金華地區(qū)509對(duì)不良妊娠史夫婦細(xì)胞遺傳學(xué)分析

金克勤，沈雙雙，徐夏苑，楊?yuàn)檴?，張?/p>

（浙江省金華市婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心，金華 321000）

近年，不良妊娠如不孕不育、胚胎停育、流產(chǎn)、畸胎或生育畸形兒、死胎等呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。不良妊娠病因復(fù)雜，其中遺傳因素是重要因素之一。本研究對(duì)2010年5月至2014年4月在我院就診、有不良妊娠史的509對(duì)夫婦的外周血培養(yǎng)染色體檢查結(jié)果進(jìn)行分析，探討染色體異常與不良妊娠的關(guān)系，旨在為臨床診療提供一定參考。

一、資料與方法

1.臨床資料：收集2010年5月至2014年4月來(lái)我院就診、有不良妊娠史的夫婦509 對(duì)（1 018人），其中原發(fā)性不孕不育夫婦93對(duì)，有流產(chǎn)或死胎史的夫妻332對(duì)，有畸胎史的夫妻84對(duì)。夫妻雙方表型及智力均無(wú)明顯異常，年齡20～45歲。

2.方法：納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）原發(fā)性不孕不育：育齡夫婦雙方同居1年以上，有正常性生活，未采用任何避孕措施，未成功孕育［1］；（2）流產(chǎn)或死胎史：曾經(jīng)受孕但因種種原因?qū)е铝鳟a(chǎn)、死胎而未獲得存活嬰兒的夫婦；（3）畸胎史：孕育了畸胎或生育異常兒（如畸形、智障兒等）的夫婦。

標(biāo)本采集及外周血培養(yǎng)：所有患者在知情同意的前提下，夫婦雙方均采用靜脈真空采血方式抽取5ml靜脈血，置于肝素鈉抗凝管內(nèi)。由經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)的檢測(cè)人員進(jìn)行操作，將外周血標(biāo)本于超凈工作臺(tái)內(nèi)接種于外周血培養(yǎng)基（一生駿培養(yǎng)基，由廣州白云山拜迪生物醫(yī)藥有限公司提供），接種量為0.4ml。置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h，收獲前1.5h加入150μl 10μg／ml的秋水仙素（杭州浩仁生物科技有限公司提供）使染色體停滯在分裂中期。最后收獲細(xì)胞、制片、烤片，使用杭州浩仁生物科技有限公司提供的Giemsa染液進(jìn)行胰酶消化，常規(guī)G 顯帶染色后鏡檢，計(jì)數(shù)20個(gè)核型。鏡下繪圖并分析3 個(gè)核型。如有嵌合現(xiàn)象則增加計(jì)數(shù)到100 個(gè)核型，分析5 個(gè)核型；必要時(shí)增加C顯帶分析。使用英國(guó)AI染色體圖像分析系統(tǒng)軟件進(jìn)行染色體核型分析，結(jié)果按照人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制（ISCN2005）［2］標(biāo)準(zhǔn)命名。

二、結(jié)果

1.509對(duì)有不良妊娠史的夫婦中染色體核型異常59例，異常檢出率為5.80%（59／1 018）。不同臨床表現(xiàn)各類染色體核型異常檢出情況及發(fā)生率見表1。

表1 不同臨床表現(xiàn)各類染色體核型異常檢出情況及發(fā)生率［n，（%）］

2.59例染色體核型異常與臨床表現(xiàn)見表2。

三、討論

染色體由DNA 和蛋白質(zhì)組成，是遺傳物質(zhì)基因的主要載體［3］。人類基因按照嚴(yán)格順序排列，各基因之間保持較恒定的毗鄰關(guān)系。若染色體出現(xiàn)數(shù)目異?；蚪Y(jié)構(gòu)畸變，會(huì)導(dǎo)致基因增加或缺失從而引起一系列臨床效應(yīng)［4］。本文通過(guò)509對(duì)不良妊娠史夫婦染色體核型進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，染色體核型異常幾乎可以涉及所有染色體，如1、2、3、5、6、8、9、10、11、13、14、15、16、17、18、20、21、22號(hào)染色體及X、Y 性染色體，染色體核型異常的檢出率為5.80%，遠(yuǎn)高于一般人群的0.5%［4］，提示染色體核型異常可能

是發(fā)生不良妊娠的原因之一，并且不同類型的核型異?？梢酝ㄟ^(guò)其作用機(jī)制引起流產(chǎn)、不孕不育、畸形兒等臨床表現(xiàn)。

表2 59例染色體異常核型與臨床表現(xiàn)

染色體平衡易位在一般人群中的發(fā)生率約為1／500［5］，本研究中509對(duì)有不良妊娠史的夫婦中存在常染色體易位的17 例，其中平衡易位13 例（1.3%），顯著高于一般人群的發(fā)生率，提示存在染色體平衡易位的患者可能更易發(fā)生不良妊娠。存在1對(duì)染色體平衡易位的攜帶者理論上在減數(shù)分裂過(guò)程可產(chǎn)生18種類型的配子，與正常配子結(jié)合后，可形成18種合子，其中1種正常，1種為平衡易位，其余16種為部分三體或部分缺失，遭到破壞的基因平衡可在臨床上引起流產(chǎn)、胎兒畸形甚至死胎［4］。本研究中檢出羅伯遜易位3例（0.3%），同樣亦顯著高于一般人群的發(fā)生率（1／900～1／1 000）［6］。理論上非同源羅伯遜易位可產(chǎn)生6種配子，其中1種正常，1種為攜帶者，其余4種或重復(fù)或缺失，導(dǎo)致受精卵發(fā)育過(guò)程異常出現(xiàn)流產(chǎn)、死胎現(xiàn)象。本研究觀察到的17例常染色體易位中有14例出現(xiàn)流產(chǎn)、死胎史，2例有生育或引產(chǎn)異常兒史，可能與上述染色體核型異常有關(guān)；另外1例原發(fā)性不孕患者，可能由于涉及多條染色體復(fù)雜易位，產(chǎn)生正常卵的概率微乎其微，且同時(shí)存在自身子宮發(fā)育異常、盆腔異常等諸多因素，臨床表現(xiàn)為原發(fā)性不孕。

