松果菊苷對帕金森病大鼠紋狀體及海馬細胞外液中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響

張萬鑫，馬婧怡，陳 虹，姜 勇，屠鵬飛，丁 慧

(1.石河子大學藥學院教育部新疆特種植物藥資源重點實驗室，新疆石河子 832002;2.北京大學中醫(yī)藥現(xiàn)代研究中心，北京 100083)

近年來，越來越多的研究表明，管花肉蓯蓉(Tubulosa Cistanchis)及其所含的多種化學成分具有神經(jīng) 保 護 作 用［1－2］，其 中 松 果 菊 苷 (echinacoside，ECH)經(jīng)研究證明具有明顯的抗氧化［3］、抗神經(jīng)元凋亡［4］、抗衰老［5］和改善學習記憶能力［6］等神經(jīng)保護作用。帕金森病(Parkinson's disease，PD)是一種慢性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退化性失調(diào)，腦內(nèi)需要多巴胺來指揮肌肉的活動，缺乏足夠的多巴胺就產(chǎn)生各種活動障礙，損害患者的動作技能、語言能力以及其他功能。以往研究僅對給予藥物ECH后PD大鼠紋狀體細胞外液中DA、DOPAC、HVA含量的變化做出檢測［7］，本研究在此基礎(chǔ)上，除對紋狀體中多種單胺類物質(zhì)進行檢測外，也對海馬細胞外液中的5種單胺類物質(zhì)進行檢測，旨在進一步探討ECH對PD大鼠腦神經(jīng)保護作用的可能機制。

1 材料與方法

1.1 藥物和試劑 水合氯醛(天津市福晨化學試劑廠);磷酸鋅水門汀(上海醫(yī)療器械股份有限公司產(chǎn)品，由液體和粉劑組成);ECH由北京大學藥學院屠鵬飛教授惠贈(純度95%以上);美多巴(ROCHE公司);6-羥基多巴胺(6-OHDA)、多巴胺(DA)、3，4-二羥基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)、去甲腎上腺素(NE)、5-羥色胺(5-HT)(均為Sigma公司);一水合檸檬酸(天津市津科精細化工研究所);檸檬酸三鈉(Acros公司);乙二胺四乙酸二鈉(JTBaker Chemical co);八烷基硫酸鈉(Sigma公司);甲醇(DIKMA公司);乙腈(DIKMA公司);腦微透析灌流液為復方氯化鈉注射液(北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司)。

1.2 儀器 美國BAS4100型大鼠腦立體定位儀;CMA/12探針及探針套管;CMA/120清醒動物裝置;CMA/402微量泵;CMA/150低溫樣品自動收集器;島津LC-20AB輸液泵;島津CTO-10ASVP柱溫箱;ANTEC DECAED2SDC電化學檢測器;玻璃碳工作電極和Ag/AgCl參考電極;C18色譜柱(Waters公司，ODS 5 μm，250 mm ×4.6 mm);島津色譜工作站(Esa公司)。

1.3 實驗動物分組及模型制備 清潔級♂ SD大鼠，體質(zhì)量250～300g，購于新疆實驗動物中心，許可證編號:SCXK(新)2011－0002。隨機分為對照組(Control)、模型組(Model)、ECH高劑量組(ECHH)、ECH中劑量組(ECHM)、ECH低劑量組(ECHL)和陽性藥美多巴組(MD)，每組8只。以質(zhì)量分數(shù)為10%的水合氯醛(3.5 ml·kg－1)將大鼠麻醉后固定在定位儀上，顱頂皮膚脫毛，暴露出大鼠頂蓋，參照George Paxinos《大鼠腦立體定位圖譜》，利用三維立體定位技術(shù)，以前囟為基點，定位坐標為①AP:－0.2 mm;ML:+3.0 mm;DV:－4.5 mm。②AP:－0.2 mm;ML:+3.0 mm;DV:－5.5 mm，除對照組外，其余各組大鼠紋狀體內(nèi)雙點注射6-OHDA，每點注射4 μl(3 g·L－1)，對照組注射等量的維C生理鹽水，縫合皮膚切口。

