ABCC4和CEA在胃癌中的作用

王曉亮 李紹剛 李賽飛 林寒冰 曹斌校 王 軍

奉化市人民醫(yī)院，浙江奉化 315500

據(jù)Pakin 研究報道，胃癌為高發(fā)生率腫瘤，其死亡例數(shù)排位世界第二[1]。流行病學(xué)顯示胃癌在我國是最常見的惡性腫瘤之一。雖然胃癌的診療技術(shù)有了很大的提高，但是多數(shù)患者就診時處于晚期，總體預(yù)后仍較差。ABCC4(ATP-binding cassette，subfamily C member 4)，是Cole 等研究小細胞肺癌時發(fā)現(xiàn)的耐藥基因家族成員[2]。CEA 為癌胚抗原,屬于CEA 基因家族成員。該研究通過檢測胃癌組織標本中的ABCC4、CEA 表達水平，分析其與胃癌臨床病理因素的相關(guān)性，以期作為評估治療及預(yù)后的標志物，現(xiàn)分析2010年1月—2013年1月間該院收治的100 例胃癌患者的臨床資料，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取在該院收治的胃癌患者100 例。病例特點：男性76例，女性24 例；年齡29～80 歲，平均年齡（61.23±10.4）歲。手術(shù)后病理結(jié)果：pT2 13 例，pT3 51 例，pT4?36 例；淋巴結(jié)pN0 28 例，pN1 21 例，pN2 26 例，pN3 25 例；pTNM 分期：IIA 期7 例，IIB 期23 例，IIIA 期19 例，IIIB 期21 例，V 期8 例；隨訪到2013年7月，隨訪期間死亡20 例。病例納入標準：符合美國癌癥聯(lián)合委員會(AJCC )(第7 版)進展（期）胃癌診斷標準。排除標準：術(shù)前化療，術(shù)前放療，術(shù)前行胸片、腹部CT 檢查肺部、肝臟、腹主動脈旁淋巴結(jié)等遠處轉(zhuǎn)移者。

1.2 試劑與方法

1.2.1 標本 所有組織蠟塊均由該院病理科包埋，每例胃癌組織病理切片均由兩位專家確診。胃粘膜組織取自上述100 例標本距癌組織3 cm 以上的癌旁胃粘膜組織。

1.2.2 試劑 ABCC4 單克隆抗體購自美國SantaCruz 公司，CEA單克隆抗體購自福州邁新生物開發(fā)公司。

1.2.3 方法 采用免疫組織化SP 法。將標本連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟、水化，經(jīng)3%的H2O2消化內(nèi)源性過氧化物酶，高壓抗原修復(fù)，一抗(鼠抗人ABCC4、CEA 單克隆抗體)、二抗(生物素標記)作用后，用DAB 顯色，蘇木素復(fù)染后脫水透明，常規(guī)中性樹膠封固后顯微鏡下觀察。以PBS 代替一抗作陰性對照。

1.3 免疫組化結(jié)果判定

ABCC4 陽性表達定位于細胞膜或漿，呈現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒，取5 個高倍視野，每個視野分別計數(shù)100 個細胞，計算陽性細胞所占百分率。染色結(jié)果根據(jù)陽性細胞占比率分為4 個等級，<5%為0 分；6～25%為1 分；26～50%為2 分，51～75%為3 分；≥76%為4 分。按著色程度計分：未著色為0 分；淡黃色為1 分；棕黃色為2 分，棕褐色為3 分，兩種記分所得分值之和：0～1 分為陰性（0）；2 分為弱陽性（+）；3～4 分為中度陽性（++）；≥5 分為強陽性（+++）。

CEA 陽性表達定位與胞漿，呈現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒，取5個高倍視野，每個視野分別計數(shù)100 個細胞，以切片中陽性數(shù)大于25%為陽性。

1.4 統(tǒng)計方法

所有數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS17.0 軟件進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗。相關(guān)性采用Spearman 法分析。

2 實驗結(jié)果

2.1 ABCC4 在胃癌組織和癌旁胃粘膜組織中的表達

100 例胃癌組織中ABCC4 陽性表達19 例，陽性表達率為19%；100 例癌旁胃粘膜組織中ABCC4 陽性表達1 例,陽性表達率為1%.ABCC4 在胃癌組織中的陽性表達率明顯高于胃粘膜組織中的陽性表達率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.263，P=0.039＜0.05)，見圖1，圖2。

圖1 ABCC4 在胃癌癌旁胃粘膜組織的陰性表達

圖2 ABCC4 在胃癌組織的陽性表達

2.2 ABCC4 在胃癌中的表達與臨床病理因素的關(guān)系

在100 例胃癌標本中，ABCC4 陽性表達率在T2、T3、T4 分別為0%、17.6%、27.8%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；ABCC4 陽性表達率在N0、N1、N2、N3 分別為17.9%、19.0%、23.1%、16.0%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；ABCC4 陽性表達率在胃低分化腺癌、高分化腺癌中分別為11.3%、27.7%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，ABCC4 陽性表達率在是否復(fù)發(fā)中分別為17.4%、19.5%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見圖3，圖4，表1。

