有機(jī)質(zhì)譜應(yīng)用于抗體類藥物結(jié)構(gòu)解析的研究進(jìn)展

趙永強(qiáng)，劉 鋒，桑志紅，李 梅，王 娜，何 昆

(國(guó)家生物醫(yī)學(xué)分析中心，北京 100850)

有機(jī)質(zhì)譜應(yīng)用于抗體類藥物結(jié)構(gòu)解析的研究進(jìn)展

趙永強(qiáng)，劉 鋒，桑志紅，李 梅，王 娜，何 昆*

(國(guó)家生物醫(yī)學(xué)分析中心，北京 100850)

抗體類藥物因其靶向性，能夠直接與目標(biāo)特異結(jié)合，并且藥物副作用小、毒性低，在臨床上具有廣闊的應(yīng)用前景。質(zhì)譜(MS)以其快速、高靈敏度和高分辨率成為抗體藥物結(jié)構(gòu)分析的重要手段，為藥物的質(zhì)量控制和安全性方面提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支撐。該文針對(duì)快速發(fā)展的有機(jī)質(zhì)譜技術(shù)在抗體類藥物的氨基酸序列、高級(jí)結(jié)構(gòu)以及修飾鑒定方面的應(yīng)用進(jìn)行了綜述。

有機(jī)質(zhì)譜；抗體；結(jié)構(gòu)解析;綜述

近年來(lái)，單克隆抗體藥物進(jìn)行靶向治療得到廣泛應(yīng)用，并已成為一種普遍的生物治療手段，現(xiàn)今美國(guó)FDA已經(jīng)批準(zhǔn)了多達(dá)20種抗體藥物上市，同時(shí)，近300種單克隆抗體藥物正處于研發(fā)階段[1]。2014～2019年間，美國(guó)有4個(gè)、歐洲及其他國(guó)家有6個(gè)單抗產(chǎn)品專利到期，國(guó)內(nèi)外大批醫(yī)藥廠商瞄準(zhǔn)市場(chǎng)，不斷擴(kuò)大研發(fā)和生產(chǎn)規(guī)模，單克隆抗體的壟斷地位也將動(dòng)搖[2-3]?？贵w及抗體偶聯(lián)藥物的完整分子量約在150 kDa，其復(fù)雜的結(jié)構(gòu)極易導(dǎo)致不均一性，也給抗體藥物的完整解析帶來(lái)極大難度。國(guó)際上，美國(guó)FDA在已發(fā)布的生物仿制藥指導(dǎo)文件中對(duì)抗體完整結(jié)構(gòu)解析做了詳細(xì)闡述；目前，國(guó)內(nèi)仍缺乏明確的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)來(lái)評(píng)價(jià)和約束單抗藥品市場(chǎng)。有機(jī)質(zhì)譜作為蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析的強(qiáng)有力檢測(cè)手段，應(yīng)用CID/ETD/HCD等[4-6]技術(shù)依據(jù)不同的離子碎裂方式，使鳥(niǎo)槍法鑒定氨基酸序列的技術(shù)在蛋白質(zhì)領(lǐng)域不斷發(fā)展和完善，已成為單抗藥物及其仿制藥結(jié)構(gòu)鑒定的必備工具。

1 抗體類生物大分子完整分子量及氨基酸序列分析的研究

20世紀(jì)80年代以來(lái)，軟電離技術(shù)成為有機(jī)質(zhì)譜的強(qiáng)大助力，尤其是基質(zhì)輔助激光解吸附電離(MALDI)和電噴霧電離(ESI)在大分子蛋白檢測(cè)中發(fā)揮了重大作用[7]。MALDI-TOF-MS產(chǎn)生單電荷離子，反射模式下檢測(cè)范圍為500～5 000 Da，線性模式一般檢測(cè)>5 000 Da，同時(shí)隨著檢測(cè)蛋白分子量的增加，會(huì)表現(xiàn)出質(zhì)量準(zhǔn)確度和分辨率降低的情況，使峰寬和峰形無(wú)法達(dá)到滿意的效果[8]。ESI-MS產(chǎn)生多電荷離子，譜圖結(jié)果較單電荷離子復(fù)雜，但彌補(bǔ)了檢測(cè)范圍的不足，原始數(shù)據(jù)可通過(guò)軟件去卷積處理[9]。Shin等[10]應(yīng)用LC-MS方法對(duì)曲妥珠單抗完整蛋白及其亞基的相對(duì)分子量進(jìn)行了檢測(cè)，從完整蛋白水平獲得了曲妥珠單抗的氨基酸全序列確認(rèn)，并使氨基酸序列覆蓋率達(dá)到100%；同時(shí)，糖基化分析是通過(guò)對(duì)游離的N-連接寡糖進(jìn)行2-AB熒光標(biāo)記后再用LC-FLR-MS方法進(jìn)行檢測(cè)，最后對(duì)糖基化修飾進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析和確認(rèn)，聯(lián)合使用這些分析方法，并同時(shí)比對(duì)了3批不同批號(hào)和不同工藝的曲妥珠單抗的異同，能夠有效地對(duì)抗體類藥物進(jìn)行日常質(zhì)量檢測(cè)和深度表征,同時(shí)有效控制抗體藥物的質(zhì)量，從而對(duì)曲妥珠單抗藥物的質(zhì)量控制提供了依據(jù),為病人提供了安全可靠的生物治療藥品。

