阿奇霉素對(duì)支氣管肺炎患兒CD8+CD28-抑制性T細(xì)胞的影響

陳淼浦，鄧 力，李 薇，鐘順平東莞市虎門(mén)鎮(zhèn)太平人民醫(yī)院兒科，廣東 東莞 53900；廣州市兒童醫(yī)院小兒呼吸科，廣東 廣州 50080

支氣管肺炎是兒科常見(jiàn)的呼吸道疾病，肺炎支原體（MP）是其最為常見(jiàn)的病原體，阿奇霉素是治療該病常見(jiàn)的藥物之一［1］。已有研究表明支氣管肺炎患兒存在免疫紊亂，包括以補(bǔ)體（C）及免疫球蛋白（Ig）為代表的體液免疫紊亂，還包括以CD4+、CD8+T細(xì)胞亞群為代表的細(xì)胞免疫紊亂［2］。作為CD8+T細(xì)胞的重要一員，CD8+CD28-抑制性T細(xì)胞既可起到免疫增強(qiáng)作用，又可起到免疫抑制作用，因此被稱(chēng)為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）[3]。有研究發(fā)現(xiàn)喘息性肺炎患兒的CD8+CD28-Treg降低［4］，但該細(xì)胞在MP感染性支氣管肺炎患兒的表達(dá)如何，阿奇霉素對(duì)其是否有作用等，目前均未見(jiàn)相關(guān)研究。為此，本研究在探索該病患兒CD8+CD28-Treg表達(dá)的基礎(chǔ)上，探索阿奇霉素對(duì)其作用，并與紅霉素作為對(duì)照，過(guò)程如下。

1 資料與方法

1.1 患兒資料

選取2012年1月～2014年1月期間我院就診的支氣管肺炎患兒作為觀(guān)察對(duì)象，年齡0.5～6.5歲，平均3.51±3.03歲，男35例女31例。均經(jīng)血清MP抗體定量檢測(cè)確診為MP感染，經(jīng)臨床表現(xiàn)或結(jié)合胸片確診為支氣管肺炎。如患兒合并免疫性疾病則排除。選取同期到院就診的急性上呼吸道感染患兒作為陽(yáng)性對(duì)照組［5］，男37女29例，年齡3.69±3.11歲；以同期健康保健的66名健康兒童作為陰性對(duì)照組，男36女30例，年齡3.40±3.02歲。以上3組性別比例及年齡均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)

清晨采集以上3組的靜脈血約2 ml，抗凝后采用Ficoll分離獲得外周血單個(gè)核細(xì)胞，隨后應(yīng)用尼龍毛柱獲得T淋巴細(xì)胞，再與CD8磁珠（MACS）孵育30 min后進(jìn)行磁珠而分離出CD8+CD28-抑制性T細(xì)胞。使用BD多色流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD8+CD28-Treg所占T細(xì)胞總數(shù)的百分比。使用固定穿透劑對(duì)胞內(nèi)細(xì)胞因子TGF-β1及IL-10進(jìn)行染色，使用雙激光光源對(duì)TGF-β1及IL-10百分含量進(jìn)行檢測(cè)[6]。

1.3 PCT及MP-IgM檢測(cè)

以上述血清作為標(biāo)本，采用放射免疫法檢測(cè)PCT含量（單位為ng/ml），采用ELISA法檢測(cè)MP-IgM含量（單位為kU/L）。上述兩種試劑盒均購(gòu)自南京生物工程研究所，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)［7］。

1.4 治療方法

將以上66例支氣管肺炎患兒分為A組及B組各33例，其中A組男19例女14例，年齡3.52±3.01歲；B組男18例女15例，年齡3.52±3.01歲。A及B組性別比例及年齡同樣無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。A組給予阿奇霉素粉針，10 mg/(kg·d)靜脈滴注；B組給予紅霉素，30 mg/(kg·d)［8］。療程5 d。治療第7天采集靜脈血進(jìn)行上述指標(biāo)檢測(cè)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

定量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用單因素方差分析進(jìn)行組間的定量資料分析，治療前后的比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，兩組間資料比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，采用Pearson法對(duì)定量資料間的相關(guān)性進(jìn)行分析。運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件包SPSS15.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理當(dāng)P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［9］。

2 結(jié)果

2.1 3組兒童CD8+CD28-T細(xì)胞、PCT及MP-IgM含量比較

治療前，急性上感患兒CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β 1、IL-10、PCT及MP-IgM與健康組兒童均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但支氣管肺炎患兒CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1、IL-10顯著低于另外兩組（P＜0.05），而PCT及MP-IGM顯著高于另外兩組（P＜0.05，表1）。

表1 治療前3組兒童CD8+CD28-T細(xì)胞及其細(xì)胞因子、PCT及MP-IGM含量比較(n=66,x±s)

2.2 支氣管肺炎患兒治療前后CD8+CD28-T細(xì)胞、PCT及MP-IgM含量變化

治療前A及B組支氣管肺炎患兒的CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1、IL-10、PCT及MP-IGM均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。治療第7天，A及B組的CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β 1及IL-10呈不同程度回升，而PCT及MP-IgM回落。治療后A組CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1及IL-10均顯著高于B組（P＜0.05），且PCT及MP-IGM顯著低于B組（P＜0.05，表2）。

