• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    夫西地酸乳膏對小鼠急性皮膚屏障損傷引起炎癥反應(yīng)的抑制作用

    2014-12-09 02:57:33仲少敏郭建美陶榮孫楠吳艷
    中華皮膚科雜志 2014年12期
    關(guān)鍵詞:夫西乳膏屏障

    仲少敏 郭建美 陶榮 孫楠 吳艷

    夫西地酸乳膏對小鼠急性皮膚屏障損傷引起炎癥反應(yīng)的抑制作用

    仲少敏 郭建美 陶榮 孫楠 吳艷

    目的探討夫西地酸乳膏外用對屏障受損的皮膚炎癥反應(yīng)的作用。方法雄性SKH-1無毛小鼠8只,在每只小鼠背部標(biāo)記6個1 cm×2 cm的實(shí)驗(yàn)區(qū),分為6組:分別為空白對照組、屏障破壞組、屏障破壞+夫西地酸組、屏障破壞+基質(zhì)組、屏障完整+夫西地酸組、屏障完整+基質(zhì)組。采用膠帶撕脫法去除角質(zhì)層表皮脂質(zhì),建立急性屏障功能損傷的動物模型。局部外用夫西地酸乳膏或基質(zhì),12 h后對受試部位進(jìn)行菌落采集鑒定,并取皮膚標(biāo)本采用實(shí)時熒光定量PCR檢測皮膚中髓樣分化因子88(MyD88)和白細(xì)胞介素(IL)-1α、IL-6以及表皮抗菌肽S100a8和S100a9的表達(dá)。結(jié)果屏障破壞組MyD88 mRNA表達(dá)(8.3±3.0)為空白對照組(0.8±0.4)的8倍,其IL-1α、IL-6及S100a8和S100a9 mRNA表達(dá)均高于空白對照組。屏障破壞+夫西地酸組與屏障破壞組比較,IL-1α mRNA水平顯著下降(2.8±0.3比20.1±10.0,F=47.11,P<0.01),IL-6水平顯著下調(diào)(1.6±2.3比9.4±4.0,F=16.18,P<0.01),S100a8 mRNA水平顯著下降(1.5±1.4比5.0±1.6,F=59.71,P<0.05),S100a9 mRNA亦顯著下降(1.2±0.7比3.4±1.6,F=21.94,P<0.05)。結(jié)論夫西地酸乳膏外用對于屏障損傷后的炎癥反應(yīng)有明顯的抑制作用,可能為其治療炎癥性皮膚病的作用機(jī)制之一。

    梭鏈孢酸;皮膚屏障;髓樣分化因子88;白細(xì)胞介素類

    夫西地酸是皮膚科最常用的外用抗生素之一,廣泛用于革蘭陽性球菌的皮膚感染,并在痤瘡治療中占有重要的地位[1]。夫西地酸治療痤瘡切實(shí)有效,但是否與其抗菌作用有關(guān)仍然不確定[2-3]。夫西地酸具有抑菌殺菌和抗炎免疫調(diào)節(jié)的雙重作用,系統(tǒng)用藥可通過增強(qiáng)免疫功能消除細(xì)菌所致的組織水腫、滲出、變性、壞死等炎癥反應(yīng)[4-5]。髓樣分化因子(MyD88)是泛在的胞內(nèi)配體蛋白,為白細(xì)胞介素(IL)-1受體/Toll樣受體(TLR)所介導(dǎo)的前炎癥信號通路中的關(guān)鍵銜接分子,在微生物入侵、有害刺激時,激活核因子κB(NF-κB)和其他通路,誘導(dǎo)很多快速反應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄活化,產(chǎn)生多種效應(yīng)分子,如前炎癥細(xì)胞因子、趨化因子、抗菌肽等,在天然免疫和炎癥性皮膚病的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用[6-7]。本研究在屏障破壞的皮膚模型上誘導(dǎo)急性皮膚炎癥反應(yīng)[8-9],在此基礎(chǔ)上外用夫西地酸,觀察其是否具有抗炎活性。

    材料和方法

    一、實(shí)驗(yàn)動物及藥物

    雄性SKH-1無毛小鼠8只,生產(chǎn)自上海市公共衛(wèi)生臨床中心實(shí)驗(yàn)動物部(動物檢疫合格證號:3100054868),6~8周齡,質(zhì)量30 g左右。飼養(yǎng)于清潔級動物飼養(yǎng)室內(nèi)。飼養(yǎng)環(huán)境溫度(24±2)℃,相對濕度(50±10)%,人工照明制造晝夜(晝/夜:12 h/12 h)。以Purina Chow為飼料,自由喂養(yǎng)。購入后適應(yīng)環(huán)境10~15 d后開始試驗(yàn)。測試環(huán)境溫度(24±2)℃,相對濕度45%~55%。2%夫西地酸乳膏及乳膏基質(zhì)由香港澳美制藥廠提供?;|(zhì)配方為凡士林、液體石蠟、西土馬哥及甘油等。

