2006～2012年院內感染金黃色葡萄球菌耐藥性監(jiān)測及同源性分析＊

王 震，施 瑜，曹珍娣，印夏微（江蘇省鎮(zhèn)江市第二人民醫(yī)院：.檢驗科；.感染管理科 000）

近年來，金葡菌的耐藥情況日趨嚴峻，其中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）引起的院內感染尤其嚴重，且呈多重耐藥性［1-2］。本研究對院內感染金黃色葡萄球菌的分布及耐藥性進行統(tǒng)計分析，并采用簡便、經(jīng)濟、快速的隨機引物DNA擴增多態(tài)性（RAPD）技術［3］，對同一病區(qū)或同一時期從患者標本及院感監(jiān)測標本中分離出的金黃色葡萄球菌進行同源性分析，現(xiàn)將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來源2006年1月至2012年12月，收集住院時間大于10d患者的血液、胸腹腔積液、痰、咽拭子、尿液、膽汁、分泌物、靜脈導管等標本中分離的金黃色葡萄球菌82株；與住院患者密切接觸的醫(yī)護人員手以及患者使用過的床單、床頭柜、門把手和醫(yī)療器械等醫(yī)院感染采樣標本中分離的金黃色葡萄球菌39株。

1.2 方法按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》進行細菌分離和培養(yǎng)。藥物敏感性試驗采用Kirby-Bauer瓊脂擴散法，結果解釋依照美國臨床和實驗室標準化協(xié)會（CLSI）2008年標準。

1.3 MRSA檢測頭孢西丁紙片擴散法：在MHA平皿上接種0.5麥氏濁度的細菌懸液，貼30μg頭孢西丁藥敏紙片，35℃培養(yǎng)24h，判斷結果。抑菌圈直徑小于或等于19mm為陽性。質控菌株采用金黃色葡萄球菌ATCC 25923。確認試驗：采用PCR擴增nuc基因和mecA基因，以279bp及310bp處有擴增條帶判為MRSA。具體方法見文獻［4］。

1.4 隨機引物DNA擴增多態(tài)性（RAPD）技術采用ERIC-2引物：5′-AAG TAA GTG ACT GGG GTG AGC G-3′［5］（日本TaKaRa生物技術有限公司合成）。擴增體系：在25μL體系中，10×緩沖液（含Mg2+）2.5μL、dNTP混合液各0.2mmol／L、引物各20pmol、TaqDNA聚合酶2U、模板DNA 3μL。擴增條件：94℃預變性5min；94℃1min，35℃1min，72℃2min，循環(huán)40次；72℃終延伸10min。15g／L瓊脂糖凝膠電泳分離，0.5μg／mL溴乙啶染色，紫外線觀察。

1.5 統(tǒng)計學處理用WHONET 5.3進行數(shù)據(jù)處理，用統(tǒng)計軟件SPSS 10.0進行統(tǒng)計分析。采用χ2檢驗進行統(tǒng)計學分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 分布情況檢出金黃色葡萄球菌121株，臨床科室分布以呼吸科、泌尿外科、普外科為主。臨床標本以呼吸道標本中分離率最高。MRSA檢出率65.29%（79／121）。院感監(jiān)測陽性標本主要來自與患者密切接觸過的醫(yī)護人員手以及患者使用過的床單、床頭柜、門把手和醫(yī)療器械等。見表1、2。

表1 MRSA在臨床標本中的分布［n（%）］

表2 MRSA在醫(yī)院感染采樣標本中的分布

2.2 耐藥性監(jiān)測分離的121株金黃色葡萄球菌除對萬古霉素、替考拉寧100%敏感外，對其他14種常用抗菌藥物表現(xiàn)為不同程度耐藥，耐藥率由高到低依次為氨芐西林、紅霉素、阿奇霉素、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、克林霉素、丁胺卡那、四環(huán)素、氯霉素、氧氟沙星、復方磺胺甲噁唑、米諾環(huán)素、利福平、莫匹羅星，且耐藥率呈逐年上升趨勢，見圖1。MRSA呈多重耐藥性，且MRSA耐藥率明顯大于甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（MSSA），差異有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。

圖1 2006～2012年院內感染121株金黃色葡萄球菌對14種抗菌藥物耐藥率曲線

2.3 RAPD同源性分析對同一病區(qū)或同一時期從患者標本及院感監(jiān)測標本中分離出的21株金黃色葡萄球菌，采用RAPD技術進行基因同源性分析，擴增圖譜見圖2。共分為個型，其中同源性較高的有：Ⅰ型（菌株號為1、6）；Ⅱ型（菌株號為2、3、4、5）；Ⅲ型（菌株號為7、8）；Ⅳ型（菌株號為9、10）；Ⅴ型（菌株號為11、12、17、20）；Ⅵ型（菌株號為13、14、18）；Ⅶ型（菌株號為15、16）；Ⅷ型（菌株號為19、21）。與患者接觸后的醫(yī)護人員手、物體表面及醫(yī)療器械等是引起金黃色葡萄球菌醫(yī)院內傳播的主要原因。

圖2 21株院內感染金黃色葡萄球菌RAPD分型結果

3 討 論

本研究發(fā)現(xiàn)，金黃色葡萄球菌引起的院內感染以呼吸科、泌尿外科、普外科患者為主，以呼吸道標本中分離率最高；對萬古霉素、替考拉寧以外的其他14種抗菌藥物表現(xiàn)為不同程度耐藥，且耐藥率呈逐年上升趨勢；MRSA檢出率為65.29%（79／121），呈多重耐藥性。同源性分析發(fā)現(xiàn)，院感監(jiān)測陽性標本主要來自與患者密切接觸過的醫(yī)護人員手以及患者使用過的床單、床頭柜、門把手和醫(yī)療器械等?；颊?醫(yī)護人員-醫(yī)療器械間的交叉感染，是引起金黃色葡萄球菌醫(yī)院內傳播的主要原因。

由醫(yī)務人員手導致的院內感染不容忽視［6］。目前主要存在以下幾個方面的問題：（1）醫(yī)務人員手衛(wèi)生依從性低，是制約手衛(wèi)生規(guī)范化管理的關鍵問題所在［7］。因此，要提高手衛(wèi)生的效果，必須采取有效措施，強化醫(yī)務人員手衛(wèi)生意識。（2）醫(yī)院應加強手衛(wèi)生規(guī)范的宣傳和培訓，不斷提高醫(yī)務人員對手衛(wèi)生重要性的認知度。（3）醫(yī)院應不斷完善手衛(wèi)生設施，使醫(yī)務人員做到洗手高效、方便易行。（4）積極推廣使用速干型手消毒劑，達到快速、高效的殺菌效果，有利于提高工作效率［8］。

同時，醫(yī)院應嚴格控制抗菌藥物的使用，執(zhí)行消毒隔離措施，加強醫(yī)療器械的使用和消毒管理，方可有效控制醫(yī)院內感染發(fā)生。

［1］馬鳳玲.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的醫(yī)院感染及耐藥性分析［J］.廣西醫(yī)科大學學報，2008，25（6）：930-931.

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［7］孔慶芳，程科萍，葉南圓.醫(yī)務人員手衛(wèi)生知識及其依從性調查分析［J］.現(xiàn)代醫(yī)學，2009，37（3）：246-248.

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