復(fù)方中藥DF對高血壓大鼠血壓的影響及機(jī)制

，， ，，(.南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥劑科，湖南 衡陽 400；.南華大學(xué)藥物藥理研究所)

復(fù)方中藥DF對高血壓大鼠血壓的影響及機(jī)制

伍小娟1，蒲智蘭2，曹軒2，陳臨溪2，唐國濤2
(1.南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥劑科，湖南 衡陽 421001；2.南華大學(xué)藥物藥理研究所)

目的初步探討復(fù)方中藥DF對自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)的降壓作用。方法采用水提和醇提法對復(fù)方中藥DF進(jìn)行有效成分的提取，用大鼠無創(chuàng)尾動(dòng)脈法觀察口服復(fù)方中藥DF后對SHR的降壓作用，并用相應(yīng)試劑盒測定血漿甘油三酯、總膽固醇、血管緊張素Ⅱ、內(nèi)皮素的水平。結(jié)果給藥3周后水提各劑量組與相應(yīng)的醇提各劑量組比較有更強(qiáng)的抗高血壓的作用(P<0.05)。與不給藥對照組比較，水提組能明顯降低甘油三酯、總膽固醇、血管緊張素Ⅱ和內(nèi)皮素水平(P<0.05)。結(jié)論復(fù)方中藥DF水提部分對SHR有明顯降壓作用，其作用機(jī)制可能與降低體內(nèi)總膽固醇、甘油三酯及舒張血管平滑肌有關(guān)。

中藥復(fù)方DF； 高血壓； 大鼠

研究表明，高血脂、高血壓是心腦血管病的主要危險(xiǎn)因素之一[1]，近年來高血壓病的發(fā)病率呈明顯上升趨勢，國內(nèi)成人高血壓患病率為18.8%[2]。高血壓的長期存在會對心、腎、腦等靶器官造成一定的損害，致使其功能受損。但在臨床應(yīng)用中，理想的降壓、降脂藥物不多，且多為西藥，而西藥一般具有明顯的毒副作用。因此，研究開發(fā)安全、高效、作用持久的降壓、降脂中藥是目前研究的重點(diǎn)課題之一。

復(fù)方中藥DF是由具有多年臨床經(jīng)驗(yàn)的中醫(yī)師提供的臨床經(jīng)驗(yàn)方，其主要成分為天麻、羅布麻葉、葛根、地龍等，臨床用于治療高血壓病療效確切。為了進(jìn)一步探討復(fù)方中藥DF的降壓作用，本實(shí)驗(yàn)采用自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，觀察其對SHR血壓、血清甘油三酯、總膽固醇、血管緊張素Ⅱ、內(nèi)皮素的影響，為其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)72只，9～10周齡，雌雄各半，SPF級，體重240～300 g。血壓正常的Wistar Kyoto大鼠(WKY)8只，9～10周齡，雌雄各半，SPF級，體重280～320 g。均購自北京維通利華。

1.2 試劑與儀器

BP-6動(dòng)物無創(chuàng)血壓測定儀(成都泰盟科技有限公司)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀R-52A(上海亞榮)。甘油三酯ELISA試劑盒、總膽固醇ELISA試劑盒、血管緊張素ⅡELISA試劑盒、內(nèi)皮素ELISA試劑盒均購自上?；鈱?shí)業(yè)有限公司，數(shù)據(jù)由該公司代測。

1.3 藥材提取

中藥復(fù)方DF主要成分為天麻、羅布麻葉、葛根、地龍等。地龍需單獨(dú)進(jìn)行特殊方法處理，其余藥材一起處理。托譜利片(上海衡山藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，25 mg/100片，批號120317)，復(fù)方羅布麻片Ⅰ(山西云鵬制藥有限公司生產(chǎn)，批號20121109)。

水提液：按處方組成取藥材，加10倍量水，回流提取1 h，過濾。濾渣加8倍量水回流提取1 h。合并濾液，濃縮至相對比重1.05。放冷，加95%乙醇使醇濃度達(dá)40%，放置過夜，過濾后濾液濃縮備用。

醇提液：按處方組成取藥材，加10倍量70%乙醇，回流提取1 h，過濾。濾渣加8倍量70%乙醇，回流提取1 h。合并濾液，放冷。加水使醇濃度達(dá)40%，放置過夜，過濾后濾液濃縮備用。

地龍?zhí)崛∫海喊刺幏浇M成取相應(yīng)地龍量，剪碎，加4倍量水，放冰箱凍實(shí)，解凍。反復(fù)5次，取上清液，同法提取2次，合并上清液，減壓濃縮至相對比重1.05，用時(shí)按處方比例加入水提或醇提液中混勻(地龍?zhí)崛∫簼饪s后放冰箱凍存防腐)。

1.4 分組與給藥

SHR大鼠(北京維通利華)72只，隨機(jī)分為9組，分別為空白對照組、水提液低劑量組、水提液中劑量組、水提液高劑量組、醇提液低劑量組、醇提液中劑量組、醇提液高劑量組、復(fù)方羅布麻片Ⅰ對照組、卡托普利片對照組。另取WKY大鼠8只作為對照。