    二、屏障損傷模型建立

    在每只小鼠背部標(biāo)記6個1 cm×2 cm的實(shí)驗(yàn)區(qū),分為6組:分別為空白對照組、屏障完整+夫西地酸組、屏障完整+基質(zhì)組、屏障破壞組、屏障破壞+夫西地酸組、屏障破壞+基質(zhì)組。使用經(jīng)皮水分丟失測試儀Vapometer(Delfin Technologies Ltd,芬蘭)測量小鼠皮膚的基礎(chǔ)經(jīng)表皮失水(TEWL)值,屏障破壞區(qū)域應(yīng)用 scotch?膠帶(3M,美國)以相同壓力和速度反復(fù)粘脫約20次,測量處理局部的TEWL值,使其與基線相比上升超過5倍[9]視為屏障破壞;肉眼可見局部輕微潮紅,少許滲出。隨后局部外用藥物或基質(zhì)1次,12 h后局部菌落鑒定計數(shù)并處死小鼠,剪取各實(shí)驗(yàn)區(qū)全層皮膚組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

    三、菌落鑒定和計數(shù)

    用拭子均勻擦拭皮膚表面,用5 ml滅菌注射用水定量。取25 μl接種至血培養(yǎng)皿,使用接種環(huán)均勻涂抹于血平板上,37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h,進(jìn)行菌落鑒定計數(shù)。

    四、實(shí)時熒光定量PCR

    所采集的皮膚標(biāo)本使用液氮研磨,Omega試劑盒法提取RNA,進(jìn)行cDNA合成,SYBR GREEN MIX(北京全式金生物技術(shù)有限公司)進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR,采用PRIMER3軟件進(jìn)行引物設(shè)計。引物序列見表1所示。mRNA表達(dá)水平用管家基因GAPDH進(jìn)行校正計算相對表達(dá)量,即處理組的目的基因相對于空白對照組的表達(dá)倍數(shù)(2-ΔΔCt),所有實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次。

    五、統(tǒng)計學(xué)分析

    應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行分析。采用重復(fù)測量方差分析對6個處理組MyD88和IL-1α、IL-6以及表皮抗菌肽S100a8和S100a9的表達(dá)進(jìn)行統(tǒng)計分析,組間比較采用Post Hoc檢驗(yàn)中最小顯著差數(shù)法(LSD法)。P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    結(jié) 果

    一、急性屏障破壞12 h的小鼠模型菌落鑒定

    表1 實(shí)時熒光定量PCR所用引物序列

    表2 不同處理組無毛小鼠皮膚中各炎癥因子mRNA的表達(dá)情況(2-ΔΔCt,±s)

    表2 不同處理組無毛小鼠皮膚中各炎癥因子mRNA的表達(dá)情況(2-ΔΔCt,±s)

    注:Myd88:髓樣分化因子88;S100a8:表皮抗菌肽S100a8;S100a9:表皮抗菌肽S100a9。n=8。與屏障破壞組相比較,a:P<0.01;b:P<0.05

    組別 Myd88 白細(xì)胞介素-1α白細(xì)胞介素-6 S100A8 S100A9空白對照組 0.8±0.4 1.3±0.2 1.7±1.5 1.6±1.5 1.2±0.8屏障完整+夫西地酸組 1.4±1.0 3.1±3.2 2.0±1.9 2.4±1.6 1.1±1.2屏障完整+基質(zhì)組 2.0±1.4 2.8±2.7 1.5±1.2 2.8±1.2 0.8±0.2屏障破壞組 8.3±3.0 20.1±10.0 9.4±4.0 5.0±1.6 3.4±1.6屏障破壞+夫西地酸組 3.2±2.3a 2.8±0.3a 1.6±2.3b 1.5±1.4b 1.2±0.7b屏障破壞+基質(zhì)組 6.8±3.5 11.2±4.7 8.2±5.0 4.1±2.0 3.4±1.3 F值 86.94 47.11 16.18 59.71 21.94 P值 0.01 <0.01 <0.05 <0.05 <0.05

    在皮膚屏障功能破壞12 h后,在局部進(jìn)行菌落采集,培養(yǎng)鑒定發(fā)現(xiàn)沒有明顯的菌落,僅有極少量雜菌生長,為金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌,各組間無差別,無臨床感染的證據(jù)。