1.4 術(shù)后給藥及微透析 于PD大鼠模型制作完畢后7 d，各組大鼠腹腔注射相應的藥物或生理鹽水，每天1次，連續(xù)4周。其中對照組和模型組分別給予等量質(zhì)量分數(shù)為0.9%氯化鈉注射液1 ml·kg－1;ECH 高、中、低劑量組分別給予 ECH 40、20、10 mg·kg－1;陽性藥組給予 MD 4.5 mg·kg－1。給藥結(jié)束后，依次以質(zhì)量分數(shù)為10%的水合氯醛(3.5 ml·kg－1)麻醉大鼠，將套管植入大鼠右側(cè)紋狀體及海馬中，定位坐標為① 紋狀體:AP:－0.2 mm;ML:+3.0 mm;DV:－4.5 mm，② 海馬:AP:+3.5 mm;ML:+2.0 mm;DV:－3.0 mm，待大鼠清醒后在其自由活動狀態(tài)下插入微透析探針，用Ringer液以1.5 μl·min－1的速度同時灌流，每20 min 收集1 管透析液，每管透析液收集完畢后均立即置于－20℃冰箱保存，并在透析結(jié)束后轉(zhuǎn)存至－70℃冰箱，擇日測定。本實驗中的 DA、DOPAC、HVA、NE、5-HT探針回收率分別為 49.89%、35.63%、28.42%、45.17%、24.22%。

1.5 HPLC-ECD分析 測定流動相每升含一水合檸檬酸15 g、檸檬酸三鈉20.2 g、Na2EDTA 0.036 g、八烷基磺酸鈉0.18 g、甲醇100 ml。清洗流動相為甲醇∶水(40∶60V/V)。設(shè)定流動相流速為1.0 ml·min－1，柱溫箱溫度40℃，電化學檢測器工作電壓750 mV，增益為2nA，進樣量為 20 μl。標準曲線用12.5、25、50、100、250、500、1 000 μg·L－1的含 DA、DOPAC、HVA、NE、5-HT的混合標準溶液繪制。

2 結(jié)果

2.1 ECH對PD大鼠紋狀體及海馬細胞外液中DA含量的影響 由Tab 1、2可知:整個灌流期內(nèi)，模型組大鼠的紋狀體及海馬細胞外液中DA含量均明顯低于對照組(P＜0.01)，說明模型成功。與模型組比較，各給藥組DA含量均有不同程度的升高(P＜0.05，P＜0.01)。

2.2 ECH對PD大鼠紋狀體及海馬細胞外液中DOPAC含量的影響 由Tab 3、4可知:整個灌流期內(nèi)，模型組大鼠的紋狀體及海馬細胞外液中DOPAC

含量均明顯低于對照組(P＜0.01)，這一結(jié)果間接說明模型成功。與模型組比較，各給藥組DOPAC含量均有不同程度的升高(P＜0.05，P＜0.01)。

Tab 1Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of DA in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

Tab 1Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of DA in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

＊＊P ＜0.01 vs control group;△P ＜0.05，△△P ＜0.01 vs model group.

Perfusion time/min Content of DA in striatal extracellular fluid/μmol·L －1 Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 5.33 ±0.69 2.50 ±0.46＊＊ 5.01 ±0.28△ 4.85 ±0.86△ 4.81 ±0.59△ 5.11 ±0.82△△40 6.42 ±0.70 3.01 ±0.41＊＊ 5.83 ±0.68△△ 5.04 ±0.70△ 4.75 ±0.52△ 5.62 ±0.54△△60 8.56 ±0.63 4.03 ±0.54＊＊ 7.05 ±0.49△ 7.77 ±0.52△△ 7.01 ±0.26△ 8.25 ±0.69△△80 9.59 ±0.49 4.49 ±0.34＊＊ 8.55 ±0.63△△ 8.01 ±0.58△△ 7.36 ±0.47△ 8.36 ±0.51△△100 10.65 ±0.52 4.96 ±0.37＊＊ 9.58 ±0.58△△ 8.95 ±0.61△ 8.24 ±0.71△ 9.68 ±0.64△△120 11.56 ±0.49 5.41 ±0.44＊＊ 10.38 ±0.64△△ 9.82 ±0.35△ 8.95 ±0.69△ 10.29 ±0.58△△140 10.58 ±0.58 4.95 ±0.38＊＊ 9.34 ±0.52△ 8.62 ±0.67△ 7.79 ±0.48△ 9.87 ±0.35△△160 9.64 ±0.52 4.52 ±0.43＊＊ 9.05 ±0.69△△ 9.31 ±0.32△△ 8.96 ±0.44△ 8.86 ±0.38△△180 8.62 ±0.64 4.04 ±0.29＊＊ 8.25 ±0.56△△ 8.84 ±0.48△△ 7.92 ±0.39△ 8.31 ±0.47△△200 7.59 ±0.60 3.56 ±0.47＊＊ 7.06 ±0.60△△ 6.52 ±0.51△ 5.49 ±0.85△ 7.38 ±0.39△△