大鼠普通喂養(yǎng)適應(yīng)1周，每天灌胃給藥，按2 mL/200 g灌胃給藥，低劑量組為換算后的人日服計(jì)量，中劑量組為2倍日服計(jì)量，高劑量組為3倍日服計(jì)量。

1.5 觀察指標(biāo)

各組于第1、3、5、8、12、16、22天灌胃1 h后用BP-6動(dòng)物無創(chuàng)血壓測定儀測量血壓。環(huán)境安靜、恒溫(26 ℃)，在清醒與非激怒狀態(tài)下測量大鼠收縮壓，連續(xù)測量3次，取均值。

給藥結(jié)束3天后，頸動(dòng)脈取血，分離血清，用相應(yīng)試劑盒測定甘油三酯、總膽固醇、血管緊張素Ⅱ、內(nèi)皮素水平，由上?；鈱?shí)業(yè)有限公司代測。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 復(fù)方中藥DF對SHR大鼠收縮壓的影響

從表1可見，SHR大鼠血壓均高于WKY大鼠組，空白對照組SHR大鼠血壓隨時(shí)間不斷升高(P<0.05)，說明11周齡SHR大鼠高血壓正在逐步形成，并隨著時(shí)間的延長，高血壓程度逐漸加重；與空白對照組比較，從3天起，卡托普利組、中藥復(fù)方DF水提高、中、低劑量組與空白組相比血壓均明顯降低(P<0.05)。從5天起，中藥復(fù)方DF醇提高、中劑量組與空白對照組相比血壓明顯降低(P<0.05)，而復(fù)方羅布麻片Ⅰ對照組、醇提的低劑量組與空白對照組相比并無顯著性差異。

盡管復(fù)方中藥DF給藥組中水提高劑量組的抗高血壓效果最好，但由于藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)過程中，低劑量組的給藥劑量為人日服劑量換算而得到大鼠給藥劑量，而復(fù)方羅布麻片對照組和卡托普利對照組也為人日服劑量換算的大鼠給藥劑量，故以低劑量組的抗高血壓效果與對照組比較才更有意義。本研究將低劑量組與對照組進(jìn)行了比較，在實(shí)驗(yàn)后期22天時(shí)，低劑量水提組與醇提組比較，其抗高血壓效果明顯(P<0.05)。

2.2 復(fù)方中藥DF對甘油三酯、總膽固醇、血管緊張素Ⅱ、內(nèi)皮素水平的影響

各實(shí)驗(yàn)組大鼠每天灌胃給藥，最后1次給藥3天后，取血測定血清中各指標(biāo)，其結(jié)果見表2。SHR大鼠血清中甘油三酯、總膽固醇水平均比WKY大鼠組要高。但經(jīng)給藥后，無論是水提組還是醇提組，其甘油三酯、總膽固醇量的量與空白對照組相比，又有所降低。血管緊張素Ⅱ和內(nèi)皮素水平的變化趨勢與甘油三酯和總膽固醇的變化趨勢相似，但變化水平不如前者明顯，在醇提低劑量組中，血管緊張素Ⅱ、內(nèi)皮素水平與空白對照組比較，并無顯著性差異，這與高血壓的結(jié)果較為相似。

表1各組給藥1h后血壓測定結(jié)果(mmHg)

組 別0天1天3天5天8天12天16天22天Wky組119．5±8．1119．7±6．5119．0±5．3119．0±7．8119．4±9．8118．2±6．8115．0±8．9117．6±11．3水提低組133．8±6．0132．3±8．7127．4±6．3a130．5±3．5a135．8±5．3a140．2±10．6a136．8±8．6ab140．9±6．4ab水提中組137．3±5．3130．9±9．8129．7±11．9a129．2±6．5a128．6±10．1a131．0±9．5a143．7±9．7a134．5±19．8ab水提高組134．7±12．2130．6±8．5126．9±2．7a128．0±7．5a126．3±1．9a126．1±5．9a130．3±6．1ab132．5±10．1ab醇提低組138．7±5．5137．2±5．1142．3±6．5138．5±8．3141．4±5．4146．4±9．9142．9±3．2154．2±4．7醇提中組131．6±9．8136．8±11．2149．5±8．4133．6±9．7a136．8±13．1a137．9±4．7a136．0±4．3a145．0±6．3a醇提高組139．2±7．1126．0±6．5151．9±20．3129．7±14．5a129．4±7．4a134．6±6．9a135．3±6．6a142．9±12．9a復(fù)方羅布麻片Ⅰ組136．5±7．3135．2±4．6133．4±10．3141．9±10．8146．3±8．3150．2±8．1148．7±7．3152．9±8．1卡托普利片組132．3±4．5126．6±3．0126．4±4．9a128．4±7．2a128．5±3．8a133．3±8．5a124．0±4．4a130．9±5．2a空白組134．7±5．4138．6±5．3145．6±8．5146．1±12．1149．9±12．7156．3±6．7157．2±14．3165．8±6．2