單克隆抗體的分子量大，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，目前認(rèn)為仿制藥必須與原研藥的氨基酸序列一致才可稱為仿制藥，否則會(huì)被認(rèn)為是一種新的抗體藥物，同時(shí)仿制藥需要保證安全性和有效性，要達(dá)到兩個(gè)基準(zhǔn)，對(duì)醫(yī)藥廠商而言非常具有挑戰(zhàn)性[11-12]。目前，最常用的方法是采用電噴霧離子化，必要時(shí)使用離子淌度等技術(shù)增加分離效果，以及LC-MSE技術(shù)全面展示抗體完整的序列結(jié)構(gòu)[13-14]。Xie等[15]對(duì)候選生物仿制藥IgG1單克隆抗體的完整分子量、氨基酸序列，以及翻譯后修飾進(jìn)行識(shí)別和量化，利用肽圖譜和數(shù)據(jù)獨(dú)立采集的液質(zhì)中交替的低和高碰撞能量掃描模式LC-MSE，精確鑒定生物仿制藥和創(chuàng)新藥中幾個(gè)氨基酸殘基的差異在重鏈序列之間。這些結(jié)果表明，準(zhǔn)確完整的質(zhì)量測(cè)定、糖譜分析和LC-MSE肽譜可作為一套常規(guī)工具，用于監(jiān)測(cè)單克隆抗體候選生物仿制藥和創(chuàng)新藥的質(zhì)量。

2 單克隆抗體藥物高級(jí)結(jié)構(gòu)的研究

單克隆抗體等蛋白質(zhì)藥物療效的發(fā)揮取決于蛋白的高級(jí)結(jié)構(gòu)，高級(jí)結(jié)構(gòu)的變化可能會(huì)導(dǎo)致藥物在治療時(shí)產(chǎn)生非預(yù)期的有效性和安全性隱患[16-17]。X-射線晶體衍射[18]和核磁共振[19]是研究蛋白高級(jí)結(jié)構(gòu)的傳統(tǒng)方法，但實(shí)際上，這兩種方法均有局限性，對(duì)于單克隆抗體這類分子量大、空間結(jié)構(gòu)復(fù)雜的藥物并不能直觀完整地反映蛋白結(jié)構(gòu)。

