阿托伐他汀對(duì)局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)保護(hù)作用的研究

夏冬劍

缺血性腦損傷是多種因素、多種機(jī)制共同參與的級(jí)聯(lián)反應(yīng)過程，興奮性氨基酸毒性、鈣超載、自由基反應(yīng)、炎癥和細(xì)胞凋亡是導(dǎo)致缺血性腦損傷的重要環(huán)節(jié)［1］。腦缺血時(shí)，細(xì)胞內(nèi)ATP 合成急劇下降，Na+-K+-ATP 酶障礙，細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載，氧自由基損傷細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，生成大量脂質(zhì)過氧化物，最終產(chǎn)物是丙二醛(MDA)，MDA 增加常?？梢苑从硻C(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度［2］。腦缺血時(shí)體內(nèi)自由基的產(chǎn)生和清除自由基的動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)遭到破壞，使得自由基特別是氧自由基MDA 積聚蓄積，可導(dǎo)致神經(jīng)元興奮、潰變、死亡，產(chǎn)生興奮性毒性，造成廣泛的腦組織病理性損害［3］。本研究從氧自由基的角度來探討阿托伐他汀對(duì)缺血性腦損傷的保護(hù)作用及機(jī)制，為臨床尋找新的腦保護(hù)藥物提供一條途徑。

1.材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用健康SD 大鼠36 只，雌雄各半，體重180～240g(遼寧醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。許可證號(hào):SCXK(遼)200320007。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物級(jí)別:普通級(jí)。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品和試劑 阿托伐他汀:輝瑞制藥有限公司，規(guī)格20mg;SOD 和MDA 試劑盒:南京建成生物工程研究所提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組 36 只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、單純?nèi)毖M、阿托伐他汀預(yù)處理組，每組12 只大鼠。阿托伐他汀預(yù)處理組于術(shù)前灌胃阿托伐他汀，6mg/(kg·d)，共15 天，假手術(shù)組和單純?nèi)毖M分別予以等量生理鹽水，療程和給藥方法相同。制備大鼠局灶性腦缺血模型，每組12 只大鼠于缺血后24 小時(shí)進(jìn)行取材。

1.4 SD 大鼠局灶性腦缺血模型(MCAO)的制備 大鼠局灶性腦缺血模型［4］(middle cerbral artery occlusion，MCAO)手術(shù)前12 小時(shí)禁食不禁水。選用標(biāo)準(zhǔn)大鼠麻醉劑量，以10%水合氯醛3ml/kg，經(jīng)腹腔麻醉，仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上，頸部正中切開皮膚及淺筋膜，鈍性分離胸鎖乳突肌與胸骨舌骨肌，暴露左側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA)和迷走神經(jīng)，頸外動(dòng)脈(ECA)，頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)，ICA 的顱外分支——翼腭動(dòng)脈，在近心端結(jié)扎CCA，在頸總動(dòng)脈分叉處結(jié)扎ECA，結(jié)扎翼腭動(dòng)脈。將ICA 遠(yuǎn)心端用動(dòng)脈夾夾閉，距頸總動(dòng)脈分叉處近心端0.5cm 處將頸總動(dòng)脈剪一小口，插入備好的碳素魚線，去除動(dòng)脈夾，沿著ICA 輕輕向前推進(jìn)，注意不要誤入翼腭動(dòng)脈，當(dāng)?shù)竭_(dá)指定長(zhǎng)度(18mm 左右)時(shí)結(jié)扎ICA 并固定魚線。假手術(shù)組動(dòng)物，除手術(shù)過程中不插入線栓以外，其他過程相同。以青霉素局部消毒后縫合皮膚。術(shù)后保持環(huán)境溫度在25～30℃左右。尤其要注意動(dòng)物頭部的保溫。模型成功的標(biāo)志是大鼠即刻出現(xiàn)右側(cè)Horner 征。

1.5 化學(xué)比色法測(cè)定腦組織勻漿中MDA 含量 MCAO術(shù)后，在固定時(shí)間點(diǎn)分別將大鼠各以10%水合氯醛經(jīng)灌胃深度麻醉后置于解剖臺(tái)上，斷頭，冰盤上經(jīng)枕骨大孔開顱取出腦組織，用冷生理鹽水沖洗除去血液，濾紙拭干，切取左側(cè)大腦頂葉皮質(zhì)約100mg，經(jīng)電子天平稱重后放入勻漿器中，按W/V=1/9 的比例加入預(yù)冷的生理鹽水冰浴下勻漿，制備10%的腦組織勻漿，3500r/min 低溫離心，15 分鐘，取上清液，冰箱-20℃保存?zhèn)溆?，?yán)格按MDA 試劑盒(硫代巴比妥法)檢測(cè)腦組織MDA 含量。

2.結(jié)果

阿托伐他汀對(duì)局灶性腦缺血大鼠腦組織勻漿MDA 含量的影響:與假手術(shù)組相比，單純?nèi)毖M大鼠腦組織勻漿MDA含量升高(P ＜0.05);與單純?nèi)毖M相比，阿托伐他汀大鼠腦組織勻漿MDA 含量降低(P ＜0.05)。結(jié)果見表1。

表1 阿托伐他汀對(duì)局灶性腦缺血大鼠缺血側(cè)腦組織勻漿MDA 含量的影響(nmol/mgprot，x，n=6)

3.討論

細(xì)胞內(nèi)的鈣超載和氧自由基損傷在缺血性腦損傷發(fā)病機(jī)理中占有重要地位［5］。在腦缺血時(shí)，細(xì)胞膜去極化，激活電壓依賴性的鈣通道(VDCCs)，大量Ca2+內(nèi)流，胞漿Ca2+濃度異常升高，細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載通過三個(gè)方面引起自由基的大量產(chǎn)生，即磷脂酶途徑［6］、黃嘌呤氧化酶途徑［7］和一氧化氮合酶途徑［8］，使血清自由基產(chǎn)物MDA 含量增加［9］。

本研究觀察了阿托伐他汀對(duì)局灶性腦缺血24 小時(shí)大鼠腦組織MDA 含量的影響。結(jié)果顯示:與假手術(shù)組比較，單純?nèi)毖M大鼠腦組織MDA 含量升高(P ＜0.05)，與單純?nèi)毖M相比，阿托伐他汀各組大鼠腦組織勻漿MDA 含量降低(P ＜0.05)。表明阿托伐他汀能改善神經(jīng)缺損癥狀，對(duì)腦缺血大鼠具有神經(jīng)保護(hù)作用，其機(jī)制可能與降低大鼠腦組織MDA 含量，減輕腦缺血時(shí)氧自由基的毒性有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)從阿托伐他汀通過降低氧自由基損傷的角度研究阿托伐他汀的神經(jīng)保護(hù)作用，為臨床應(yīng)用阿托伐他汀提供了新的理論依據(jù)。

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