染色體倒位一般沒有染色體水平可見的遺傳物質(zhì)增減，因此通常無(wú)明顯的表型效應(yīng)。但本研究中12例常染色體臂間倒位中有5例出現(xiàn)原發(fā)性不孕不育，5例有流產(chǎn)或死胎史，2例有畸胎史，提示染色體倒位可能改變基因順序甚至影響子代胚胎的存活。倒位染色體在生殖細(xì)胞的減數(shù)分裂過(guò)程中，可形成特有的倒位環(huán)，若倒位環(huán)內(nèi)不發(fā)生交換，將形成1個(gè)正常配子，1個(gè)攜帶倒位染色體的配子；若倒位環(huán)中發(fā)生1次交換，將形成2種不平衡的配子，其與正常配子結(jié)合，形成1種正常染色體和1種倒位染色體，而另外2種則是有部分重復(fù)及部分缺失的重組染色體［2，7］。由于重組染色體重復(fù)和缺失的片段存在基因差異，導(dǎo)致配子形成障礙或形成畸形的配子，因此本研究中染色體倒位攜帶者，臨床上表現(xiàn)為不同程度的不良妊娠，如不孕不育、流產(chǎn)、畸胎或死胎等。

染色體多態(tài)性也稱異態(tài)性，通常集中在人類的第1、9、16、D 和G 組以及Y 等染色體上，涉及短臂、次溢痕及Y 染色體長(zhǎng)臂遠(yuǎn)側(cè)端等部位，通常不具有表型效應(yīng)，不影響個(gè)體健康［8］。本研究中17例常染色體多態(tài)性異常中，14 例有流產(chǎn)史，2 例畸胎史，1例不育，提示染色體多態(tài)性也可能通過(guò)某些機(jī)制影響人類生殖過(guò)程，這可能與異染色質(zhì)在著絲粒功能維持中起著至關(guān)重要的作用有關(guān)。異染色質(zhì)可以加強(qiáng)著絲粒區(qū)，確保染色體的分離，使著絲點(diǎn)穩(wěn)定化，且同源染色體可通過(guò)其異染色質(zhì)區(qū)的重復(fù)序列在減數(shù)分裂時(shí)配對(duì)，促進(jìn)沿染色體全長(zhǎng)的聯(lián)會(huì)。異染色質(zhì)的異?？赡苡绊憸p數(shù)分裂時(shí)染色體的配對(duì)聯(lián)會(huì)或改變整個(gè)減數(shù)分裂的時(shí)相，造成異常分裂，繼而影響配子的形成，甚至導(dǎo)致最終的妊娠失?。?］。另外，常染色質(zhì)經(jīng)過(guò)染色體重排移位到異染色質(zhì)區(qū)或其附近，在異染色質(zhì)影響下可能導(dǎo)致常染色質(zhì)的異染色質(zhì)化，產(chǎn)生斑點(diǎn)位置效應(yīng)，使其基因表達(dá)受到抑制，從而引起一些與生殖相關(guān)的基因沉默。這些變異在一定的內(nèi)、外環(huán)境作用下可導(dǎo)致臨床上流產(chǎn)、不育不孕、死胎及其它表現(xiàn)的不良妊娠現(xiàn)象。

性染色體是決定個(gè)體雌雄性別的染色體。性染色體的數(shù)目增多、結(jié)構(gòu)變異如缺失、重復(fù)、倒位、易位等均會(huì)導(dǎo)致性染色體畸變，使第二性征發(fā)育障礙或異常。本研究中存在性染色體異常的患者中有9例表現(xiàn)為原發(fā)性不孕不育，3例流產(chǎn)，1例畸胎史，其中47，XXY 核型約占50%。通常人們認(rèn)為47，XXY只有1條X 染色體有活性，另外1條X 染色體處于失活狀態(tài)［10］，但臨床上該核型患者往往表現(xiàn)為先天性睪丸發(fā)育不全，這可能由于X 染色體未完全失活，多余的染色體可以產(chǎn)生劑量效應(yīng)影響男性生殖器官發(fā)育有關(guān)［11］，從而導(dǎo)致患者第二性征發(fā)育異常，如性器官發(fā)育欠佳或臨床表現(xiàn)為無(wú)精子癥，導(dǎo)致原發(fā)性不育。

綜上所述，染色體異常是不良妊娠發(fā)生的重要原因之一。夫妻雙方任何一方存在染色體異常，生育下一代時(shí)都可能由于存在染色體重組、互換等，導(dǎo)致流產(chǎn)、不孕不育、生育畸形兒或死胎等現(xiàn)象發(fā)生。因此，對(duì)有不良妊娠史的夫婦進(jìn)行細(xì)胞遺傳學(xué)檢測(cè)，有助于病因分析診斷。對(duì)染色體異常攜帶者家庭進(jìn)行孕育指導(dǎo)時(shí)，建議及時(shí)進(jìn)行產(chǎn)前診斷，防止染色體異常的患兒出生，以降低出生缺陷，達(dá)到優(yōu)生優(yōu)育的目的。

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