Tab 2 Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of DA in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

Tab 2 Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of DA in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

＊＊P ＜0.01 vs control group;△P ＜0.05，△△P ＜0.01 vs model group.

Perfusion time/min Content of DA in hippocampus extracellular fluid/μmol·L －1 Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 5.81 ±0.55 2.88 ±0.32＊＊ 5.50 ±0.35△ 5.36 ±0.67△ 5.25 ±0.43△ 5.59 ±0.43△△40 6.98 ±0.61 3.53 ±0.51＊＊ 6.35 ±0.56△△ 5.57 ±0.51△ 5.20 ±0.32△ 6.21 ±0.56△△60 9.03 ±0.56 4.52 ±0.47＊＊ 7.53 ±0.31△ 7.19 ±0.48△ 7.47 ±0.28△ 8.76 ±0.58△△80 9.94 ±0.62 4.91 ±0.35＊＊ 9.11 ±0.47△△ 8.50 ±0.39△ 7.88 ±0.56△ 8.84 ±0.44△△100 11.12 ±0.49 5.40 ±0.46＊＊ 10.29 ±0.53△△ 9.42 ±0.35△ 8.69 ±0.53△ 10.20 ±0.37△△120 12.15 ±0.51 5.92 ±0.54＊＊ 10.87 ±0.57△△ 10.15 ±0.42△ 9.34 ±0.37△ 10.72 ±0.52△△140 11.16 ±0.45 5.32 ±0.40＊＊ 9.90 ±0.44△△ 9.11 ±0.56△ 8.27 ±0.42△ 10.31 ±0.31△△160 10.09 ±0.59 4.91 ±0.39＊＊ 9.48 ±0.59△△ 9.04 ±0.50△△ 9.05 ±0.38△ 8.96 ±0.38△△180 9.09 ±0.63 4.39 ±0.35＊＊ 8.79 ±0.43△△ 7.77 ±0.44△ 8.21 ±0.29△ 8.73 ±0.55△△200 8.23 ±0.57 3.98 ±0.41＊＊ 7.58 ±0.52△△ 6.89 ±0.39△ 5.98 ±0.35△ 7.96 ±0.36△△

Tab 3Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of DOPAC in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

Tab 3Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of DOPAC in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

＊＊P＜0.01 vs control group;△P＜0.05，△△P＜0.01 vs model group.

Perfusion time/min Content of DOPAC in striatal extracellular fluid/μmol·L －1 Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 14.83 ±1.27 6.73 ±0.58＊＊ 11.75 ±0.86△△ 10.58 ±1.12△ 8.87 ±0.87△ 12.14 ±0.69△△40 15.44 ±1.11 7.15 ±0.61＊＊ 12.57 ±1.05△△ 13.21 ±0.98△△ 10.58 ±0.69△ 12.21 ±0.52△△60 16.01 ±1.01 7.60 ±0.55＊＊ 14.23 ±0.89△△ 14.14 ±1.25△△ 12.51 ±0.92△ 13.89 ±1.05△△80 16.70 ±0.91 7.97 ±0.44＊＊ 14.46 ±1.21△△ 14.68 ±0.87△△ 12.21 ±1.02△ 14.21 ±0.65△△100 17.27 ±0.93 8.42 ±0.26＊＊ 14.66 ±0.96△ 15.21 ±1.04△△ 13.38 ±0.85△ 15.38 ±0.96△△120 17.92 ±0.85 8.80 ±0.85＊＊ 15.12 ±1.03△△ 14.96 ±0.79△ 13.89 ±0.77△ 15.35 ±0.57△△140 17.29 ±0.94 8.44 ±0.30＊＊ 14.38 ±0.87△ 14.21 ±0.96△ 11.52 ±1.06△ 15.04 ±1.01△△160 16.72 ±0.85 7.98 ±0.29＊＊ 14.26 ±0.97△△ 13.86 ±0.91△ 12.15 ±0.94△ 14.38 ±0.99△△180 15.95 ±0.85 7.61 ±0.40＊＊ 13.86 ±1.05△△ 13.51 ±1.08△ 10.26 ±0.38△ 14.01 ±0.85△△200 15.24 ±1.03 7.16 ±0.48＊＊ 13.25 ±1.01△△ 12.48 ±0.85△ 11.14 ±0.52△ 13.16 ±1.08△△

