HIF-1α 的表達(dá)與胃癌根治性切除術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系

譚莉莉

河北大學(xué)附屬醫(yī)院貴賓病房，河北 保定071000

胃癌是消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一，近年來雖然手術(shù)方式、技術(shù)的提高明顯改善了胃癌患者的生活質(zhì)量和總體生存率，但總體的預(yù)后仍不理想［1-2］，5 年生存率不足50%。缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)是一種在缺氧狀態(tài)下發(fā)揮活性的核轉(zhuǎn)錄因子，與腫瘤血管的生成相關(guān)，在多種腫瘤中均過度表達(dá)［3-4］。本研究分析河北大學(xué)附屬醫(yī)院胃癌根治性切除患者胃癌組織中HIF-1α 的表達(dá)情況，探究其與胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2005 年3 月-2009 年4 月在河北大學(xué)附屬醫(yī)院接受胃癌根治性切除術(shù)治療的患者共106 例作為研究對象，其中5 年內(nèi)復(fù)發(fā)者63 例，未復(fù)發(fā)者43 例。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)患者術(shù)前未進(jìn)行放化療;(2)患者發(fā)現(xiàn)胃癌復(fù)發(fā)是指通過CT 等影像學(xué)檢查或術(shù)后病理檢查殘胃、腹腔、盆腔等處發(fā)現(xiàn)腫塊并排除第二原發(fā)癌。本研究通過醫(yī)院倫理委員會審核，患者均簽署知情同意書。

1.2 檢測方法 所有胃癌組織樣本均檢測HIF-1α、CD34、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)免疫組織化學(xué)染色，采用鏈霉素抗生物素蛋白- 過氧化物酶(streptavidin-peroxidase，SP)法染色。HIF-1α 陽性細(xì)胞:細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)中可見黃色或棕黃色顆粒。HIF-1α 陽性的判定:陽性細(xì)胞＞10%即判為HIF-1α 陽性，反之則為HIF-1α 陰性。

1.2.1 微血管密度的判定:每一個CD34 染色呈黃色且與周圍血管、腫瘤細(xì)胞或其他結(jié)締組織差別明顯的微小血管腔或含3 個以上血管內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)皮細(xì)胞簇。微血管密度的計數(shù):選擇3 個CD34 染色密集的區(qū)域計數(shù)微血管，取其均數(shù)即為微血管密度。

1.2.2 VEGF 陽性評分:VEGF 陽性的細(xì)胞即細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見棕黃色顆粒的胃癌細(xì)胞。VEGF 陽性細(xì)胞比例評分:＜5%為0 分，5% ～25%為1 分，25% ～50%為2分，＞50%為3 分;陽性細(xì)胞著色深淺評分:無著色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。以上評分之和≥3 分為VEGF 陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，HIF-1α 的陽性率與不同危險因素的單因素分析行χ2檢驗。采用Kaplan-Meier 法計算復(fù)發(fā)組的生存率，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HIF-1α 在胃癌組織中的表達(dá) HIF-1α 表達(dá)陽性的表現(xiàn):細(xì)胞核及細(xì)胞漿中可見黃色或棕黃色顆粒(見圖1)。復(fù)發(fā)組共49 例為陽性，陽性率為77.8%，對照組共20 例為陽性，陽性率為46.5%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=10.995，P ＜0.001)。

圖1 HIF-1α 在胃癌組織中的表達(dá)(200 ×)Fig 1 Expression of HIF-1α in gastric cancer tissue (200 ×)

2.2 胃癌患者行根治性切除術(shù)后復(fù)發(fā)的單因素分析63 例術(shù)后復(fù)發(fā)患者中，HIF-1α 陽性率與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹水、腫瘤血管侵襲、TNM分期、VEGF 表達(dá)有顯著相關(guān)性(P ＜0.05，見表1)。

表1 胃癌患者行根治性切除術(shù)后復(fù)發(fā)的單因素分析［例數(shù)(%)］Tab 1 The single factor analysis for the recurrence of gastric cancer patients after radical resection［n(%)］

續(xù)表1

2.3 復(fù)發(fā)組HIF-1α 表達(dá)情況與其預(yù)后的關(guān)系 復(fù)發(fā)組從手術(shù)至死亡或末次隨訪的總體生存期為(13.9±2.7)個月，1 年生存率為31.4%;其中HIF-1α 陰性的生存期(20 個月)高于HIF-1α 陽性者(10 個月)，HIF-1α 陰性的1 年生存率(51.4%)高于HIF-1α 陽性(21.6%)。