圖3 ABCC4 陽性表達率在胃低分化腺癌的陽性表達

圖4 ABCC4 陽性表達率在胃高分化腺癌的陽性表達

2.3 CEA 在胃癌中的表達與臨床病理因素的關(guān)系

在100 例胃癌標本中，CEA 陽性表達率在T2、T3、T4 分別為38.5%、33.3%、36.1%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；CEA 陽性表達率在N0、N1、N2、N3 分別為28.6%、42.9%、26.9%、44.0%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；CEA 陽性表達率在胃高分化腺癌、低分化腺癌中分別為23.4%、45.2%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，CEA陽性表達率在是否復(fù)發(fā)中分別為30.4%、36.4%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表1 ABCC4 與胃癌臨床病理因素的關(guān)系

表2 CEA 與胃癌臨床病理因素的關(guān)系

2.4 胃癌組織中CEA 與ABCC4 表達水平的相關(guān)性分析

在CEA 表達陽性的35 例中，ABCC4 陽性表達占6 例；在CEA 表達陰性65 例中，ABCC4 陽性表達占13 例，Spearman 法分析顯示CEA 和ABCC4 在胃癌組織中表達無相關(guān)性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 胃癌組織中CEA 與ABCC4 表達水平的相關(guān)性分析

3 討論

ABCC4 在人類中定位于染色體13q32，長312kb，含有31 個外顯子[3]，是ABC 家族中結(jié)構(gòu)最簡單的蛋白[4]，廣泛分布于胰腺和腸等多種組織中[5-6]。結(jié)直腸癌、頭頸鱗癌細胞中ABCC4 強表達[7-8]，提示ABCC4 與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。佟柏峰等[9]通過ABCC4 基因RNAi 有效靶點慢病毒(ABCC4siRNA)感染SGC-7901 細胞的研究表明，ABCC4 基因能促進胃癌細胞增殖。本研究通過免疫組化法發(fā)現(xiàn)ABCC4 在胃癌組織中呈高表達，并且陽性率明顯高于癌旁胃粘膜組織，說明了ABCC4 與胃癌的發(fā)生相關(guān)。

此外，該研究還發(fā)現(xiàn)，ABCC4 表達水平與胃癌組織分化程度相關(guān)。在高分化胃癌組織中ABCC4 表達的陽性率明顯高于低分化胃癌，提示隨著胃癌的惡性程度進展,ABCC4 陽性表達率下降。臨床發(fā)現(xiàn)某些分化程度低、惡性程度高的癌癥患者較分化程度高的患者對化療敏感,結(jié)合Yasui 等[10]比較順鉑耐藥腫瘤細胞KK47/cDDP1O 的ABCC4 拷貝數(shù)高于順鉑敏感腫瘤細胞的ABCC4 拷貝數(shù)，提示ABCC4 在癌組織中的陽性表達率增高可能是腫瘤細胞對化療藥物產(chǎn)生耐藥性的原因之一，有待進一步分組研究證實。

CEA 是癌細胞膜上的一種結(jié)構(gòu)蛋白，通常在體內(nèi)濃度極低，但來自內(nèi)胚層組織惡變時，如胃癌、肝癌、肺癌等組織中濃度可升高[1，11]。該研究發(fā)現(xiàn)胃高分化腺癌的CEA 陽性表達率高低于低分化腺癌的陽性表達率，這提示胃癌分化程度越低,CEA 陽性表達率越高，與王海燕等[12]的報道相符。

目前對腫瘤發(fā)生機制的研究已從單一基因發(fā)展到多基因協(xié)同作用和互相調(diào)節(jié)的研究。該研究發(fā)現(xiàn)CEA 和ABCC4 表達水平與胃癌的分化程度有關(guān)，但用Spearman 法分析發(fā)現(xiàn)CEA 和ABCC4 在胃癌組織中的表達無相關(guān)性，這提示CEA 和ABCC4對胃癌細胞的調(diào)控可能沒有協(xié)同作用，可能通過不同的調(diào)控機制起作用。如CEA 可誘導(dǎo)CEACAM1 介導(dǎo)的凋亡途徑[13]，ABCC4可通過參與轉(zhuǎn)運細胞cAMP 和cGMP 等內(nèi)源性分子，調(diào)控細胞內(nèi)的環(huán)核苷酸水平，調(diào)節(jié)細胞凋亡[14]。

綜上所述，該研究通過免疫組化法觀察ABCC4 和CEA 在胃癌組織中的表達水平，分析其與胃癌臨床病理因素的關(guān)系,證明了ABCC4 和CEA 表達與胃癌的分化程度有關(guān)，但二者的調(diào)控沒有協(xié)同作用，聯(lián)合檢測ABCC4 和CEA，可能有助于對胃癌分化程度做出準確的評價。

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