    二、夫西地酸抑制皮膚屏障破壞引起的MyD88表達(dá)上調(diào)

    皮膚屏障破壞組MyD88 mRNA表達(dá)顯著升高,為空白對照組的8倍(P<0.01),屏障破壞+夫西地酸組明顯低于屏障破壞組(P<0.01),屏障破壞+基質(zhì)組與屏障破壞組比較未見明顯下降(表2)。屏障完整+夫西地酸組與屏障完整+基質(zhì)組無明顯變化。

    三、夫西地酸抑制屏障破壞引起的炎癥因子IL-1α、IL-6的合成

    屏障破壞組IL-1α、IL-6 mRNA表達(dá)顯著升高,相對表達(dá)量分別為空白對照組的20倍(P<0.01)及9倍(P<0.01),屏障破壞 +夫西地酸組明顯低于屏障破壞組(P<0.001),屏障破壞+基質(zhì)組與屏障破壞組比較未見明顯下降(表2)。屏障完整+夫西地酸組與屏障完整+基質(zhì)組無明顯變化。

    四、夫西地酸減少屏障破壞引起的表皮抗菌肽S100a8、S100a9的合成

    皮膚屏障破壞組表皮抗菌肽S100a8、S100a9 mRNA表達(dá)較空白對照組明顯升高,屏障破壞+夫西地酸組明顯低于屏障破壞組(P<0.05)(表2)。屏障完整+夫西地酸組與屏障完整+基質(zhì)組無明顯變化。

    討 論

    在皮膚科夫西地酸外用非常廣泛,因?yàn)槠錅睾蜎]有刺激,滲透性好,非常適合痤瘡等屏障功能受損不能耐受刺激性藥物的炎癥性皮膚病[10]。關(guān)于夫西地酸對皮膚在抗菌作用之外是否具有直接的抗炎作用,目前還沒有直接的證據(jù),因此我們在皮膚屏障損傷模型上觀察其外用對炎癥因子的影響。

    IL-1是最強(qiáng)效的前炎癥因子之一,在角質(zhì)形成細(xì)胞中構(gòu)成性表達(dá),在皮膚損傷、紫外線照射、過敏反應(yīng)和感染時快速釋放,并與IL-1受體I(IL-1RI)結(jié)合,通過募集銜接蛋白MyD88,啟動下游的級聯(lián)放大反應(yīng),激活NF-κB和其他信號通路(包括JNK和MAPK),導(dǎo)致更多的IL-1和其他炎癥介質(zhì)產(chǎn)生,在皮膚的炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)中起非常重要的作用[11]。如果炎癥反應(yīng)過度或者不能達(dá)到平衡就會造成組織破壞,這也是包括痤瘡在內(nèi)的多種感染性、炎癥性和自身免疫性皮膚病的發(fā)病機(jī)制之一[12-13]。本研究發(fā)現(xiàn),急性屏障功能破壞可以引起MyD通路激活,其下游的炎癥因子IL-1α、IL-6合成增加,這一反應(yīng)曾在紫外線損傷和其他的皮膚炎癥狀態(tài)中被反復(fù)觀察到,為急性屏障功能破壞的特征性表現(xiàn)[14],說明膠帶撕脫法成功破壞屏障,并導(dǎo)致炎癥通路的激活,推測MyD88通路可能是其作用的靶點(diǎn)。外用夫西地酸乳膏對炎癥因子IL-1α、IL-6的釋放有顯著的抑制作用,說明夫西地酸有直接的抗炎癥作用,在炎癥損傷過度時可以為組織提供保護(hù)。

    本研究還發(fā)現(xiàn),夫西地酸乳膏可以降低表皮抗菌肽S100A8和S100A9的表達(dá)。在特應(yīng)性皮炎、銀屑病等炎癥性皮膚病中都有S100A8高表達(dá),與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)。另一方面,細(xì)胞外S100A8蛋白還可與Toll樣受體4(TLR4)結(jié)合,通過MyD88通路激活刺激炎癥細(xì)胞釋放炎癥蛋白和炎癥介質(zhì),直接參與炎癥疾病過程并介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)炎癥信號通路和生物學(xué)過程[15]。夫西地酸對S100A8和S100A9的抑制作用可能為其抗炎機(jī)制之一。

    我們另設(shè)基質(zhì)對照,除外了基質(zhì)效應(yīng),并對屏障破壞的皮膚表面進(jìn)行菌落采集鑒定,各組都沒有明顯細(xì)菌感染的證據(jù),說明炎癥反應(yīng)并非細(xì)菌感染所致,對炎癥因子的抑制作用也并非夫西地酸的抗菌作用。夫西地酸對屏障破壞的皮膚具有直接的抗炎作用,這為臨床指導(dǎo)治療和進(jìn)一步明確其作用機(jī)制提供了直接證據(jù)。

    聲明本課題獲2013年中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會“CAIM-澳美中國痤瘡研究基金”資助

    [1]Sch?fer H,Simonsen L.Fusidic acid in dermatology:an updated review[J].Eur J Dermatol,2010,20(1):6-15.