Tab 4 Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of DOPAC in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

Tab 4 Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of DOPAC in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

＊＊P＜0.01 vs control group;△P＜0.05，△△P＜0.01 vs model group.

Perfusion time/min Content of DOPAC in hippocampus extracellular fluid/μmol·L －1 Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 15.89 ±1.02 7.78 ±0.99＊＊ 12.95 ±0.55△ 11.68 ±0.69△ 9.65 ±1.01△ 13.57 ±0.94△△40 16.43 ±0.97 8.11 ±1.02＊＊ 13.68 ±1.12△△ 13.27 ±1.01△△ 11.35 ±0.89△ 13.68 ±0.85△△60 17.10 ±1.15 8.59 ±0.75＊＊ 15.24 ±0.69△△ 14.15 ±0.95△ 13.27 ±0.72△ 15.31 ±0.68△△80 17.94 ±0.89 9.03 ±0.89＊＊ 15.73 ±0.73△△ 15.90 ±0.83△△ 13.30 ±1.03△ 15.52 ±1.04△△100 18.46 ±0.87 9.37 ±0.52＊＊ 15.87 ±1.01△ 16.23 ±0.59△ 14.16 ±0.69△ 16.61 ±0.83△△120 19.11 ±1.20 9.69 ±1.13＊＊ 16.23 ±0.84△△ 16.07 ±1.02△ 14.69 ±1.02△ 16.59 ±0.77△△140 18.52 ±0.82 9.32 ±0.68＊＊ 15.51 ±0.90△ 15.30 ±0.74△ 13.34 ±1.18△ 16.34 ±0.63△△160 17.79 ±1.01 8.90 ±1.06＊＊ 15.43 ±1.05△△ 15.05 ±0.63△ 13.06 ±0.99△ 15.65 ±1.10△△180 17.12 ±0.97 8.48 ±0.75＊＊ 14.98 ±0.73△ 14.71 ±0.81△ 12.84 ±0.84△ 15.31 ±0.79△△200 16.40 ±0.73 8.07 ±0.94＊＊ 14.37 ±0.83△△ 13.88 ±0.97△ 12.01 ±1.05△ 14.48 ±0.92△△

2.3 ECH對PD大鼠紋狀體及海馬細胞外液中HVA含量的影響 由Tab 5、6可知:整個灌流期內(nèi)，模型組大鼠的紋狀體及海馬細胞外液中HVA含量均明顯低于對照組(P＜0.01)，這一結(jié)果也間接說明模型成功。與模型組比較，各給藥組HVA含量均有不同程度的升高(P＜0.05，P＜0.01)。

2.4 ECH對PD大鼠紋狀體及海馬細胞外液中NE含量的影響 由Tab 7、8可知:整個灌流期內(nèi)，模型組大鼠的紋狀體及海馬細胞外液中NE含量均明顯低于對照組(P＜0.01)，說明模型成功。與模型組比較，各給藥組NE含量均有不同程度的升高(P＜0.05，P＜0.01)。

2.5 ECH對PD大鼠紋狀體及海馬細胞外液中5-HT含量的影響 由Tab 9、10可知:整個灌流期內(nèi)，模型組大鼠的紋狀體及海馬細胞外液中5-HT含量均明顯低于對照組(P＜0.01)，說明模型成功。與模型組比較，各給藥組5-HT含量均有不同程度的升高(P＜0.05，P＜0.01)。

Tab 5Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of HVA in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

Tab 5Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of HVA in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

＊＊P＜0.01 vs control group;△P＜0.05，△△P＜0.01 vs model group.