3 討論

低氧環(huán)境是腫瘤快速生長、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的普遍現(xiàn)象［5］。目前對低氧誘導(dǎo)基因的發(fā)現(xiàn)及研究越來越多，HIF-1 是低氧條件下人體內(nèi)產(chǎn)生的一種轉(zhuǎn)錄因子，對缺氧狀態(tài)下基因的選擇表達(dá)起關(guān)鍵作用［6］。HIF-1 為由α 亞基和β 亞基組成的異源二聚體，其中α 亞基為氧調(diào)節(jié)亞單位，控制著HIF-1 的活性，目前研究［7］認(rèn)為其靶基因主要與腫瘤血管生成、腫瘤轉(zhuǎn)移和腫瘤細(xì)胞的能量代謝有關(guān)，VEGF 即為其靶基因之一。VEGF 能以自分泌和旁分泌的方式促使腫瘤細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，能誘導(dǎo)血管新生，加速許多腫瘤的局部生長和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移［8］，因此，HIF-1α 及VEGF 與腫瘤的關(guān)系的研究也越來越受到重視。

胃癌是我國常見的惡性腫瘤之一，由于大部分胃癌患者在就診時就已處于進(jìn)展期［9-10］，因此即使接受了根治性切除手術(shù)，術(shù)后復(fù)發(fā)率依然居高不下，5 年生存率更是不足50%。因此，分析影響胃癌根治性切除術(shù)后復(fù)發(fā)的不良因素對預(yù)測和控制胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)均有重要的臨床價值。有研究［11-12］發(fā)現(xiàn)HIF-1α 在乳腺癌、惡性神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤等多種腫瘤中有促進(jìn)腫瘤血管生成，化療抵抗等作用。HIF-1α 在胃癌組織中的表達(dá)及其表達(dá)的臨床意義目前研究并不多。Mijatovic等［13］通過檢測55 例胃癌患者和30 名正常人胃組織中HIF-1α 的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)正常胃組織中HIF-1α 表達(dá)均為陰性，HIF-1α 是胃癌發(fā)病的影響因素之一。Jandova等［14］檢測了78 例胃癌組織中HIF-1α 的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)HIF-1α 的高表達(dá)與胃癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。目前對HIF-1α 對胃癌患者預(yù)后的研究較少，本研究結(jié)果顯示:HIF-1α 表達(dá)陽性患者的5 年生存率和總體生存期均低于HIF-1α 表達(dá)陰性患者，提示我們臨床上對HIF-1α 表達(dá)陽性的患者需提高警惕、積極治療。

本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶法檢測胃癌組織中HIF-1α 的表達(dá)，結(jié)果顯示:HIF-1α 在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)可見于細(xì)胞核和細(xì)胞漿中，復(fù)發(fā)組的HIF-1α 陽性率顯著高于對照組(χ2=10.995，P ＜0.001)，提示HIF-1α 與胃癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)密切相關(guān)。在不同臨床病理特征的組別中，HIF-1α陽性率也各不相同，本研究顯示:HIF-1α 陽性率與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹水、腫瘤血管侵襲、TNM 分期、VEGF 表達(dá)有顯著相關(guān)性(P ＜0.05)。因此，本研究認(rèn)為:HIF-1α 陽性表達(dá)是胃癌預(yù)后不良的高危因素之一，浸潤深度較深、分化程度高、VEGF 表達(dá)陽性、血管侵襲、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等可作為預(yù)測胃癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)和預(yù)后情況。本研究提示:HIF-1α的陽性表達(dá)與VEGF 的陽性表達(dá)有相關(guān)性(χ2=7.200，P =0. 007)，提示HIF-1α 主要與血管生成有關(guān)。因此為以后的研究提供一個思路，即可以用微血管密度來判定胃癌的預(yù)后。

綜上所述，HIF-1α 的表達(dá)對胃癌血管的生成有重要的作用，與胃癌根治性切除術(shù)后復(fù)發(fā)密切相關(guān)，可以將其表達(dá)作為判斷胃癌復(fù)發(fā)和預(yù)測術(shù)后生存狀況的指標(biāo)之一。對原發(fā)胃癌組織浸潤深度達(dá)漿膜外者建議術(shù)中、術(shù)后檢測HIF-1α、VEGF 的表達(dá)和微血管密度，對早期發(fā)現(xiàn)胃癌復(fù)發(fā)有重要意義。

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