    [2]Khorvash F,Abdi F,Kashani HH.Staphylococcus aureusin acne pathogenesis:a case-control study[J].N Am J Med Sci,2012,4(11):573-576.

    [3]Sommer S,Bojar R,Cunliffe WJ.Investigation of the mechanism of action of 2%fusidic acid lotion in the treatment of acne vulgaris[J].Clin Exp Dermatol,1997,22(5):211-215.

    [4]BendtzenK,DiamantM,F(xiàn)aberV.Fusidicacid,animmunosuppressive drug with functions similar to cyclosporin A[J].Cytokine,1990,2(6):423-429.

    [5]Burkart V,Bellmann K,Hartmann B.Fusidic acid suppresses nitric oxide toxicity in pancreatic islet cells[J].Biochem Pharmacol,1994,48(7):1379-1385.

    [6]Chen H,Jiang Z.The essential adaptors of innate immune signaling[J].Protein Cell,2013,4(1):27-39.

    [7]Lai Y,Gallo RL.Toll-like receptors in skin infections and inflammatory diseases[J].Infect Disord Drug Targets,2008,8(3):144-155.

    [8]Elias PM,F(xiàn)eingold KR.Skin barrier[M].New York:Taylor&Francis,2006:305-313.

    [9]Gao Y,Wang X,Chen S,et al.Acute skin barrier disruption with repeated tape stripping:anin vivomodel for damage skin barrier[J].Skin Res Technol,2013,19(2):162-168.

    [10]Zhao M,G?decke T,Gunn J,et al.Protostane and fusidane triterpenes:a mini-review[J].Molecules,2013,18(4):4054-4080.

    [11]Contassot E,Beer HD,F(xiàn)rench LE.Interleukin-1,inflammasomes,autoinflammation and the skin[J/OL].Swiss Med Wkly,2012,142:w13590[2012-12-28].http://www.smw.ch/index.php?id=smw-2012-13590.

    [12]Henderson C,Goldbach-Mansky R.Monogenic IL-1 mediated autoinflammatory and immunodeficiency syndromes:finding the right balance in response to danger signals[J].Clin Immunol,2010,135(2):210-222.

    [13]Selway JL,Kurczab T,Kealey T,et al.Toll-like receptor 2 activation and comedogenesis:implications for the pathogenesis of acne[J].BMC Dermatol,2013,13:10.

    [14]Lee Y,Kim H,Kim S,et al.Myeloid differentiation factor 88 regulates basal and UV-induced expressions of IL-6 and MMP-1 in human epidermal keratinocytes[J].J Invest Dermatol,2009,129(2):460-467.

    [15]Kerkhoff C,Voss A,Scholzen TE,et al.Novel insights into the role of S100A8/A9 in skin biology[J].Exp Dermatol,2012,21(11):822-826.

    2014-03-09)

    (本文編輯:尚淑賢)

    Inhibitory effect of fusidic acid cream on inflammatory reaction caused by acute skin barrier damage in mice

    Zhong Shaomin,Guo Jianmei,Tao Rong,Sun Nan,Wu Yan.Department of Dermatology,Peking University First Hospital,Beijing 100034,China

