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    肺癌及其癌旁組織、良性病變survivin的表達(dá)意義

    2014-12-13 06:15:52馬建梅西安醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院陜西西安700陜西省西安市第一醫(yī)院陜西西安7000
    安徽醫(yī)藥 2014年2期
    關(guān)鍵詞:胞質(zhì)良性生存率

    馬建梅,陳 承,黃 偉(.西安醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院,陜西西安 700;.陜西省西安市第一醫(yī)院,陜西 西安 7000)

    在我國(guó),肺癌年發(fā)病率為35/100 000,成為我國(guó)的第一大癌癥[1],危害極大。但目前肺癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制尚不明確,研究表明,腫瘤細(xì)胞凋亡抑制可能是肺癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵。survivin是細(xì)胞凋亡抑制蛋白家族的成員,主要表達(dá)于發(fā)育中的胚胎組織,在許多惡性腫瘤組織高表達(dá),但在分化成熟的組織中一般不表達(dá)[2]。本研究通過(guò)檢測(cè)肺癌、癌旁組織、良性病變中survivin表達(dá),探討survivin及其亞細(xì)胞定位表達(dá)與肺癌發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后的關(guān)系。

    1 材料與方法

    1.1 臨床資料 西安交通大學(xué)第二醫(yī)院、西安醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2008年5月—2011年5月手術(shù)獲得的肺癌標(biāo)本60例,其中年齡52~76歲,平均65.5歲;腫瘤最大徑 2~9 cm,平均7 cm;鱗癌32例,腺癌28例;高分化癌16例,中分化癌25例,低分化癌19例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例;腫瘤分期 I期 26例,Ⅱ期21例,III期13例;患者既往均無(wú)腫瘤病史,術(shù)前均未行包括放、化療在內(nèi)的各種抗腫瘤治療。癌旁組織15例,均為距離腫瘤≤2 cm的組織,良性病變10例,包括結(jié)核病變6例,炎性病變4例,正常肺組織5例。肺癌患者手術(shù)后均進(jìn)行了隨訪,隨訪率100%,隨訪起始時(shí)間為手術(shù)治療開(kāi)始日起,觀察終止時(shí)間為2012年12月31日。

    1.2 主要試劑 兔抗人survivin單克隆抗體,免疫組化 SP試劑盒,DAB顯色試劑盒均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。

    1.3 survivin的檢測(cè) 石蠟包埋組織做4 μm厚切片,脫蠟、水化,微波抗原修復(fù),血清封閉;一抗4℃孵育過(guò)夜,生物素標(biāo)記的二抗室溫孵育30 min,滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液30 min,DAB顯色5~10 min,蘇木精復(fù)染后脫水、透明、封片,光鏡下觀察。用 PBS代替一抗作為陰性對(duì)照,采用試劑盒內(nèi)提供的陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

    1.4 結(jié)果判定 兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師閱片,免疫組化染色強(qiáng)度分為弱陽(yáng)性、中等陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性,分別計(jì)為1、2、3分;選取5個(gè)高倍鏡(×400)視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞中陽(yáng)性染色的細(xì)胞數(shù),分為五個(gè)等級(jí)計(jì)分:0分,<5%;1分,5% ~25%;2分,26% ~50%;3分,51% ~ 75%;4分,≥75%;以染色強(qiáng)度分值與陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分值的乘積作為每一例的積分,積分為0者為表達(dá)陰性,積分≥1者為陽(yáng)性。survivin陽(yáng)性染色為胞質(zhì)或胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,survivin及胞質(zhì)表達(dá)的相關(guān)數(shù)據(jù)采用χ2檢驗(yàn),生存率計(jì)算采用Kaplan-Meier法,影響生存率單因素分析采用Logrank檢驗(yàn),用Cox比例危險(xiǎn)度模型作多因素預(yù)后分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    survivin陽(yáng)性染色主要位于細(xì)胞質(zhì),部分位于胞核,部分胞質(zhì)和胞核均出現(xiàn)表達(dá)。見(jiàn)圖1。