近年來(lái)，質(zhì)譜技術(shù)在研究蛋白高級(jí)結(jié)構(gòu)方面進(jìn)入了新的領(lǐng)域，氫氘交換-質(zhì)譜聯(lián)用(HDX-MS)成為研究單克隆抗體等生物藥高級(jí)結(jié)構(gòu)的有力工具[20-21]。其原理是將待測(cè)樣本浸入重水溶液中，蛋白的氫原子與重水的氘原子發(fā)生轉(zhuǎn)換，根據(jù)交換速率的快慢對(duì)蛋白的空間構(gòu)象進(jìn)行評(píng)價(jià)。HDX主要應(yīng)用于蛋白質(zhì)構(gòu)象的研究，修飾后構(gòu)象動(dòng)力學(xué)，折疊/重折疊，蛋白質(zhì)-配體/蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用和蛋白聚集[22]。Mo等[23]應(yīng)用HDX-MS技術(shù)驗(yàn)證了蛋氨酸的氧化對(duì)IgG抗體生物學(xué)功能的影響，并提供了非常有價(jià)值的信息。這一重要研究可以協(xié)助(CQAs)評(píng)估抗體的治療。同時(shí)，HDX-MS還可以檢測(cè)到低含量的蛋氨酸氧化引起的局部構(gòu)象變化。對(duì)于單克隆抗體，更多的是在多肽水平-HDX進(jìn)行高級(jí)結(jié)構(gòu)可比性研究，比對(duì)并定位原研藥與Biosimilar、Biobetter之間高級(jí)結(jié)構(gòu)的差異[24-25]。 Pan等[26]基于HDX-MS結(jié)合蛋白水平Top-down技術(shù)與多肽水平Bottom-up聯(lián)用技術(shù)，使殘基信息與亞基級(jí)信息形成互補(bǔ)，完整解析了2批次貝伐珠單抗及1批次原研藥結(jié)構(gòu)的一致性，結(jié)果顯示重鏈覆蓋率87%，輕鏈覆蓋率74%，并且HDX對(duì)重、輕鏈檢測(cè)數(shù)據(jù)顯示3批樣品的高級(jí)結(jié)構(gòu)無(wú)明顯差異。該方法也成為目前抗體藥物高級(jí)結(jié)構(gòu)檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)流程，將抽象的概念轉(zhuǎn)化成數(shù)據(jù)信息既體現(xiàn)了其廣泛的應(yīng)用范圍，也在空間結(jié)構(gòu)細(xì)微差別的解析中體現(xiàn)了直觀性和準(zhǔn)確性。

3 抗體藥物糖基化修飾的研究

單抗藥物藥效的發(fā)揮、穩(wěn)定性以及免疫原性，很大程度上與翻譯后修飾相關(guān)，尤其是蛋白N-糖譜在抗體藥物治療中顯著影響單克隆抗體的生物學(xué)功能，并在很大程度上取決于宿主細(xì)胞的基因型和培養(yǎng)條件，因此會(huì)導(dǎo)致N-糖基化的不均一性[27-28]。作為抗體藥物最主要的翻譯后修飾，變異形式主要有脫巖藻糖化、唾液酸化、末端半乳糖的數(shù)目不同等[7]。由于單抗藥物在生產(chǎn)過(guò)程中存在多種糖型及修飾位點(diǎn)的變化，導(dǎo)致不同批次生產(chǎn)的抗體可能會(huì)有不同的藥效及體內(nèi)穩(wěn)定性。因此，糖型解析也成為抗體藥物質(zhì)量控制的一個(gè)至關(guān)重要的檢測(cè)項(xiàng)目。

MALDI-TOF-MS被應(yīng)用于早期糖型的解析中，Raquel等[29]使用正離子模式的MALDI-TOF 以及負(fù)離子模式ESI-MS 對(duì)經(jīng)過(guò)PNGase-F釋放的N-糖基進(jìn)行了分析，通過(guò)比對(duì)脫糖前后抗體的肽質(zhì)量指紋譜差異，獲得了尼妥珠單抗的N-糖鏈結(jié)構(gòu)信息。但深入研究糖結(jié)構(gòu)及糖含量信息，則需依靠液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)。經(jīng)典方法是進(jìn)行2-AB熒光標(biāo)記，通過(guò)熒光檢測(cè)器(FLR)進(jìn)行分析[30]。Shang等[31]開(kāi)發(fā)了一個(gè)高效表征單克隆抗體及相關(guān)糖蛋白的方法，應(yīng)用傳統(tǒng)的PNGaes F釋放糖基，2-AB標(biāo)記，基于Q-TOF與HILIC技術(shù)，采用三氟乙酸代替甲酸銨為流動(dòng)相條件，可實(shí)現(xiàn)高分辨率和高靈敏度鑒定低豐度N-糖基結(jié)構(gòu)。Jefferis等[32]詳細(xì)報(bào)道了重組抗體的糖基化的重要性，抗體藥物屬于生物大分子藥物,其生物功能的發(fā)揮離不開(kāi)復(fù)雜的翻譯后修飾，糖基化修飾作為抗體最重要的翻譯后修飾,對(duì)于抗體的生物活性和體內(nèi)代謝有著重要的作用。Huang等[33]研究了液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)可變區(qū)域糖基化對(duì)抗體清除率的影響，發(fā)現(xiàn)20%的人免疫球蛋白的N-糖基化位點(diǎn)均位于C(H)2區(qū)域，利用LC-MS技術(shù)結(jié)合多種酶切的方法，明確了糖修飾的具體位置是在CDR2的重鏈可變位置，同時(shí)證明了雙鏈低聚糖缺乏，半乳糖的清除率比在FV域其他結(jié)構(gòu)稍快。2015年，Waters公司研發(fā)了RapiFluor-MS技術(shù)，替換2-AB熒光試劑，并將前處理時(shí)間縮短至30 min，且標(biāo)記效率以及熒光信號(hào)質(zhì)量均有顯著提高。