與空白組比較，a:P<0.05，與相應(yīng)醇提組比較，b:P<0.05

表2各組血漿甘油三酯、總膽固醇、血管緊張素Ⅱ、內(nèi)皮素含量的比較(n=6)

組 別甘油三酯(nmol/L)總膽固醇(nmol/L)血管緊張素Ⅱ(ng/ml)內(nèi)皮素(μg/L)Wky組21．30±0．964．56±0．19294．40±6．3172．46±1．75水提低組26．80±4．225．51±0．15327．52±7．0388．23±2．33水提中組24．85±0．345．37±0．17317．72±9．9480．63±3．09水提高組23．62±0．604．98±0．18312．72±10．4180．02±2．17醇提低組27．35±0．585．80±0．14358．71±11．52a92．81±3．68a醇提中組27．76±0．555．78±0．19358．91±7．73a90．07±3．11醇提高組27．44±0．575．68±0．15340．71±9．9086．54±2．41復(fù)方羅布麻片Ⅰ組26．55±1．085．62±0．23336．71±6．9086．01±2．20卡托普利片組24．03±1．085．11±0．17324．32±7．7380．42±1．66空白組29．08±0．755．93±0．18362．22±8．1094．76±3．42

與空白組比較，a:P>0.05；其余均P<0.05

3 討 論

WKY對照組在實(shí)驗(yàn)過程中未出現(xiàn)血壓的變化，而SHR空白組在實(shí)驗(yàn)過程中血壓逐漸上升，所購SHR大鼠為9～10周齡大鼠，適應(yīng)1周后為10～11周齡，共實(shí)驗(yàn)3周，結(jié)束時(shí)為13～14周齡，而這個(gè)過程中剛好是高血壓形成初期[3]，血壓在不斷上升，所以對于給藥組在血壓上的下降可能不是很明顯，如果在高血壓穩(wěn)定期，則其降血壓的效果可能更明顯。

從表1中可以看出本復(fù)方具有明顯的抗高血壓作用。水提組所得成分在SHR大鼠高血壓初步形成期能夠控制血壓的上升，在給藥第1天均使血壓有所下降，從第3天起，水提組分與空白對照的SHR大鼠組相比具有明顯的降低血壓的作用。其在高血壓穩(wěn)定期可以促使血壓下降，其作用效果雖不如化學(xué)藥卡托普利作用強(qiáng)，但比市售中藥復(fù)方羅布麻片Ⅰ的效果好。

甘油三酯、總膽固醇與高血壓的發(fā)病密切相關(guān)[4-5]，常伴隨存在。從表2中可以看出，復(fù)方中藥DF水提組均有一定程度降低甘油三酯、總膽固醇水平，說明其有一定的降血脂作用。血管緊張素Ⅱ是其維持和升高血壓的關(guān)鍵因子[6]，也是最強(qiáng)的內(nèi)源性收縮血管因子之一。內(nèi)皮素是由內(nèi)皮細(xì)胞合成的具有強(qiáng)大的縮血管功能的活性多肽，內(nèi)皮素與其受體結(jié)合，介導(dǎo)平滑肌細(xì)胞依賴的血管收縮效應(yīng)[7]。中藥復(fù)方DF提取物可能通過降低血清中內(nèi)皮素和血管緊張素Ⅱ含量發(fā)揮降壓效應(yīng)，但中藥復(fù)方DF成分復(fù)雜，作用機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。處方中的成分葛根、地龍等均有一定的抗高血壓效果，是否還能通過其他途徑達(dá)到降壓功效尚需作進(jìn)一步的研究探討。

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AntihypertensiveEffectofCompoundTraditionalChineseMedicine

WU Xiaojuan,PU Zhilan,CAO Xuan,et al
(TheFirstAffiliatedHospital,UniversityofSouthChina,Hengyang,Hunan421001,China)

ObjectiveTo investigate the antihypertensive effect and the mechanism of the Chinese medicine compound DF in spontaneous hypertensive rats (SHR).MethodsEffecctive components were extracted by water or alcohol in the Chinese medicine compound DF.Blood pressures of SHR rats were measured indirectly by tail arteries in awaken rats.The level of triglyceride,total cholesterol,the AngiotensinⅡand the endothelin in blood was measured by the corresponding ELISA kits.ResultsThe blood pressure of water extrations were more decreased than that of alcohol extaction in later days after administration.Compared with the model group，the triglyceride,the total cholesterol,the AngiotensinⅡwere reduced significantly in the Aqueous extract solution low-dose group of Chinese medicine compound DF.ConclusionsThe Chinese compound formula DF has a significant antihypertensive effect in SHR.The mechanism may be related to its actions in reduction of triglyceride,total cholesterol,the AngiotensinⅡand the endothelin level in blood.

traditonal chinese medicine compound； hypertension； rats

2095-1116(2014)05-0472-03

2014-01-08

伍小娟，本科，主管藥師，研究方向：藥物制劑研究，E-mail:1620489796@qq.com.通訊作者唐國濤，博士，講師，研究方向：藥物制劑研究，E-mail:tqtzq@163.com.

R259.441

A

(此文編輯：朱雯霞)