    2.1 survivin在肺癌、癌旁組織、良性病變、正常組織的表達(dá) 60例肺癌中survivin陽(yáng)性率為81.6%(49/60),15例癌旁組織為survivin陽(yáng)性率為13.3%(2/15),10例良性病變survivin陽(yáng)性率為0(0/10),5例正常組織survivin陽(yáng)性率為0(0/5),進(jìn)行 χ2檢驗(yàn),χ2=22.7,P <0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,故survivin表達(dá)在肺癌組織高表達(dá),癌旁組織低表達(dá),良性病變及正常組織不表達(dá)。

    2.2 survivin胞質(zhì)表達(dá)與肺癌的關(guān)系 49例survivin表達(dá)陽(yáng)性的肺癌組織中胞質(zhì)陽(yáng)性占69.4%(34/49),胞核陽(yáng)性為14.3%(7/49),胞核胞質(zhì)均陽(yáng)性16.3%(8/49)(將胞核表達(dá)與胞核胞質(zhì)均表達(dá)認(rèn)為非單純胞質(zhì)表達(dá),本文簡(jiǎn)稱“陰性”),胞質(zhì)表達(dá)與肺癌特征的關(guān)系見(jiàn)表1。

    2.3 survivin胞質(zhì)表達(dá)與肺癌患者生存率的關(guān)系 隨訪結(jié)果顯示:34例胞質(zhì)表達(dá)陽(yáng)性的肺癌患者中死亡20例,失訪或存活14例,中位生存時(shí)間(26±5.64)個(gè)月、生存率41.18%;15例胞質(zhì)表達(dá)陰性的患者中死亡10例,失訪和存活5例,其中位生存時(shí)間(13±4.08)個(gè)月、生存率33.33%;Kaplan-Meier生存分析顯示肺癌survivin胞質(zhì)表達(dá)陰性患者的生存率低于胞質(zhì)表達(dá)陽(yáng)性者,log-rank檢驗(yàn)χ2值=4.47,P=0.0346(P <0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2,圖2。

    2.4 肺癌患者預(yù)后的多因素分析 分析肺癌預(yù)后的單因素相關(guān)因子,結(jié)果顯示:其與survivin胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,分期有關(guān),多因素Cox回歸分析結(jié)果顯示:survivin胞質(zhì)表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是反映肺癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,其危險(xiǎn)度分別為18.882、3.546,見(jiàn)表3。

    表1 survivin胞質(zhì)表達(dá)與肺癌的關(guān)系

    表2 Survivin胞質(zhì)表達(dá)在肺癌患者生存時(shí)間的比較

    表3 肺癌預(yù)后多因素Cox分析

    3 討論

    survivin是1997年由耶魯大學(xué)的Ambzosini等用效應(yīng)蛋白酶受體-1(effector cell report-1,ERP-1)的cDNA在人類基因庫(kù)中篩選克隆出的基因。survivin基因定位于不穩(wěn)定性較高的染色體17q25上,由4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子組成,基因全長(zhǎng)15Kb,編碼142個(gè)氨基酸的蛋白,表達(dá)于細(xì)胞周期的G2/M期,定位于細(xì)胞有絲分裂的紡錘體。survivin表達(dá)常見(jiàn)于胚胎發(fā)育過(guò)程,與細(xì)胞分裂和增殖密切相關(guān),其表達(dá)有利于胚胎組織的內(nèi)穩(wěn)和分化[3]。survivin在成人組織的表達(dá)僅見(jiàn)于胸腺、睪丸、分泌期子宮內(nèi)膜,但其特異地高表達(dá)于惡性腫瘤中,研究發(fā)現(xiàn) 34.5%的胃癌,70.7%的乳腺癌,77.8%的膀胱癌,85.5%的非小細(xì)胞肺癌中都有不同程度的survivin mRNA表達(dá)??梢?jiàn),survivin與腫瘤關(guān)系密切,那么,其與癌旁組織或良性病變有何關(guān)系?國(guó)外有學(xué)者發(fā)現(xiàn)胰腺癌細(xì)胞中的survivin表達(dá)率顯著高于胰腺良性腫瘤;國(guó)內(nèi)方艷秋[4]研究表明survivin在肝癌組織、癌旁組織及正常肝組織表達(dá)陽(yáng)性率分別為76.67%,15%,0,本試驗(yàn)對(duì)比了60例肺癌組織、15例癌旁組織、10例良性病變、5例正常肺組織的survivin表達(dá),發(fā)現(xiàn)survivin在肺癌高表達(dá),癌旁組織低表達(dá),良性病變、正常組織未見(jiàn)表達(dá);與相關(guān)報(bào)道相似,故推測(cè)survivin表達(dá)與腫瘤的發(fā)生有關(guān),可作為一種新的腫瘤標(biāo)志物反映腫瘤的惡性程度。

