人參果的組織培養(yǎng)與快繁技術

焦 宏

（遼寧省森林經營研究所，遼寧 丹東 118002）

人參果又名艷果，茄科多年生草本植物，原產哥倫比亞和智利安第斯山溫帶地區(qū)。近年引入我國，以其良好的生長習性和所結果實受到人們的歡迎，是一種觀賞兼食用的植物。在15～30℃一年四季均可開花結果。從坐果到成熟75天左右。漿果心形、桃形、橢圓形，果皮呈金黃色具有紫色條紋，在高溫天氣可散發(fā)出芳香。果實甜爽多汁、清香、味美，具有高蛋白、低糖、低脂肪的特點，有防癌和軟化血管的功能。最吸引人之處是每100g鮮果中含鈣高達910mg，是西紅柿的164倍，還含硒、鉬、鈷等人體所需的多種微量元素，堪稱難得的保健食品。通常以播種和莖段扦插繁殖，但引入之初，數(shù)量有限，用組織培養(yǎng)法可以大大加快繁殖速度，為該品種的推廣提供了一條有效途徑。

1 材料與方法

1.1 材料

取自遼寧丹東古城子苗圃，以人參果帶芽莖段、葉片作為外植體。實驗于2011年在組培中心實驗室進行。

1.2 方法

1.2.1 試驗基本程序

試材處理→接種→增殖培養(yǎng)→生根培養(yǎng)

試材處理：切取3cm帶頂芽或側芽的莖段→流水沖洗60min→75%酒精浸15s→0.1%升汞（HgCl2）溶液消毒7min→無菌水沖洗4～5次→用濾紙吸去水分→將葉切成0.5cm×0.5cm小方塊；莖段切成0.5cm帶側芽的小段。

1.2.2 培養(yǎng)基制作

表1 培養(yǎng)基配方

以 MS為基本培養(yǎng)基，激素選擇：6-BA，IBA，NAA，KT。按激素含量不同誘導培養(yǎng)基設9種處理，生根培養(yǎng)基3種處理，如表1。

表1培養(yǎng)基中蔗糖含量為30g／L（生根為20g／L），瓊脂8.5g／L，pH5.8～6.0，在1.1大氣壓下滅菌20min。

1.2.3 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)溫度20～25℃，光照每天14h，光照強度2000lx。

2 結果與分析

2.1 外植體誘導培養(yǎng)

葉片：接種7天后外植體，在7～9號培養(yǎng)基中組織變厚；培養(yǎng)15天后，在8號培養(yǎng)基中的愈傷組織開始出現(xiàn)許多白色小突起；20天后突起逐漸增大；40天后，在8號培養(yǎng)基中的愈傷組織已直接分化出苗，形成芽叢。

莖段：培養(yǎng)10天后觀察，在1～7號培養(yǎng)基中莖段基部開始膨大，出現(xiàn)愈傷組織；20天后，在4、7號培養(yǎng)基里的愈傷組織緊密，顏色深綠；在2、5號培養(yǎng)基里的愈傷組織緊密，顏色淡綠；在3、6號培養(yǎng)基里的愈傷組織松散，顏色發(fā)白。把愈傷組織緊密、顏色深綠、淡綠的，再重新轉入2、4、5、7號培養(yǎng)基中繼續(xù)誘導培養(yǎng)。

培養(yǎng)50天后觀察帶側芽莖段的生長情況，在5號培養(yǎng)基里的愈傷組織已分化出苗，苗多而且壯，同時仍有愈傷組織繼續(xù)出現(xiàn)，在2號培養(yǎng)基的苗特別多、弱，且少部分呈水浸狀；在4號培養(yǎng)基的苗少、壯。其它培養(yǎng)基有的沒有反應，有的愈傷組織出現(xiàn)，但松散、不利于苗的分化，有的直接分化出幾株苗太少或太弱，不理想。

綜上所述，以葉作外植體，用8號培養(yǎng)基進行誘導培養(yǎng)較為理想，一般在2個周期（40～50天）即能形成叢生芽，以莖段作外植體，在1～7號培養(yǎng)基一般20天能誘導出愈傷組織，但相對來講在2、5、7號培養(yǎng)基比較理想，50天即能誘導出叢生芽。

2.2 增殖培養(yǎng)

將較長的試管苗切成1cm左右莖段，其余切割成0.5cm×0.5cm左右小塊，轉入繼代培養(yǎng)基里進行增殖培養(yǎng)，觀察試管苗在繼代培養(yǎng)基中的表現(xiàn)情況，試管苗在5號培養(yǎng)基中，分化苗多且粗壯，其余苗長勢較弱。最后需轉入7號培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)，待生根。增殖培養(yǎng)周期的長短，要根據(jù)試管苗生長快慢來決定，生長快則繼代周期短，反之繼代周期長?？傊^察試管苗生長速度下降時，即可繼代。間隔時間太長，試管苗老化，葉變黃部分脫落；時間太短，浪費人力、物力。一般間隔期為20～25天，繁殖系數(shù)一般為3～5倍。

2.3 試管苗生根

在無菌狀態(tài)下，選擇粗壯、健康的2～3cm高小苗轉入不同的生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，其余小苗繼續(xù)進行繼代增殖培養(yǎng)。結果見表2。

表2 試管苗在不同培養(yǎng)基生根情況

從表2中可以看出，11號培養(yǎng)基生根時所需天數(shù)最少，根系生長情況最好，根的條數(shù)最多，所以11號培養(yǎng)基為最適生根培養(yǎng)基。

2.4 試管苗移栽

試管苗移栽是組織培養(yǎng)快繁的重要環(huán)節(jié)，是由異養(yǎng)轉為自養(yǎng)的過程。當根長到1.5～2.0cm時，打開瓶蓋，取出小苗，洗凈培養(yǎng)基，用多菌靈500～800倍溶液浸泡30min左右，然后栽入用0.1%高錳酸鉀消過毒的煉苗床上，煉苗床基質作4個處理，分別為：沙土（1∶1）、沙：蛭石（1∶1）、純沙、純蛭石。1天澆1次水，1周噴1次百菌清和營養(yǎng)液，蓋塑料拱棚，保溫保濕，7天后逐漸增加通風，并逐漸減少澆水，1個月后移栽到營養(yǎng)缽或直接移栽大田。試驗結果表明：以純沙為基質最好，成活率達95%以上。

3 結論

3.1 莖段培養(yǎng)在5號培養(yǎng)基MS＋BA2＋KT2上表現(xiàn)最好，前期可誘導出愈傷組織，仍用原培養(yǎng)基繼代1次即可出苗，繁殖系數(shù)3倍以上。

3.2 葉在8號培養(yǎng)基MS＋BA4＋KT2＋NAA0.1上連續(xù)培養(yǎng)40天即可分化出不定芽，繼代培養(yǎng)時在5號培養(yǎng)基MS＋BA2＋KT2（同莖段）上表現(xiàn)最好。但較莖段分化出的苗弱，因此需轉入7號培養(yǎng)基MS＋BA1＋KT1＋NAA0.1上壯苗。

3.3 生根培養(yǎng)以11號培養(yǎng)基1／2MS＋IBA0.1為好，生根率達98%以上，并且每株可達5～10條根。

3.4 移栽基質以純沙為最好，成活率達95%以上，并且成本最低，資源豐富。