奶牛乳頭高效藥浴消毒劑殺菌效果試驗

文∕周慶民 侯美如 馮萬宇 徐 馨 黃 健

（黑龍江省獸醫(yī)科學研究所）

奶牛擠奶后用消毒劑對乳頭進行消毒是生產(chǎn)中預防奶牛乳房炎發(fā)生的主要方法。奶牛乳頭藥浴消毒劑的質(zhì)量對殺滅病原微生物的效果起到最為關(guān)鍵的作用。但奶牛的生活條件、乳頭生理位置和特殊生理功能，決定了奶牛乳頭始終處于十分復雜的環(huán)境中，這就要求乳頭的藥浴消毒劑必須具有廣譜殺菌、殺菌速度快、安全可靠的特點。為了檢驗奶牛乳頭高效藥浴消毒劑的消毒效果，本文對其進行了殺菌速度和載體浸泡消毒效果試驗。

1 材料與方法

1.1 材料

硫代硫酸鈉、無水磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、鮮血瓊脂培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基；奶牛乳頭高效藥浴消毒劑（由本研究室研制）；菌種（金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、大腸桿菌）由本研究室分離培養(yǎng)。

1.2 儀器設(shè)備

電子天平、超凈臺、高壓滅菌器、干燥箱、恒溫箱、顯微鏡。

1.3 方法

1.3.1 培養(yǎng)基的制作

參照《獸醫(yī)微生物學實驗指導（第2版）》[1]制作所有液體培養(yǎng)基和普通平板培養(yǎng)基。

1.3.2 硫代硫酸鈉中和劑的制備

稱取無水磷酸氫二鈉 2.83 g、磷酸二氫鉀1.36 g，加蒸餾水至1 000 mL，待完全溶解后，調(diào)pH值到7.2～7.4，于121 ℃高壓滅菌器中滅菌20 min，配制成0.03 mol/L、pH值為7.2～7.4的磷酸鹽緩沖液。

取1.0 g硫代硫酸鈉，溶解于100 mL 0.03 mol/L、pH值7.2～7.4的磷酸鹽緩沖液中，于121 ℃高壓滅菌器滅菌15 min，制備成1.0%的硫代硫酸鈉中和劑。

1.3.3 試驗菌液的制備

將金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、大腸桿菌分別接種到營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h后，再將金黃色葡萄球菌接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、無乳鏈球菌和停乳鏈球菌接種至鮮血瓊脂培養(yǎng)基，大腸桿菌接種到LB培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)18～24 h，備用。

1.3.4 殺菌速度試驗

試驗分為4組，分別為金黃色葡萄球菌殺滅試驗組、無乳鏈球菌殺滅試驗組、停乳鏈球菌殺滅試驗組、大腸桿菌殺滅試驗組，每組設(shè)6 個反應(yīng)管，每組每管分別加入1 mL相應(yīng)的菌液，隨即加入5 mL奶牛乳頭高效藥浴消毒劑（邊加入邊搖勻）。6 個管依次在加入奶牛乳頭高效藥浴消毒劑5、10、15、20、25、30 s時，各取1 mL加入9 mL1.0%的硫代硫酸鈉中和劑，搖勻，中和10 min，取出1 mL加入9 mL相應(yīng)的液體培養(yǎng)基，搖勻后放入恒溫箱37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察各管中細菌的生長情況。

1.3.5 載體浸泡消毒試驗

選擇大小為26 mm×76 mm的長方形載玻片24 片為載體，首先將載玻片放在含洗滌劑的水中煮沸30 min，然后用自來水沖洗干凈，再用蒸餾水煮沸10 min，再用蒸餾水漂洗至pH值呈中性，晾干、單片包裝，于恒溫干燥箱160 ℃干熱滅菌2 h，備用。分別取金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、大腸桿菌液體培養(yǎng)物0.1 mL（含菌量約106個）均勻涂抹在滅菌的載玻片上，每種細菌涂抹6 片，放入恒溫箱37 ℃培養(yǎng)1 h，取出放入室溫的奶牛乳頭高效藥浴消毒劑中，依次作用5、10、15、20、25、30 s；取出放入1.0%的硫代硫酸鈉中和劑中，作用10 min；取出放入液體培養(yǎng)基中，于恒溫箱37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察細菌生長情況。

2 結(jié)果

2.1 殺菌速度試驗

從表1可以看出，奶牛乳頭高效藥浴消毒劑在10 s即可殺滅懸液中的金黃色葡萄球菌和大腸桿菌，在15 s殺滅懸液中的無乳鏈球菌和停乳鏈球菌，15 s可殺滅全部懸液細菌。

表1 不同消毒時間消毒劑對懸液細菌作用情況

2.2 載體浸泡消毒試驗

從表2可以看出，奶牛乳頭高效藥浴消毒劑對載體金黃色葡萄球菌在10 s即可殺滅，對載體無乳鏈球菌、停乳鏈球菌和大腸桿菌在15 s殺滅，對載體細菌15 s即可全部殺滅。

表2 不同消毒時間消毒劑對載體細菌作用情況

3 分析與討論

3.1 奶牛乳頭高效藥浴消毒劑是用目前臨床常用的碘制劑研制而成的，含有碘的激活劑，可激活碘的活性，快速增加消毒劑中有效碘的含量，提高有效碘的濃度，增強對病原微生物的殺滅能力，效果快速而徹底。

3.2 奶牛乳房炎發(fā)病原因復雜，但90%以上是由外源性病原微生物通過乳頭管口感染引起的，通過乳頭藥浴可以大大減少乳頭上的病原微生物，盡可能地消除傳染源，有效地預防奶牛乳房炎的發(fā)生，因此，乳頭藥浴消毒劑在使用安全的基礎(chǔ)上，必須殺菌速度快、殺菌譜廣，才能達到理想效果。本試驗表明，奶牛乳頭高效藥浴消毒劑無論是懸液殺菌試驗，還是載物殺菌試驗，15 s即可全部殺滅引起奶牛乳房炎的主要細菌，殺菌率達到100%，2種試驗效果基本一致，能夠達到奶牛乳頭藥浴高效消毒的目的。

[1]姚火春.獸醫(yī)微生物學實驗指導（第二版）.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2012.