抗體偶聯(lián)藥物(ADCs)是近年來(lái)抗腫瘤抗體藥物研發(fā)的熱點(diǎn)和潮流[34-35]。作為一種特別的翻譯后修飾類型，ADC藥物是將小分子細(xì)胞毒性物質(zhì)通過(guò)中間連接體(MCC)偶聯(lián)到單克隆抗體特定氨基酸殘基上，如半胱氨酸、賴氨酸側(cè)鏈氨基，通過(guò)抗體的靶向作用將細(xì)胞毒性物質(zhì)作用到靶標(biāo)，達(dá)到治療作用。目前有超過(guò)40種臨床用ADC藥物處于研發(fā)階段[36]。以獲得FDA批準(zhǔn)的治療HER2陽(yáng)性轉(zhuǎn)移性乳腺癌藥物Trastuzumab emtansine(T-DM1)[37]為例，小分子藥物美登素(DM1)與連接體(MCC)由1個(gè)硫醚結(jié)構(gòu)連接，形成1個(gè)修飾基團(tuán)，分子量約為956.36 Da。而通常的ADC藥物含有0～8個(gè)不等的小分子藥物基團(tuán)[38]。目前關(guān)于ADC藥物結(jié)構(gòu)解析的文獻(xiàn)報(bào)道，更多是關(guān)注不同偶聯(lián)異構(gòu)體的完整出峰以及平均藥物與抗體的偶聯(lián)比例(DAR)。Marcoux等[39]應(yīng)用原位離子淌度質(zhì)譜(native IM-MS)準(zhǔn)確解析了T-DM1 平均偶聯(lián)藥物比例及不同異構(gòu)體的分布情況，從完整蛋白水平反映出該抗體偶聯(lián)藥物的結(jié)構(gòu)信息，為抗體偶聯(lián)藥物的結(jié)構(gòu)解析提供了技術(shù)手段。Chen等[40]對(duì)T-DM1及其仿制藥完整蛋白(DAR)進(jìn)行了準(zhǔn)確解析，還對(duì)92個(gè)偶聯(lián)位點(diǎn)(88個(gè)賴氨酸位點(diǎn)和4個(gè)N端位點(diǎn))進(jìn)行了全面解析，實(shí)際鑒定到82個(gè)偶聯(lián)位點(diǎn)，同時(shí)比對(duì)了在不同結(jié)構(gòu)域中賴氨酸偶聯(lián)位點(diǎn)的相對(duì)強(qiáng)度，由此反映了偶聯(lián)比率的差異。該結(jié)果為抗體偶聯(lián)藥物的深入研究指出了方向，并建立了評(píng)價(jià)指標(biāo)。

4 展 望

單克隆抗體等生物大分子不同于常規(guī)生物藥，其分子量巨大，氨基酸存在突變的幾率高，并且高級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜、糖基化形式不均一，尤其是抗體偶聯(lián)藥物制備工藝復(fù)雜，增加了結(jié)構(gòu)解析的難度，諸如小分子藥物偶聯(lián)位點(diǎn)的完整解析，游離小分子藥物痕量檢測(cè)等均難以依靠傳統(tǒng)或單一的檢測(cè)方法來(lái)實(shí)現(xiàn)。同時(shí)，出于對(duì)抗體生物藥安全性以及產(chǎn)業(yè)保護(hù)的考慮，國(guó)內(nèi)外藥監(jiān)部門近年來(lái)也在不斷完善并提升抗體藥物質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。Chen等[40]聯(lián)合中國(guó)食品藥品檢定研究院建立了基于ADC藥物 Kadcyla?和 Adcetris?原研藥與仿制藥結(jié)構(gòu)確證的方法，從藥物完整分子量、一級(jí)結(jié)構(gòu)以及偶聯(lián)藥物修飾等方面進(jìn)行了一致性評(píng)價(jià)，綜合解析了原研藥與仿制藥細(xì)微結(jié)構(gòu)的異同?？傊瑸榱藨?yīng)對(duì)日益擴(kuò)大的抗體藥物市場(chǎng)以及對(duì)藥物質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的不斷提高，確保臨床用藥的安全性，建立系統(tǒng)的分析平臺(tái)以及形成一套基于LC-MS/MS的多項(xiàng)目綜合解析體系已成為抗體結(jié)構(gòu)解析的必然趨勢(shì)。

