面積（A）為縱座標，繪制標準曲線。得回歸方程：Y=4.4475×10-8X+2.4714×10-4，r2=1，試驗結(jié)果表明，醋酸潑尼松龍濃度在0.009642~0.2411mg/ml范圍內(nèi)，峰面積與濃度線性關(guān)系良好。

2.5專屬性試驗取對照品溶液、供試品溶液，以及醋酸潑尼松龍含量測定用陰性樣品，按供試品溶液配制方法制成陰性樣品溶液。精密量取上述溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

試驗結(jié)果表明：對照品溶液、供試品溶液色譜行為良好，理論板數(shù)按醋酸潑尼松龍峰計算為16952，陰性樣品無干擾，見圖1、圖2、圖3。

圖1對照品溶液色譜圖

圖2供試品溶液色譜圖

圖3陰性樣品溶液色譜圖

2.6加樣回收率試驗精密稱取醋酸潑尼松龍12.10mg，置50ml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成對照品溶液（濃度為：0.2401mg/ml）。精密量取自制陽性樣品2ml（含量：1.601mg/ml），共9份，分別置25ml量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，精密量取5ml~25ml量瓶中，分別精密量取對照品溶液2ml、3ml、5ml各三份，分別加至上述供試品溶液中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為回收率試驗供試品溶液；取溶液配制項下的對照品溶液，精密量取上述溶液各10μl，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算回收率，試驗結(jié)果表明，該平均回收率良好達101.01%，RSD為0.7%。

2.7精密度試驗取對照品溶液，按上述色譜條件，精密量取10μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進樣5次，記錄色譜圖，結(jié)果RSD為0.1%，結(jié)果表明該方法進樣精密度良好。

2.8重復(fù)性試驗取本品10瓶，搖勻，精密量取供試品5ml，置200ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液，配制5份；取溶液配制項下的對照品溶液，按上述色譜條件，分別精密量取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以醋酸潑尼松龍峰面積計算含量，即得，結(jié)果RSD為0.3%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.9穩(wěn)定性試驗取供試品溶液，間隔1h進樣1次，連續(xù)進樣24h，記錄峰面積，RSD曾0.6%，表明穩(wěn)定性良好。

2.10耐用性試驗取本品，更換液相色譜儀和色譜柱，依法測定，結(jié)果兩次峰面積僅相差0.2%，結(jié)果表明該方法耐用性良好。

2.11定量限精密量取線性項下的第1份溶液1ml，置200 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取該溶液10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖 。結(jié)果表明醋酸潑尼松龍的定量限為4.821×10-4ng（SN=10）。

3樣品測定

取兩批次樣品，按上述方法與色譜條件測定，按外標法計算樣品中醋酸潑尼松龍的含量。2個批號（130611，13.613）的含量測定結(jié)果分別為102.48%，98.3%。

4討論

4.1現(xiàn)有醫(yī)院制劑檢驗方法醫(yī)院2005年批準的，且含量測定方法參照的是《中國藥典2005年版二部》中采用顯色再用紫外-可見分光光度法測定醋酸潑尼松龍的含量，操作繁瑣且易產(chǎn)生誤差，本文建立的方法簡單易行，用時短，所需試劑少，靈敏度高，結(jié)果準確。

4.2本制劑中醋酸潑尼松龍為非極性物質(zhì)，而且在非極性溶劑中易降解，故制成水溶性基質(zhì)的的混懸劑的形式用于臨床，制劑過程中切不可加入乙醇、乙酸乙酯等有機溶劑進行助溶，以避免醋酸潑尼松龍快速降解。

4.3混懸劑本身為非均相溶液，醋酸潑尼松龍在混懸劑中常沉降至瓶底，造成取樣與使用時混懸液上部液體中醋酸潑尼松龍濃度遠高于下部，給本次試驗帶來極大不便，后采取超聲振搖后再混勻取樣的方法才取得良好的檢驗結(jié)果。

4.4本制劑處方中混懸劑為羧甲基纖維素鈉，造成制劑粘稠度特別大，給取樣帶來了極大的困難，經(jīng)過多次嘗試后均不能取得良好平行結(jié)果，后采用移液槍前進移液法[3]，才最終解決高粘稠液體取樣，最終結(jié)果平行完好一致。

4.5本方法色譜條件基本采用中華人民共和國藥典2010版中醋酸潑尼松龍含量測定項下的色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，但在實際試驗中考察原料藥時發(fā)現(xiàn)，原料藥中基本不存在醋酸氫化可的松干擾，再考慮到減少基層醫(yī)院藥品檢驗工作難度，故去掉\"醋酸潑尼松龍與醋酸醋酸氫化可的松分離度應(yīng)不少于2.0\"此一項。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.國家藥品標準工作手冊[M].北京：中醫(yī)藥科技出版社，1999.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010版（二部）[M].北京：中醫(yī)藥科技出版社：2010:1125-1126，附錄194-195.

[3]高友中.研究可調(diào)移液器在理化檢驗中的應(yīng)用[J].中國醫(yī)藥指南，2011，9（34）：303-304.

編輯/哈濤