Gli1 及Foxm1 水平對(duì)胃癌轉(zhuǎn)移狀況及治療預(yù)后的影響

鄭建濤，張 琳，李良慶

福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸外科，福建 福州350005

癌癥往往代表著死亡的臨近，作為發(fā)病率最高的胃癌［1］，臨床對(duì)其早期檢測(cè)手段相對(duì)欠缺，一般癌癥發(fā)現(xiàn)初期病情已進(jìn)展至晚期而錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)機(jī)［2］。為探究胃癌的疾病發(fā)展、預(yù)后及早期檢測(cè)指標(biāo)，我們?cè)诓坏⒄`患者正常治療及患者知情同意的前提下開(kāi)展了探究胃癌患者癌變胃組織的Gli1 及Foxm1 蛋白的表達(dá)對(duì)患者癌組織病理類型、轉(zhuǎn)移情況及預(yù)后的影響研究，現(xiàn)將成果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取在福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院治療的胃癌患者98 例進(jìn)行前瞻性研究。男62 例，女36 例，平均年齡(56.2 ±12.8)歲，平均體質(zhì)量(61.7 ±14.6)kg。其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者74 例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者24 例;臨床分期處于Ⅰ、Ⅱ期的患者59 例，處于Ⅲ、Ⅳ期的患者39 例;臨床分型處于低分化狀態(tài)的患者71 例，處于高分化狀態(tài)的患者27 例。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合臨床胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)一般情況較好，可耐受相關(guān)治療及檢查;(3)預(yù)期生存期在3 個(gè)月以上;(4)年齡20 ～70歲;(5)未合并肝病及凝血功能異常［3］;(6)未進(jìn)行化療等治療;(7)重要臟器功能尚可，無(wú)功能不全;(8)能保持通暢的聯(lián)系以便隨訪;(9)自愿參與本次研究。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)入院前已接受相關(guān)治療;(2)患有高血壓、糖尿病等需長(zhǎng)期服藥者;(3)病情突然加重或合并精神類疾病，出現(xiàn)躁狂或抑郁等不適合參與本次研究者;(4)處于妊娠或哺乳階段;(5)預(yù)期生存期過(guò)短，無(wú)法完成本次研究所需要檢測(cè)的項(xiàng)目?jī)?nèi)容;(6)合并嚴(yán)重的賁門失弛緩賁門痙攣，影響研究的標(biāo)本采集;(7)合并嚴(yán)重胃部疾患如胃潰瘍甚至出血等不適合進(jìn)行本次研究者。

1.3 取材 在患者入院確診之初依據(jù)患者的狀況在普通胃鏡或無(wú)痛胃鏡下對(duì)癌變部位及健康部位取材行活組織病理檢測(cè)，并將標(biāo)本進(jìn)行妥善處置:用于Gli1及Foxm1 檢驗(yàn)的標(biāo)本進(jìn)行甲醛處理并石蠟包埋;用于Gli1-mRNA 及Foxm1-mRNA 檢測(cè)的標(biāo)本于采集后第一時(shí)間進(jìn)行液氮冰凍處理。采樣完畢后依據(jù)患者病情需要與意愿進(jìn)行相應(yīng)的治療。

1.4 檢測(cè)方法 Gli1 及Foxm1 蛋白定性檢測(cè):利用兔抗人Gli1 及Foxm1 單克隆抗體進(jìn)行免疫組化SP 法檢驗(yàn)，于高倍鏡(400 ×)下分選10 個(gè)視野，共選擇1 000 個(gè)目標(biāo)細(xì)胞，觀察細(xì)胞顏色及所占總數(shù)的百分比，定義出現(xiàn)棕黃染色細(xì)胞數(shù)量占總數(shù)50%以上為陽(yáng)性，否則為陰性。Gli1-mRNA 及Foxm1-mRNA 定量檢測(cè):選取新鮮組織75 mg 并提取RNA，并按照RT-PCR 說(shuō)明進(jìn)行處理，并對(duì)最終產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳，其中Gli1-mRNA 與β-actin 作對(duì)照，F(xiàn)OXM1-mRNA 與GAPDH 作對(duì)照，分析兩組的灰度值?；颊咔闆r:通過(guò)病理檢測(cè)確定患者癌癥的病理分化類型、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;統(tǒng)計(jì)患者治療8 個(gè)月后隨訪的生存率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 12.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌變組織及健康胃組織中Gli1 及Foxm1 陽(yáng)性表達(dá) 胃癌變組織中的Gli1 及Foxm1 蛋白高表達(dá)例數(shù)明顯高于健康胃組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05，見(jiàn)表1、圖1 ～4)。

表1 胃癌變組織及健康胃組織的Gli1 及Foxm1 表達(dá)情況［例數(shù)(%)］Tab 1 Comparison of Gli1 and Foxm1 expression between the gastric cancer tissue and healthy stomach tissue［n(%)］

