復(fù)方仙草素對肝癌血道肺轉(zhuǎn)移瘤表達的實驗研究*

薛曉彤 張博 董曉愷 陳建衡 任青華#

（1山東省泰山療養(yǎng)院 泰安271000；2山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院 濟南250062；3山東省立醫(yī)院 濟南265513）

復(fù)方仙草素由止血的仙鶴草與補氣的人參兩味中藥組成，其主要有效成分是仙鶴草素和人參皂甙。在以往的臨床和基礎(chǔ)實驗中，我們發(fā)現(xiàn)該兩味中藥已經(jīng)不再是傳統(tǒng)意義上止血和補氣的作用，而且具有非常廣泛的藥理功效，尤其對抑制惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移具有良好的治療效果。為進一步探討中醫(yī)藥抗腫瘤轉(zhuǎn)移的作用機理，我們對中藥復(fù)方仙草素進行了深入的實驗研究?，F(xiàn)報告如下：

1 材料與方法

1.1 材料 動物：昆明種健康小白鼠，清潔級（二級）、雄性、體重（25±0.5）g，山東省動物實驗中心提供，合格證書：動管資字（SYXK魯2009）第01569號。瘤株：W256腫瘤細胞，中國中醫(yī)研究院生物科學(xué)研究所提供。標本：轉(zhuǎn)移瘤組織，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所提供。藥品：復(fù)方仙草素，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所中藥室提供。儀器：GF-2臥式離心機，北京中外科技醫(yī)療公司生產(chǎn)。SD-3組織勻漿器，江蘇南京藥理研究院創(chuàng)強科技公司生產(chǎn)。LY型紫外分光光度計，上海浦江科技有限公司生產(chǎn)。QR-3型扭力天平，山東醫(yī)療器械總公司生產(chǎn)。

1.2 實驗方法 動物分組：取小鼠60只，隨機分成模型對照組、低濃度組與高濃度組各20只。肝癌血道肺轉(zhuǎn)移瘤模型建立：取傳代8～12 d、生長良好的W256腫瘤瘤株，頸椎脫臼，固定于蠟板上，用碘酊、酒精消毒瘤株腹部皮膚，打開腹腔，選擇生長良好無壞死或液化的腫瘤組織，放置平皿內(nèi)，剪成2～3 mm3的小塊，用玻璃組織勻漿器研磨，混勻后放入無菌容器內(nèi)，D-Hanks液洗滌3次，離心2次，取上清液加生理鹽水稀釋成1∶3的瘤細胞懸液。調(diào)整細胞濃度為2×106/mL（細胞存活率＞96%）。所有小鼠尾部消毒后，尾靜脈注射W256腫瘤細胞懸液0.25 mL/只，整個操作應(yīng)在60 min內(nèi)完成。動物用藥：模型對照組給予同體積的生理鹽水；高濃度組給予復(fù)方仙草素4.80 g/kg；低濃度組給予復(fù)方仙草素2.40 g/kg。每日灌胃1次，每次0.80 mL，連續(xù)給藥18 d，于第19天處死動物，剝離肺臟稱重，Bouin液固定，以單盲法計數(shù)肺轉(zhuǎn)移瘤結(jié)節(jié)數(shù)，計算肺結(jié)節(jié)抑制率、肺轉(zhuǎn)移瘤生長指數(shù)抑制率，同時將剝離的轉(zhuǎn)移瘤組織固定于福爾馬林溶液中，石蠟包埋、切片、免疫組化，進行腫瘤組織形態(tài)學(xué)、病理學(xué)觀察。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件進行方差分析檢驗，研究數(shù)據(jù)均以（±S）表示。

2 結(jié)果

2.1 三組實驗效果比較 與模型對照組比較，高濃度組肺結(jié)節(jié)抑制率為34.86%、P＜0.05，肺轉(zhuǎn)移瘤生長指數(shù)抑制率為31.50%、P＜0.05，具有顯著性差異；與模型對照組相比較，低濃度組肺結(jié)節(jié)抑制率為28.84%、P＞0.05，肺轉(zhuǎn)移瘤生長指數(shù)抑制率為16.53%、P＞0.05，無顯著性差異。見表1。

表1 復(fù)方仙草素對肝癌血道肺轉(zhuǎn)移瘤的影響 （±S）

表1 復(fù)方仙草素對肝癌血道肺轉(zhuǎn)移瘤的影響 （±S）

注：與模型對照組比較，*P＜0.05。

組別 n 肺結(jié)節(jié)結(jié)節(jié)數(shù)（個） 抑制率（%）肺轉(zhuǎn)移瘤生長指數(shù)（×10-3）抑制率（%）模型對照組高濃度組低濃度組20 20 20 12.45±6.13 8.11±3.78*8.86±4.11 34.86 28.84 9.212±2.124 6.310±1.803*7.689±2.045 31.50 16.53

2.2 轉(zhuǎn)移瘤組織形態(tài)學(xué)及病理學(xué)觀察 模型對照組肺組織可見廣泛的轉(zhuǎn)移病灶，結(jié)節(jié)大小不一，分布于肺組織血管及支氣管周圍；癌組織呈浸潤性生長，細胞核深染，核漿比例失調(diào)，大部分肺葉被瘤組織取代。高濃度組肺組織轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)顯著少于模型對照組，以小轉(zhuǎn)移灶為主，邊界清楚，少數(shù)侵襲血管壁和圍繞血管生長，可見較多部分癌細胞變性壞死。低濃度組癌細胞浸潤結(jié)締組織，有少量圍繞氣管和血管生長，癌細胞壞死面積局限于肺組織邊緣。實驗研究表明，高濃度組對小鼠肝癌血道肺轉(zhuǎn)移瘤具有良好的抑制作用，肺結(jié)節(jié)抑制率與轉(zhuǎn)移瘤生長指數(shù)抑制率均高于低濃度組，具有明顯的量效依賴性。

3 討論

復(fù)方仙草素含有多種藥理活性，具有非常廣闊的應(yīng)用前景。本實驗結(jié)果表明，高濃度組肝癌血道肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)顯著少于模型對照組，可見較多部分的癌細胞變性壞死，明顯優(yōu)于低濃度組，呈現(xiàn)出較強的量效關(guān)系。提示臨床用藥在一定的情況下應(yīng)該達到足夠的劑量（濃度）甚至更大的劑量（濃度），才能具有良好的抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用。現(xiàn)代藥理研究表明，仙鶴草對惡性腫瘤具有顯著的抗擴散作用，其水提液能明顯抑制小鼠S180肉瘤、U14宮頸癌、B16黑色素瘤、H22肝癌實體瘤，同時還具有改善血液高黏狀態(tài)的作用[1]。人參皂甙能提高生物體內(nèi)網(wǎng)狀細胞的吞噬功效，增強IL-2和自然殺傷細胞的活性[2]，誘導(dǎo)腫瘤細胞的凋亡，抑制血管內(nèi)皮生長因子的表達[3]，從而控制腫瘤新生血管的形成和轉(zhuǎn)移。本實驗進一步證實，高濃度的復(fù)方仙草素對肝癌血道肺轉(zhuǎn)移瘤具有較強的抑制作用。

[1]黃自麗，黃修燕，鄭起.中藥抗腫瘤作用及其作用機制研究進展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2010，16(3)：386-389

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[3]Suzuki S，Kuwajima T，Yoneyama Y，et al.Maternal peripheral T-helper 1-type and T-helper 2-type immunity in nonpreeclamptic twin pregnancies[J].Gynecol Obstet Invest，2002，53(3)：140-143