前列腺炎組織中內(nèi)皮素受體壓型mRNA的表達(dá)

摘要：目的 探討III 型前列腺炎（CP/CPPS）患者前列腺組織中內(nèi)皮素受體壓型（ETA-R，ETB-R）分布。方法 運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）定量檢測(cè)36例III 型前列腺炎患者（其中22例ⅢA型患者，14例ⅢB型患者）前列腺穿刺組織和6例正常前列腺組織中ETA-R和ETB-R mRNA含量。 結(jié)果 前列腺炎癥組織中ETA-R的表達(dá)相對(duì)于正常前列腺組織呈明顯上調(diào)趨勢(shì)（P<0.001）；ETB-R的表達(dá)在炎癥組織和正常組織中的差異不存在顯著性（P=0.265）。 結(jié)論 前列腺炎組織中ETA-R表達(dá)水平上調(diào)，介導(dǎo)ET-1的生物學(xué)效應(yīng)，在前列腺平滑肌收縮中起主要作用，可能參與了前列腺炎的病理生理過(guò)程。

關(guān)鍵詞：內(nèi)皮素受體壓型；real time-PCR；前列腺炎前列腺動(dòng)力性梗阻引起的尿液前列腺返流可能是CP/CPPS 的病因之一，而動(dòng)力性梗阻過(guò)去認(rèn)為主要是與前列腺局部α-腎上腺素受體有關(guān)。α-腎上腺素受體阻滯劑并不能完全緩解前列腺平滑肌張力，提示前列腺內(nèi)還存在其他調(diào)節(jié)平滑肌張力的因素[1] 。為此我們對(duì)III型前列腺炎的前列腺穿刺標(biāo)本進(jìn)行ETA -R和ETB -R的mRNA含量的檢測(cè)，探討ET受體亞型在前列腺炎的發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料TRIzol總RNA提取液購(gòu)自Takara公司； RNA酶抑制劑、M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶、Oligo (dT) 、dNTPs 購(gòu)自Fermentas公司；SYBR Mastermix購(gòu)自Toyobo；引物由上海英俊生物技術(shù)有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本前列腺炎組織36例均來(lái)自2010年05月～11月在溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院泌尿外科門(mén)診病程長(zhǎng)癥狀較重，反復(fù)多種治療效果欠佳III型前列腺炎的患者，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)同意，為指導(dǎo)用藥經(jīng)會(huì)陰前列腺穿刺行細(xì)菌16S rRNA 基因檢測(cè)[2]時(shí)多余廢棄的前列腺組織?；颊吣挲g25～49歲，平均（28.3±3.7）歲（其中22例ⅢA型患者，14例ⅢB型患者）。標(biāo)本收集后立即置于液氮中，隨后于-80℃低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)ETA -R和ETB -R的mRNA含量的檢測(cè)。以β-actin為內(nèi)參，采用2-△△CT方法分析比較目的基因在前列腺炎組織和正常組織中的表達(dá)差異。其中△△CT=(CT目的基因-CTβ-actin)炎癥組織一(CT目的基因中位數(shù)-CTβ-actin中位數(shù))正常組織

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用 SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2結(jié)果

2.1 前列腺炎及正常前列腺組織中ETA-R mRNA及ETB -R mRNA表達(dá)

以β一actin作內(nèi)對(duì)照，與正常組織比較，慢性前列腺炎組織中ETA-R相對(duì)表達(dá)量（2-△△CT）中位數(shù)為2.515(1.420，2.980)， 為正常組織中含量的2.515倍，（P<0.001）。慢性前列腺炎組織中ETB-R相對(duì)表達(dá)量（2-△△CT）中位數(shù)為1.215(0.603，1.495)，為正常組織中含量的1.215倍，（p=0.265）。

2.2 ETA-R、ETB-R在IIIA型前列腺炎和IIIB型前列腺炎組間的表達(dá)差異分析使用兩個(gè)獨(dú)立樣本組間Mann-Whitney U檢驗(yàn)來(lái)分析ETA-R、ETB-R相對(duì)表達(dá)值在IIIA型前列腺炎和IIIB型前列腺炎組間的表達(dá)差異。發(fā)現(xiàn)ETA-R和ETB-R在IIIA組和IIIB組之間比較均無(wú)顯著性差異(P > 0. 05)。

3 討論

Ⅲ型前列腺炎(CP/CPPS)是50歲以下男性就診于泌尿外科或男科的最常見(jiàn)原因[3]，幾乎各個(gè)年齡組和種族均可發(fā)病，已成為目前診治該類(lèi)疾病的世界性難題[4]。ET是由21個(gè)氨基酸組成的多膚，具有多種生物學(xué)作用，有三種生物學(xué)活性的亞型，分別為ET-1 ，ET-2與ET-3。Walden等[5]發(fā)現(xiàn)前列腺細(xì)胞中可檢測(cè)到ET-1及ECE-1 mRNA，證實(shí)前列腺細(xì)胞能夠分泌ET-1。近幾十年來(lái)關(guān)于CP/CPPS病因及發(fā)病機(jī)制的基礎(chǔ)研究有了許多突破性的進(jìn)展。前列腺內(nèi)尿液反流是目前已經(jīng)證實(shí)并得到廣泛認(rèn)可的CP/CPPS主要病因之一。尿液返流進(jìn)入前列腺腺導(dǎo)管，被認(rèn)為是慢性細(xì)菌性和非細(xì)菌性前列腺炎癥的最重要的致病機(jī)理之一[6]。尿液返流將病原體和尿液中的代謝成分帶入前列腺內(nèi)，這種由化學(xué)性、細(xì)菌性、或免疫性刺激產(chǎn)生的炎癥可以導(dǎo)致前列腺內(nèi)壓力增高，可能導(dǎo)致慢性前列腺炎患者排尿異常和會(huì)陰下腹部疼痛不適[7]。

本研究發(fā)現(xiàn)，炎癥組的ETA-R的表達(dá)相對(duì)于正常組呈明顯上調(diào)趨勢(shì)，而炎癥組的ETB-R的表達(dá)相對(duì)于正常組差別不具顯著性。由此我們可以認(rèn)為，在前列腺炎發(fā)生發(fā)展中，ETA-R的表達(dá)上調(diào)，ET-1與前列腺間質(zhì)平滑肌細(xì)胞上的ETA-R結(jié)合，引起前列腺動(dòng)力性梗阻，從而影響前列腺炎的病理生理過(guò)程，但ETA-R的具體調(diào)控機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。進(jìn)來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，ET-1的生物學(xué)效應(yīng)可被選擇性ETA-R拮抗劑阻斷，提示我們ETA-R拮抗劑有望成為治療前列腺炎患者的新型藥物，特別是為復(fù)雜難治的III前列腺炎患者的藥物治療開(kāi)辟新的道路。

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編輯/許言