    Wu Yan,Email:adelewu@medmail.com.cn

    ObjectiveTo investigate the effect of fusidic acid cream on inflammatory reaction caused by skin barrier damage.MethodsEight male SKH-1 hairless mice were included in this study.The back of each of these mice were equally divided into six regions measuring 1 cm × 2 cm in size,which were then assigned into six groups:blank control group remaining untreated,barrier-impaired group,barrier-impaired and fusidic acid-treated group,barrier-impaired and vehicle-treated group,barrier-unimpaired and fusidic acid-treated group,barrierunimpaired and vehicle-treated group.Stratum corneum was removed by adhesive tape stripping to establish an animal model of acute skin barrier damage in the corresponding skin regions of these mice,and fusidic acid cream or vehicle was topically applied to the corresponding regions once.Twelve hours later,skin surface swab samples were collected from the back of these mice followed by bacterial culture and colony counting.Mice were then sacrificed,and skin tissue specimens were resected from these mice,and subjected to real-time fluorescence-based quantitative PCR for the measurement of the mRNA expressions of myeloid differentiation factor 88(MyD88),interleukin-1α (IL-1α),IL-6,epidermal antibacterial peptides S100a8 and S100a9.Statistical analysis was carried out by repeated-measures analysis of variance(ANOVA)and least significant difference(LSD)test.ResultsThe mRNA expressions of MyD88,IL-1α,IL-6,S100a8 and S100a9 were all significantly higher in the barrier-impaired group than in the blank control group(allP< 0.05).Specifically,the mRNA expression level of MyD88 in the barrier-impaired group was 8 times that in the blank control group(8.3±3.0 vs.0.8±0.4).Compared with the barrier-impaired group,the barrier-impaired and fusidic acid-treated group showed a significant decrease in the mRNA expressions of IL-1α (2.8±0.3 vs.20.1±10.0,F(xiàn)=47.11,P<0.01),IL-6(1.6±2.3 vs.9.4±4.0,F(xiàn)=16.18,P< 0.01),S100a8(1.5± 1.4 vs.5.0± 1.6,F(xiàn)=59.71,P< 0.05)and S100a9(1.2± 0.7 vs.3.4 ± 1.6,F(xiàn)=21.94,P< 0.05).ConlusionsFusidic acid cream could attenuate the inflammatory reaction caused by acute skin barrier damage,which might partly explain its action mechanism in the treatment of inflammatory skin diseases.