圖1 Gli1 在胃癌變組織中的表達(dá)(SP 400 ×);圖2 Foxm1 在胃癌變組織中的表達(dá)(SP 400 ×);圖3 Gli1 在健康胃組織中的表達(dá)(SP 400 ×);圖4 Foxm1 在健康胃組織中的表達(dá)(SP 400 ×)Fig 1 The expression of Gli1 in the gastric tissue (SP 400 ×);Fig 2 The expression of Foxm1 in the gastric tissue (SP 400 ×);Fig 3 The expression of Gli1 in the healthy stomach tissue (SP 400 ×);Fig 4 The expression of Foxm1 in the healthy stomach tissue (SP 400 ×)

2.2 Gli1 及Foxm1 蛋白高表達(dá)患者與低表達(dá)患者的一般情況、腫瘤分化程度、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及治療預(yù)后情況 Gli1 蛋白高表達(dá)患者的低分化例數(shù)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移例數(shù)及預(yù)后不良例數(shù)均較高(P ＜0.05);Foxm1蛋白高表達(dá)患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移例數(shù)及預(yù)后不良例數(shù)較高(P ＜0.05，見(jiàn)表2 ～3)。

2.3 Gli1-mRNA 及Foxm1-mRNA 的表達(dá)與臨床資料的關(guān)系 低分化、伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良的患者Gli1-mRNA 表達(dá)較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);Foxm1-mRNA 表達(dá)伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良的患者Foxm1-mRNA 表達(dá)較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，見(jiàn)表4)。

表2 Gli1 蛋白高表達(dá)患者與低表達(dá)患者的一般情況、腫瘤分化程度、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及治療預(yù)后情況比較Tab 2 Comparison of general，tumor differentiation，tumor stage，lymph node metastasis and prognosis between the Gli1 high expression patients and low expression patients

表3 Foxm1 蛋白高表達(dá)患者與低表達(dá)患者的一般情況、腫瘤分化程度、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及治療預(yù)后情況比較Tab 3 Comparison of general，tumor differentiation，tumor stage，lymph node metastasis and prognosis between the Foxm1 high expression patients and low expression patients

表4 Gli1-mRNA、Foxm1-mRNA 的表達(dá)與臨床資料的關(guān)系(x±s)Tab 4 Relationship between Gli1-mRNA，F(xiàn)oxm1-mRNA expression and clinical datas (x±s)

續(xù)表4

3 討論

胃癌作為一種發(fā)病率最高且呈逐年升高的癌癥，如不能進(jìn)行早期發(fā)現(xiàn)早期治療往往會(huì)對(duì)患者造成極大的痛苦和損失［4］。人的生存離不開(kāi)一日三餐，而食物進(jìn)入人體后轉(zhuǎn)換成人體所需的能量及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)又需要消化系統(tǒng)的良好運(yùn)作［5］。胃是人重要的消化器官，攝入的食物在經(jīng)過(guò)口腔牙齒的初步咀嚼后進(jìn)入胃部進(jìn)行進(jìn)一步的消化，在這里食物經(jīng)過(guò)胃壁的物理擠壓研磨及胃酸和消化酶的化學(xué)性消化后變成顆粒細(xì)小的糜狀，為小腸的消化吸收做好充足的準(zhǔn)備［6］。胃處于一個(gè)物理?yè)p傷因素較多且高酸的環(huán)境中，長(zhǎng)期的各種食物刺激及損傷的反復(fù)修復(fù)，使得胃部極易發(fā)生異型性變化［7］。長(zhǎng)期大量進(jìn)食熏烤、腌制及保存不善的食物使胃長(zhǎng)期處于亞硝酸鹽、苯衍生物、黃曲霉素及各種致病菌的環(huán)境下;幽門螺桿菌的感染也會(huì)造成遷延不愈的胃潰瘍，并且幽門螺桿菌的代謝產(chǎn)物也會(huì)對(duì)胃壁細(xì)胞的正常分裂增殖產(chǎn)生影響;胃組織的異型性增生會(huì)造成胃化生等變化;胃組織長(zhǎng)期處于上述環(huán)境中極易發(fā)生癌變［8］。

有研究表明，Gli1 及Foxm1 蛋白為機(jī)體細(xì)胞分裂相關(guān)蛋白，其可參與人體細(xì)胞的正常有絲分裂周期的調(diào)節(jié);去除這兩種蛋白后的大鼠在出生后不久便因?yàn)樾募〖?xì)胞及肝細(xì)胞的多倍體增殖而死亡。但Gli1 和Foxm1 的高表達(dá)也會(huì)造成機(jī)體細(xì)胞分裂失去調(diào)控而誘發(fā)癌變［9］。據(jù)報(bào)道，Gli1 和Foxm1 蛋白的高表達(dá)可能還與癌癥患者癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、局部浸潤(rùn)及術(shù)后復(fù)發(fā)存在一定的關(guān)聯(lián)［10］。