    近年研究發(fā)現(xiàn)survivin具有不同的剪切異構(gòu)體,不同的剪切異構(gòu)體有獨(dú)特的亞細(xì)胞定位和功能。免疫組化染色可以區(qū)分細(xì)胞中不同分布的survivin,而且只有細(xì)胞漿可以和P34結(jié)合,P34-cyclin B磷酸化survivin是 survivin發(fā)揮抑制凋亡作用所必須的[5],細(xì)胞核內(nèi)的 survivin由于不能被 P34磷酸化,所以不能發(fā)揮凋亡抑制作用,從而可能會(huì)誘導(dǎo)凋亡,因此survivin亞細(xì)胞定位與腫瘤有密切的關(guān)系。李永平[6]報(bào)道:在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的乳腺癌原發(fā)灶組織中 survivin細(xì)胞漿內(nèi)表達(dá)陽(yáng)性較細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)陽(yáng)性多;相對(duì)在未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的原發(fā)灶中,survivin主要表達(dá)在細(xì)胞核,且二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而survivin在乳腺癌亞細(xì)胞定位與其它臨床病理特征,如病理分級(jí)、雌激素受體表達(dá)情況或腫瘤大小,均無(wú)顯著關(guān)系;本研究發(fā)現(xiàn)60例肺癌標(biāo)本中,34例呈胞質(zhì)(漿)表達(dá),胞質(zhì)(漿)表達(dá)與年齡、腫瘤大小、分期、分化、組織類型無(wú)關(guān),與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),綜上所述,survivin胞質(zhì)表達(dá)陽(yáng)性與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。國(guó)內(nèi)姚紅[7]報(bào)道侵襲轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致肺癌患者治療失敗和死亡的主要原因之一,因此,survivin胞質(zhì)表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性與肺癌預(yù)后有關(guān)。林輝[8]報(bào)道:肝細(xì)胞癌中survivin胞質(zhì)表達(dá)陽(yáng)性組的生存率明顯低于陰性組,且多因素Cox回歸分析提示survivin基因陽(yáng)性表達(dá)是肝癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。Yao[9]在survivin與胃癌的研究中,發(fā)現(xiàn)survivin分布于胞核和胞漿(質(zhì))中,而且分析表明,核內(nèi)表達(dá)與較好預(yù)后有關(guān),胞漿(質(zhì))陽(yáng)性提示預(yù)后差;本試驗(yàn)檢測(cè)survivin主要在胞質(zhì)(漿)表達(dá),對(duì)比胞質(zhì)(漿)表達(dá)陽(yáng)性與陰性(非單純胞質(zhì)表達(dá)者)者生存率,陰性者生存率低于陽(yáng)性者,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,因此推測(cè)survivin胞質(zhì)(漿)表達(dá)與肺癌預(yù)后有關(guān),且進(jìn)行Cox多因素分析顯示:淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和survivin胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)是肺癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。國(guó)內(nèi)吳志德[10]報(bào)道腫瘤標(biāo)志物可作為治療效果及復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)的指標(biāo)之一。survivin及其胞內(nèi)定位表達(dá)與肺癌治療效果的關(guān)系將是本試驗(yàn)進(jìn)一步深入研究的方向。

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