表2 治療前后A及B組支氣管肺炎患兒CD8+CD28-T細(xì)胞、PCT及MP-IGM含量對(duì)比(n=33,x±s)

2.3 相關(guān)性分析

相關(guān)性分析結(jié)果提示CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β 1、IL-10三者均與PCT及MP-IgM呈顯著負(fù)相關(guān)性，其中CD8+CD28-T細(xì)胞及TGF-β1與MP-IGM的相關(guān)性最強(qiáng)（表3）。

表3 CD8+CD28-T細(xì)胞及其細(xì)胞因子與PCT、MP-IGM的相關(guān)性分析

3 討論

MP是一種介于細(xì)菌和病毒之間的可獨(dú)立存活的最小病原微生物［10］。目前多數(shù)觀(guān)點(diǎn)認(rèn)為MP導(dǎo)致支氣管肺炎的發(fā)病機(jī)制主要有直接侵犯呼吸道與免疫反應(yīng)誘導(dǎo)的間接免疫-病理?yè)p傷兩大類(lèi)型［11］。在參與支氣管肺炎免疫紊亂的T細(xì)胞亞群中，CD8+T細(xì)胞起到重要作用。根據(jù)細(xì)胞膜是否表達(dá)CD28分子，CD8+T細(xì)胞可分為CD8+CD28+殺傷性T細(xì)胞及CD8+CD28-抑制性T細(xì)胞，后者是維持呼吸道免疫穩(wěn)定的關(guān)鍵因素［12］。與CD4+CD25+Treg類(lèi)似，CD8+CD28-Treg也分泌TGF-β1及IL-10，后兩者是Treg執(zhí)行免疫抑制的重要細(xì)胞因子［13］。作為大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)，阿奇霉素及紅霉素治療支氣管肺炎的常用藥物［14-18］，但兩者的免疫調(diào)節(jié)效果如何，對(duì)CD8+CD28-Treg哪個(gè)更顯優(yōu)勢(shì)，目前尚缺少探討。

本研究發(fā)現(xiàn)，急性上感患兒CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1、IL-10、PCT及MP-IgM與健康組兒童均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但支氣管肺炎患兒CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1及IL-10顯著低于、而PCT及MP-IgM顯著高于急性上感及健康兒童組，其中CD8+CD28-T細(xì)胞亞群降低，與柴少卿[19]報(bào)道的一致。以上結(jié)果說(shuō)明CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1、IL-10、PCT及MP-IgM五者在上感及支氣管肺炎存在差異性表達(dá)，同時(shí)說(shuō)明：與上感比較，以上五項(xiàng)對(duì)支氣管肺炎診斷有一定的特異性。相關(guān)性分析結(jié)果提示CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1、IL-10三者均與PCT及MP-IgM呈顯著負(fù)相關(guān)性，其中CD8+CD28-T細(xì)胞及TGF-β1與MP-IgM的相關(guān)性最強(qiáng)，這說(shuō)明CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1及IL-10含量越高，則PCT及MP-IgM含量越低，對(duì)病情恢復(fù)越有利，間接說(shuō)明CD8+CD28-T細(xì)胞所起的免疫抑制作用可能是抗炎的藥理學(xué)基礎(chǔ)，其所分泌的TGF-β1及IL-10可能是抑炎的主要細(xì)胞因子，因此以上三者可能是對(duì)支氣管肺炎患兒有利的指標(biāo)，而PCT及MP-IgM則說(shuō)明炎癥程度，是相對(duì)不利的指標(biāo)。

治療前兩組支氣管肺炎患兒的CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1、IL-10、PCT及MP-IgM均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明兩組分組具有均衡性及可比性。從治療的反應(yīng)看，治療后A及B組的CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1及IL-10呈不同程度回升，而PCT及MP-IgM回落。治療后A組CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1及IL-10盡管尚未完全回升至健康組兒童的水平，但均已顯著高于治療前并顯著高于B組，且PCT及MP-IgM已顯著低于B組；而作為對(duì)照藥物的紅霉素組，該組患兒CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1及IL-10較治療前并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且顯著低于阿奇霉素，說(shuō)明該藥對(duì)此三項(xiàng)指標(biāo)的改善并不明顯，間接提示此三者可能不是阿奇霉素的靶性淋巴細(xì)胞。作為評(píng)價(jià)感染程度的指標(biāo)，阿奇霉素及紅霉素組患兒的PCT及MP-IgM在治療后均顯著低于治療前，說(shuō)明兩藥的均可降低支氣管及肺泡內(nèi)炎癥，但結(jié)果提示治療的PCT及MP-IgM以阿奇霉素組下降更為顯著，說(shuō)明阿奇霉素效果更好，該結(jié)果與朱慶齡[16]報(bào)道的具有一致性。

通過(guò)本研究筆者認(rèn)為，CD8+CD28-T細(xì)胞、TGF-β1及IL-10三者下降是MP感染相關(guān)性支氣管肺炎患兒的重要免疫學(xué)特征，并且與PCT及MP-IgM呈顯著相關(guān)性；阿奇霉素對(duì)提高CD8+CD28-T細(xì)胞含量及下調(diào)PCT及MP-IgM的效果均優(yōu)于紅霉素。

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