本研究表明，胃癌患者的癌變胃組織中Gli1 和Foxm1 蛋白的表達(dá)水平明顯高于健康胃組織(P ＜0.05)，且通過(guò)研究試驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)Gli1 蛋白水平較高患者的低分化例數(shù)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移例數(shù)及預(yù)后不良例數(shù)均較高(P ＜0.05);Foxm1 蛋白含量較高患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移例數(shù)及預(yù)后不良例數(shù)較高(P ＜0.05)。Gli1 和Foxm1 蛋白的高表達(dá)可能參與胃組織細(xì)胞的異型增生，并在癌細(xì)胞對(duì)局部的浸潤(rùn)、淋巴轉(zhuǎn)移方面起促進(jìn)作用;治療后患者的健康組織可能在高濃度的Gli1 和Foxm1 蛋白調(diào)控下再次發(fā)生異常增殖。Gli1 和Foxm1蛋白的高表達(dá)與癌癥相關(guān)性仍需進(jìn)一步的研究論證。

綜上所述，胃癌組織病理活檢Gli1 及Foxm1 蛋白的表達(dá)與癌組織病理類型、轉(zhuǎn)移情況及預(yù)后存在明顯關(guān)聯(lián)性，建議臨床可將這兩項(xiàng)指標(biāo)作為癌前篩查指標(biāo)。

［1］ Zhang YL，Xue YW，Lan XW，et al. Significance of tumor markers CA19-9 and CEA for predicting metastasis and prognosis of gastric cancer［J］. Journal of Harbin Medical University，2010，44(2):181-184，188.張永樂(lè)，薛英威，藍(lán)秀文，等. 腫瘤標(biāo)記物CA19-9、CEA 對(duì)胃癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值的分析［J］. 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，44(2):181-184，188.

［2］ Huang BJ，Zhao YJ，Zhang YK，et al. Expression of Matrilysin in gastric cancer and its significance:an indicator for determining invasion，metastasis，and prognosis［J］. Chin J Bases Clin General Surg，2011，18(10):1063-1068.黃寶俊，趙雨杰，張玉魁，等. Matrilysin 在胃癌中表達(dá)及臨床意義—判斷侵襲、轉(zhuǎn)移、預(yù)后的指標(biāo)［J］. 中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志，2011，18(10):1063-1068.

［3］ Ma JP，Chen JH，Cai SR，et al. Comparison of clinicopathological characteristics and prognosis of mucinous and poorly differentiated gastric cancer［J］. Chin J Gastrointest Surg，2010，13(12):903-906.馬晉平，陳劍輝，蔡世榮，等. 黏液型與低分化型胃癌臨床病理特點(diǎn)及預(yù)后的比較［J］. 中華胃腸外科雜志，2010，13(12):903-906.

［4］ Shao YT，Han QL，Chen Y，et al. Analysis of clinical features of 80 elderly patients with metastatic malignant ［J］. Chin J Gastroenterol Hepatol，2012，21(12):1127-1131.邵穎錟，韓全利，陳英，等. 80 例老年患者轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤的臨床特征分析［J］. 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2012，21(12):1127-1131.

［5］ Zhagn LY，Li B，Xie Z，et al. Relationship between expression of Annexin A1 and prognosis in gastric cancer［J］. Journal of Sun Yat-sen University (Medical Sciences)，2011，32(2):237-241.張瓏涓，李斌，謝至，等. Annexin A1 在胃癌中的表達(dá)及其與胃癌預(yù)后的關(guān)系［J］. 中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版)，2011，32(2):237-241.

［6］ Kaneda H，Arao T，Tanaka K，et al. FOXQ1 is overexpressed in colorectal cancer and enhances tumorigenicity and tumor growth ［J］.Cancer Res，2010，70(5):2053-2063.

［7］ Chen J，Li DS，Yu YH，et al. Clinical significance of Her-2 protein expression in gastric cancer［J］. World Chinese Journal of Digestology，2010，18(13):1375-1379.陳娟，李東石，余英豪，等. Her-2 蛋白在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義［J］. 世界華人消化雜志，2010，18(13):1375-1379.

［8］ Liu ZX，Wang JJ，Wang XX，et al. Expression and clinical significance of 15-hydroxyprostaglandin dehydrogenase and cyclooxygenase-2 in gastric cancer［J］. Chin J Gastroenterol Hepatol，2013，22(4):337-340.劉震雄，王景杰，王旭霞，等. 胃癌組織中15-PGDH 與COX-2 的表達(dá)特征及其臨床意義［J］. 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2013，22(4):337-340.

［9］ Katoh M，Igarashi M，F(xiàn)ukuda H，et al. Cancer genetics and genomics of human FOX family genes ［J］. Cancer Lett，2013，328(2):198-206.

［10］ Liu DY，Deng J，Guo W，et al. Expression of Gli-1 protein and its clinical significance in gastric cancer［J］. Chinese Journal of General Practice，2013，11(9):1342-1343，1465.劉道永，鄧軍，郭偉，等. Gli-1 蛋白在胃癌中的表達(dá)及臨床意義［J］.中華全科醫(yī)學(xué)，2013，11(9):1342-1343，1465.