    Fusidic acid;Skin barrier;Myeloid differentiation factor 88;Interleukins

    10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2014.12.009

    100034北京大學(xué)第一醫(yī)院皮膚科

    吳艷,Email:adelewu@medmail.com.cn

    猜你喜歡
    夫西乳膏屏障
    咬緊百日攻堅 筑牢安全屏障
    屏障修護(hù)TOP10
    鹵米松乳膏聯(lián)合維生素E乳膏治療神經(jīng)性皮炎的療效分析
    一道屏障
    維護(hù)網(wǎng)絡(luò)安全 筑牢網(wǎng)絡(luò)強(qiáng)省屏障
    哺乳媽媽消炎可以使用夫西地酸鈉
    萘替芬酮康唑乳膏配方篩選及工藝
    氯霉素氧化鋅乳膏的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
    夫西地酸乳膏聯(lián)合鹵米松乳膏治療64例濕疹臨床分析
    夫西地酸鈉的理化配伍禁忌
    青青草视频在线视频观看| av.在线天堂| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产片特级美女逼逼视频| 国产在视频线精品| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 波野结衣二区三区在线| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 久99久视频精品免费| videossex国产| 成人漫画全彩无遮挡| 午夜激情久久久久久久| av又黄又爽大尺度在线免费看| eeuss影院久久| 中文天堂在线官网| 国产伦一二天堂av在线观看| 在线观看人妻少妇| 久热久热在线精品观看| 国产淫片久久久久久久久| 天天躁日日操中文字幕| 成人午夜高清在线视频| 亚洲av男天堂| 国产真实伦视频高清在线观看| 国产精品一区二区性色av| 色5月婷婷丁香| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| a级毛色黄片| 成人性生交大片免费视频hd| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲av男天堂| 国产 亚洲一区二区三区 | 精品熟女少妇av免费看| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲最大成人中文| 91狼人影院| 18+在线观看网站| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久久欧美国产精品| 日日啪夜夜爽| 中文字幕制服av| 中文字幕亚洲精品专区| 欧美极品一区二区三区四区| 熟女人妻精品中文字幕| 2021少妇久久久久久久久久久| 性插视频无遮挡在线免费观看| av在线播放精品| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲精品国产成人久久av| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲av福利一区| 美女国产视频在线观看| 热99在线观看视频| 深夜a级毛片| 久久国产乱子免费精品| 美女主播在线视频| 哪个播放器可以免费观看大片| 蜜臀久久99精品久久宅男| 22中文网久久字幕| 91久久精品电影网| 寂寞人妻少妇视频99o| 国产午夜福利久久久久久| 国产男女超爽视频在线观看| 成人一区二区视频在线观看| 美女高潮的动态| 51国产日韩欧美| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 久久精品国产亚洲av涩爱| av在线亚洲专区| 国产一区有黄有色的免费视频 | 欧美 日韩 精品 国产| av女优亚洲男人天堂| 一本一本综合久久| 国内精品宾馆在线| 麻豆成人午夜福利视频| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲国产精品成人综合色| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 日韩av免费高清视频| 日韩av免费高清视频| 日韩大片免费观看网站| 七月丁香在线播放| 免费高清在线观看视频在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 人妻一区二区av| 欧美+日韩+精品| 久久亚洲国产成人精品v| 国产成人精品一,二区| 晚上一个人看的免费电影| 超碰97精品在线观看| 亚洲成人久久爱视频| 免费在线观看成人毛片| 久久精品久久久久久久性| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 能在线免费观看的黄片| 成年人午夜在线观看视频 | 久久国内精品自在自线图片| videossex国产| 丝袜美腿在线中文| 久久99热这里只频精品6学生| 激情五月婷婷亚洲| 亚洲精品色激情综合| 男人舔女人下体高潮全视频| 精华霜和精华液先用哪个| 午夜福利网站1000一区二区三区| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产精品综合久久久久久久免费| 国产午夜福利久久久久久| 我的老师免费观看完整版| 成人毛片a级毛片在线播放| 午夜福利网站1000一区二区三区| av.在线天堂| 在线天堂最新版资源| 免费观看在线日韩| 黄色一级大片看看| 久久鲁丝午夜福利片| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 色综合色国产| 亚洲精品一二三| 18+在线观看网站| 久久久欧美国产精品| 日韩欧美一区视频在线观看 | av在线亚洲专区| 国内精品一区二区在线观看| 内射极品少妇av片p| 国产av码专区亚洲av| 国内精品美女久久久久久| ponron亚洲| 日日啪夜夜撸| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲综合色惰| 国产成人91sexporn| 国产精品一及| a级毛片免费高清观看在线播放| 成人漫画全彩无遮挡| 日韩av在线大香蕉| 91精品伊人久久大香线蕉| 日韩av在线大香蕉| 日日摸夜夜添夜夜爱| 高清欧美精品videossex| 最近的中文字幕免费完整| 成人av在线播放网站| 国产乱来视频区| 国产久久久一区二区三区| 乱码一卡2卡4卡精品| 欧美97在线视频| 亚洲精品一二三| 成年版毛片免费区| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久国产乱子免费精品| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲国产av新网站| 99热网站在线观看| 草草在线视频免费看| 国产成人91sexporn| 久久久成人免费电影| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产精品日韩av在线免费观看| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产淫语在线视频| 国产在线男女| 色综合色国产| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲av中文av极速乱| 少妇被粗大猛烈的视频| 日韩三级伦理在线观看| 色综合站精品国产| 国产高清有码在线观看视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 亚洲精品成人av观看孕妇| 内地一区二区视频在线| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 色5月婷婷丁香| 亚洲国产高清在线一区二区三| 男女边摸边吃奶| 黄片无遮挡物在线观看| 亚洲综合色惰| 国产男人的电影天堂91| 国产综合精华液| 日本欧美国产在线视频| 亚洲成人一二三区av| 成人一区二区视频在线观看| 国内精品一区二区在线观看| 大话2 