[1] Li H，Ortiz R，Tran L，Hall M，Spahr C，Walker K，Laudemann J，Miller S，Salimi-Moosavi H，Lee J W.Anal.Chem.，2012，84(3):1267-1273.

[2] de Ridder L，Waterman M，Turner D，Bronsky J，Hauer A C，Dias J A，Strisciuglio C，Ruemmele F M，Levine A，Lionetti P.J.Pediatr.Gastroenterol.Nutr.，2015，61(4):503-508.

[3] Teixeira F V，Kotze P G，Dami?o A O，Miszputen S J.Arq.Gastroenterol.，2015,52(1):76-80.

[4] Chi H，Sun R X，Yang B，Song C Q，Wang L H，Liu C，F(xiàn)u Y，Yuan Z F，Wang H P，He S M，Dong M Q.J.ProteomeRes.，2010，9(5):2713-2724.

[5] Guthals A，Clauser K R，Bandeira N.Mol.CellProteomics，2012，11(10)：1084-1096.

[6] Tyshchuk O，V?lger H R，F(xiàn)errara C，Bulau P，Koll H，M?lh?j M.MAbs，2016，23:1-10.

[7] Mao X L，Liu Y.Med.Inf.(毛曉莉，劉煜.臨床醫(yī)學(xué))，2015，28(23):298.

[8] Zhuo H Q，Huang L，F(xiàn)eng L J，Huang H Q.Anal.Biochem.，2008，378(2):151-157.

[9] Gorshkov V，Hotta S Y，Verano-Braga T，Kjeldsen F.Proteomics，2016，16(18):2470-2479.

[10] Shin H，Chakraborty A，Yu Y Q，Chen X，Sun Q L，Berger S，Chen W B，Song L K.Chin.J.NewDrugs( Henry Shin，Asish Chakraborty，于迎慶，陳熙，孫慶龍，Scott Berger，陳維斌，宋蘭坤.中國(guó)新藥雜志)，2014，23(4):418-426.

[11] Jia W，Chen X，Zhou C X，Song L K.Chin.Biotechnol.(賈偉,陳熙,周春喜,宋蘭坤.中國(guó)生物工程雜志)，2012，32(10)：93-98.

[12] Feagan B G，Choquette D，Ghosh S，Gladman D D，Ho V，Meibohm B，Zou G，Xu Z，Shankar G，Sealey D C，Russell A S.Biologicals，2014，42(4):177-183.

[13] Wegdam W，Argmann C A，Kramer G，Vissers J P，Buist M R，Kenter G G，Aerts J M，Meijer D，Moerland P D.PLoSOne.，2014，9(9):e108046:1-12.

[14] Mbeunkui F，Goshe M B.Proteomics，2011,11(5):898-911.

[15] Xie H，Chakraborty A，Ahn J，Yu Y Q，Dakshinamoorthy D P，Gilar M，Chen W，Skilton S J，Mazzeo J R.MAbs，2010，2(4)：379-394.

[16] Valliere-Douglass J F，Hengel S M，Pan L Y.Mol.Pharm.，2015,12:1774-1783.

[17] Joubert M K，Hokom M，Eakin C，Zhou L，Deshpande M，Baker M P，Goletz T J，Kerwin B A，Chirmule N，Narhi L O，Jawa V.J.Biol.Chem.，2012，287:25266-25279.

[18] Saphire E O，Parren P W，Pantophlet R，Zwick M B，Morris G M，Rudd P M，Dwek R A，Stanfield R L，Burton D R，Wilson I A.Science，2001，293:1155-1159.

[19] Kennedy S D.MethodsMol.Biol.，2016，1490:253-264.

[20] Deng B，Lento C，Wilson D J.Anal.Chim.Acta，2016，940：8-20.

[21] Lee J J，Park Y S，Lee K J.Arch.Pharm.Res.，2015，38(10):1737-1745.