男鬼变身卡| 少妇人妻一区二区三区视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 国产大屁股一区二区在线视频| 不卡视频在线观看欧美| 22中文网久久字幕| 国产一区二区在线观看日韩| 国产伦精品一区二区三区视频9| 观看美女的网站| 成人性生交大片免费视频hd| 免费黄网站久久成人精品| 成人欧美大片| 国产毛片a区久久久久| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久久久久久久大av| av一本久久久久| 男女视频在线观看网站免费| 秋霞在线观看毛片| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产又色又爽无遮挡免| 在线天堂最新版资源| av国产免费在线观看| 国产成年人精品一区二区| 插阴视频在线观看视频| 极品教师在线视频| 国产日韩欧美在线精品| 在线a可以看的网站| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产一区亚洲一区在线观看| 午夜福利视频精品| 亚洲精品成人av观看孕妇| 久久这里有精品视频免费| 边亲边吃奶的免费视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 日本免费a在线| 国产亚洲精品久久久com| 韩国高清视频一区二区三区| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲欧美日韩东京热| av在线观看视频网站免费| 国产精品无大码| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 麻豆成人午夜福利视频| 高清在线视频一区二区三区| 国产成人精品福利久久| 国产午夜福利久久久久久| 国产亚洲5aaaaa淫片| 少妇的逼好多水| 亚洲国产最新在线播放| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 久久精品久久精品一区二区三区| 乱系列少妇在线播放| 欧美潮喷喷水| 三级国产精品欧美在线观看| 国产伦精品一区二区三区视频9| 听说在线观看完整版免费高清| 久久久久网色| 国产在线男女| 国产永久视频网站| eeuss影院久久| 国产av国产精品国产| 国产一区有黄有色的免费视频 | 国产成人精品婷婷| 少妇人妻精品综合一区二区| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产极品天堂在线| 深爱激情五月婷婷| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 国产伦在线观看视频一区| 久久久久久九九精品二区国产| 亚州av有码| 午夜福利视频精品| 又爽又黄无遮挡网站| 少妇的逼水好多| 国产高潮美女av| 一级a做视频免费观看| 三级国产精品片| 国产黄片美女视频| 2018国产大陆天天弄谢| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产成人精品一,二区| 亚洲成人av在线免费| 国产精品福利在线免费观看| 床上黄色一级片| 久久久久九九精品影院| 亚洲不卡免费看| 久久久久国产网址| 波野结衣二区三区在线| 国产 一区精品| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲欧美一区二区三区国产| 最近最新中文字幕大全电影3| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 久久99热这里只有精品18| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产精品伦人一区二区| av在线亚洲专区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 国产精品美女特级片免费视频播放器| 国产精品99久久久久久久久| 七月丁香在线播放| 99久国产av精品国产电影| 国产亚洲精品av在线| 国产一区二区在线观看日韩| av女优亚洲男人天堂| 亚洲在久久综合| 97超视频在线观看视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 欧美日本视频| 国产精品无大码| 午夜免费激情av| 天堂影院成人在线观看| 精品不卡国产一区二区三区| 久久久久久久久久黄片| 青春草国产在线视频| 国产精品一区二区在线观看99 | 99久国产av精品国产电影| 久久久精品免费免费高清| 男的添女的下面高潮视频| 一级毛片电影观看| 在线 av 中文字幕| 人妻系列 视频| 免费无遮挡裸体视频| 高清日韩中文字幕在线| 秋霞在线观看毛片| 伊人久久精品亚洲午夜| 精品国产三级普通话版| 男人和女人高潮做爰伦理| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 欧美日韩精品成人综合77777| 男女视频在线观看网站免费| 欧美成人午夜免费资源| 久久久久久久久久人人人人人人| 精品国产三级普通话版| 69av精品久久久久久| 成人亚洲精品av一区二区| 少妇高潮的动态图| 人人妻人人澡欧美一区二区| 淫秽高清视频在线观看| 水蜜桃什么品种好| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲国产高清在线一区二区三| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 两个人视频免费观看高清| 日本黄色片子视频| 久久久久久久久久成人| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 麻豆国产97在线/欧美| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 又爽又黄a免费视频| 亚洲经典国产精华液单| 高清日韩中文字幕在线| 插阴视频在线观看视频| 欧美成人午夜免费资源| 国产成人freesex在线| 亚洲乱码一区二区免费版| 午夜亚洲福利在线播放| 特大巨黑吊av在线直播| 老司机影院毛片| 天堂√8在线中文| 在线 av 中文字幕| 国产成人a区在线观看| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产成人91sexporn| 丰满少妇做爰视频| 日韩欧美国产在线观看| 免费无遮挡裸体视频| 日韩大片免费观看网站| 水蜜桃什么品种好| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日韩av不卡免费在线播放| 国产精品女同一区二区软件| 免费在线观看成人毛片| 久久久久久久久中文| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 九色成人免费人妻av| 99热全是精品| 高清视频免费观看一区二区 | 简卡轻食公司| 少妇高潮的动态图| 久久精品综合一区二区三区| 成人二区视频| 波野结衣二区三区在线| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 青春草国产在线视频| 国产精品.久久久| 精品一区二区免费观看| 亚洲va在线va天堂va国产| 亚洲丝袜综合中文字幕| 午夜福利在线在线| 校园人妻丝袜中文字幕| 欧美成人午夜免费资源| 在线天堂最新版资源| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 精品一区二区三区视频在线| 久久亚洲国产成人精品v| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲av免费高清在线观看| 人妻一区二区av| 99久久中文字幕三级久久日本| 在线免费观看不下载黄p国产| 成人亚洲精品一区在线观看 | 简卡轻食公司| 成人亚洲欧美一区二区av| 色播亚洲综合网| 久久久久免费精品人妻一区二区| 在线免费观看的www视频| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲成人精品中文字幕电影| 能在线免费观看的黄片| 国产精品1区2区在线观看.