[22] Wei H，Mo J，Tao L，Russell R J，Tymiak A A，Chen G，Iacob R E，Engen J R.DrugDiscov.Today，2014,19(1)：95-102.

[23] Mo J，Yan Q，So C K，Soden T，Lewis M J，Hu P.Anal.Chem.，2016，88(19):9495-9502.

[24] Beck A，Debaene F，Diemer H，Wagner-Rousset E，Colas O，Van Dorsselaer A，Cianférani S.J.MassSpectrom.，2015，50(2):285-297.

[25] Visser J，F(xiàn)euerstein I，Stangler T，Schmiederer T，F(xiàn)ritsch C，Schiestl M.BioDrugs，2013，27(5):495-507.

[26] Pan J，Zhang S，Borchers C H.Biochim.Biophys.Acta，2016，1864(12):1801-1808.

[27] Higel F，Seidl A，S?rgel F，F(xiàn)riess W.Eur.J.Pharm.Biopharm.，2016，100:94-100.

[28] Sha S，Agarabi C，Brorson K，Lee D Y，Yoon S.TrendsBiotechnol.，2016，34(10):835-846.

[29] Raquel M，Calvo L，Vallin A，Rudd P M，Harvey D J，Cremata J A.Biologicals，2012，40(4):288-298.

[30] Kozak R P，Tortosa C B，F(xiàn)ernandes D L，Spencer D I.Anal.Biochem.，2015，486:38-40.

[31] Shang T Q，Saati A，Toler K N，Mo J，Li H，Matlosz T，Lin X，Schenk J，Ng C K，Duffy T，Porter T J，Rouse J C.J.Pharm.Sci.，2014，103(7):1967-1978.

[32] Jefferis R.Biotechnol.Prog.，2005，21:11-16.

[33] Huang L，Biolsi S，Bales K R，Kuchibhotla U.Anal.Biochem.，2006，349:197-207.

[34] He Y，Zhang J，Li Z K，Wang M.ActaPharm.Sin.，2012,47(10):1269-1274.

[35] Thomas A，Teicher B A，Hassan R.LancetOncol.，2016，17(6)：e254-262.

[36] Bakhtiar R.Biotechnol.Lett.，2016，38(10):1655-1664.

[37] Yao X，Jiang J，Wang X，Huang C，Li D，Xie K，Xu Q，Li H，Li Z，Lou L，F(xiàn)ang J.BreastCancerRes.Treat.，2015,153(1):123-133.

[38] Luo Q，Chung H H，Borths C，Janson M，Wen J，Joubert M K，Wypych J.Anal.Chem.，2016，88(1):695-702.

[39] Marcoux J，Champion T，Colas O，Wagner-Rousset E，Corva?a N，Van Dorsselaer A，Beck A，Cianférani S.ProteinSci.，2015，24(8):1210-1223.

[40] Chen L，Wang L，Shion H，Yu C，Yu Y Q，Zhu L，Li M，Chen W，Gao K.MAbs,2016，8(7):1210-1223.

Research Progress on Application of Organic Mass Spectrometry in Structural Analysis of Antibody Drugs

ZHAO Yong-qiang，LIU Feng，SANG Zhi-hong，LI Mei，WANG Na，HE Kun*

(National Center of Biomedical Analysis，Beijing 100850，China)

With their targeting abilities，small sid-effects and low toxicity,antibody drugs could be directly combined with target specific，and they have broad application prospects in clinical practice.With its rapidness，high sensitivity and resolution，mass spectrometry(MS) has become an important means to analyze the structure of antibody，which provides a strong technical support for quality control and safety of the drug.In this paper，the rapid application development of organic mass spectrometry in the consistency of the amino acid sequence of antibody class，advanced structure and post translational modification(PTMs) are reviewed .

organic mass spectrometry；antibody；structural analysis;review

2016-09-28；

2016-11-09

新藥創(chuàng)制重大專項(xiàng)(2014ZX09304311-001)；國(guó)家科技支撐計(jì)劃(2015BAK45B01)；科技基礎(chǔ)性工作(創(chuàng)新方法)專項(xiàng)(2012IM030300)

10.3969/j.issn.1004-4957.2017.02.008

O657.63；O629.7

A

1004-4957(2017)02-0201-04

*通訊作者：何 昆，博士，副研究員，研究方向：藥物分析、蛋白質(zhì)組學(xué)，Tel：010-66930306，E-mail：hk@proteomics.cn