| 搡老乐熟女国产| 久久久a久久爽久久v久久| 在现免费观看毛片| 亚洲性久久影院| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 日韩一区二区三区影片| 国产老妇女一区| 色播亚洲综合网| 特级一级黄色大片| 97在线视频观看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 日本wwww免费看| 久热久热在线精品观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产亚洲精品久久久com| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 亚洲av.av天堂| 婷婷色av中文字幕| 免费观看在线日韩| 久久午夜福利片| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 六月丁香七月| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲av一区综合| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 九色成人免费人妻av| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲国产最新在线播放| 91狼人影院| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲在线观看片| 国产精品久久久久久精品电影| 成人亚洲精品av一区二区| 免费看a级黄色片| 亚洲精品日本国产第一区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲精品国产成人久久av| 在线观看人妻少妇| 国内揄拍国产精品人妻在线| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产永久视频网站| 亚洲综合精品二区| www.av在线官网国产| 国产精品女同一区二区软件| 免费人成在线观看视频色| 国产精品一及| 欧美日韩亚洲高清精品| 午夜福利在线在线| 久99久视频精品免费| 永久网站在线| 亚洲综合精品二区| av福利片在线观看| 一二三四中文在线观看免费高清| 伦精品一区二区三区| 激情五月婷婷亚洲| 成年女人在线观看亚洲视频 | 国产精品久久久久久精品电影小说 | 国产精品人妻久久久久久| 男插女下体视频免费在线播放| 大话2 男鬼变身卡| 久久精品久久久久久久性| 男女下面进入的视频免费午夜| 男女那种视频在线观看| 舔av片在线| 99久久九九国产精品国产免费| 午夜免费激情av| 在线观看av片永久免费下载| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 亚洲欧美成人精品一区二区| 日韩av在线大香蕉| 午夜福利网站1000一区二区三区| 免费看av在线观看网站| 免费电影在线观看免费观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 日本爱情动作片www.在线观看| 欧美日韩综合久久久久久| 久99久视频精品免费| 亚洲熟女精品中文字幕| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 夫妻午夜视频| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国产精品熟女久久久久浪| 国产亚洲5aaaaa淫片| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲精品国产av成人精品| 午夜日本视频在线| 亚洲人成网站在线播| 国产成年人精品一区二区| 91精品一卡2卡3卡4卡| 欧美成人a在线观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 亚洲美女搞黄在线观看| 高清av免费在线| 国产精品99久久久久久久久| 美女cb高潮喷水在线观看| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产久久久一区二区三区| 九色成人免费人妻av| 免费看光身美女| 毛片女人毛片| 国产三级在线视频| 在线观看人妻少妇| 深爱激情五月婷婷| 亚洲国产高清在线一区二区三| 人妻系列 视频| 久久99热这里只有精品18| 久久久精品免费免费高清| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产一区亚洲一区在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 免费观看的影片在线观看| 国产黄频视频在线观看| 观看免费一级毛片| 一级毛片久久久久久久久女| 免费观看在线日韩| 免费看日本二区| 国产成年人精品一区二区| 伦精品一区二区三区| 国产在视频线精品| 中文欧美无线码| 久热久热在线精品观看| 婷婷色综合大香蕉| 色尼玛亚洲综合影院| 日韩大片免费观看网站| 国产成人a区在线观看| 亚洲av福利一区| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 亚洲av成人av| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产精品三级大全| 亚洲欧美成人精品一区二区| 搡老乐熟女国产| 高清视频免费观看一区二区 | ponron亚洲| 亚洲久久久久久中文字幕| 亚洲国产欧美人成| 成年版毛片免费区| 国产麻豆成人av免费视频| 26uuu在线亚洲综合色| 美女被艹到高潮喷水动态| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久精品国产亚洲av天美| 国产亚洲91精品色在线| 欧美不卡视频在线免费观看| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 能在线免费看毛片的网站| 国产黄频视频在线观看| 免费少妇av软件| 国精品久久久久久国模美| 国产爱豆传媒在线观看| 直男gayav资源| 最近视频中文字幕2019在线8| 高清午夜精品一区二区三区| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 午夜爱爱视频在线播放| 男人舔奶头视频| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲欧洲国产日韩| 免费少妇av软件| 淫秽高清视频在线观看| 内射极品少妇av片p| 国产精品久久视频播放| 天堂中文最新版在线下载 | 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 国产高清三级在线| 最近中文字幕高清免费大全6| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产91av在线免费观看| 日韩强制内射视频| 天堂中文最新版在线下载 | 精品一区二区三卡| 91精品伊人久久大香线蕉| 日日啪夜夜撸| 天堂网av新在线| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 色哟哟·www| 久久久久久久久久人人人人人人| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲内射少妇av| 在线a可以看的网站| 亚洲成人一二三区av| 有码 亚洲区| 最近中文字幕2019免费版| 国产一级毛片在线| 床上黄色一级片| 精品不卡国产一区二区三区| 嘟嘟电影网在线观看| 亚洲18禁久久av| 国产黄片美女视频| 久久精品久久久久久久性| 床上黄色一级片| 99视频精品全部免费 在线| 国产精品久久久久久久久免| 成人特级av手机在线观看| av.在线天堂| 免费黄网站久久成人精品| 99九九线精品视频在线观看视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲精品一区蜜桃| 日本av手机在线免费观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产成人a区在线观看| 嫩草影院入口|