Perfusion time/min Content of HVA in striatal extracellular fluid/μmol·L －1 Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 14.34 ±0.48 6.83 ±0.21＊＊ 11.26 ±0.51△△ 9.87 ±0.26△ 8.52 ±0.31△ 11.52 ±0.41△△40 14.74 ±0.46 7.04 ±0.22＊＊ 11.58 ±0.65△△ 10.08 ±0.31△ 8.69 ±0.58△ 11.61 ±0.59△△60 15.16 ±0.46 7.23 ±0.19＊＊ 12.35 ±0.39△△ 10.16 ±0.46△ 8.58 ±0.43△ 12.26 ±0.19△△80 15.56 ±0.42 7.24 ±0.19＊＊ 12.68 ±0.84△△ 12.35 ±0.69△ 9.87 ±0.62△ 12.75 ±0.57△△100 16.00 ±0.41 7.35 ±0.24＊＊ 13.41 ±0.57△△ 11.14 ±0.38△ 10.29 ±0.57△ 13.58 ±0.52△△120 16.35 ±0.38 7.81 ±0.14＊＊ 13.62 ±0.52△△ 11.19 ±0.52△ 9.97 ±0.36△ 13.49 ±0.73△△140 15.95 ±0.45 7.60 ±0.21＊＊ 13.01 ±0.14△ 10.95 ±0.28△ 9.85 ±0.62△ 13.69 ±0.54△△160 15.53 ±0.52 7.39 ±0.26＊＊ 12.69 ±0.38△△ 10.39 ±0.47△ 9.29 ±0.68△ 12.57 ±0.38△△180 15.15 ±0.52 7.18 ±0.18＊＊ 11.96 ±0.59△△ 10.09 ±0.46△ 8.89 ±0.75△ 11.59 ±0.19△△200 14.76 ±0.58 7.07 ±0.23＊＊ 11.39 ±0.24△△ 9.89 ±0.25△ 8.96 ±0.54△ 10.69 ±0.24△△

Tab 6Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of HVA in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

Tab 6Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of HVA in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

＊＊P＜0.01 vs control group;△P＜0.05，△△P＜0.01 vs model group.

Perfusion time/min Content of HVA in hippocampus extracellular fluid/μmol·L －1 Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 15.41 ±0.42 7.67 ±0.39＊＊ 12.45 ±0.55△△ 11.08 ±0.69△ 9.45 ±0.45△ 12.77 ±0.44△△40 15.83 ±0.56 7.90 ±0.42＊＊ 12.88 ±0.42△△ 11.27 ±0.51△ 9.56 ±0.39△ 12.98 ±0.27△△60 16.28 ±0.73 8.12 ±0.55＊＊ 13.64 ±0.69△△ 11.35 ±0.42△ 9.52 ±0.56△ 13.41 ±0.51△△80 16.70 ±0.48 8.15 ±0.59＊＊ 13.93 ±0.23△△ 13.49 ±0.43△△ 10.70 ±0.33△ 14.11 ±0.32△△100 17.04 ±0.33 8.20 ±0.62＊＊ 14.67 ±0.51△△ 12.23 ±0.62△ 11.19 ±0.69△ 14.86 ±0.62△△120 17.54 ±0.41 8.56 ±0.63＊＊ 14.93 ±0.44△△ 12.37 ±0.27△ 10.86 ±0.51△ 14.71 ±0.36△△140 17.10 ±0.56 8.43 ±0.38＊＊ 14.52 ±0.30△△ 12.10 ±0.34△ 10.72 ±0.29△ 14.98 ±0.69△△160 16.73 ±0.62 8.21 ±0.46＊＊ 13.93 ±0.55△△ 11.44 ±0.48△ 10.17 ±0.39△ 13.84 ±0.53△△180 16.32 ±0.28 8.08 ±0.55＊＊ 13.28 ±0.23△△ 11.19 ±0.35△ 9.78 ±0.14△ 12.88 ±0.44△△200 15.89 ±0.37 7.90 ±0.54＊＊ 12.57 ±0.53△△ 10.98 ±0.56△ 9.69 ±0.54△ 12.89 ±0.29△△

Tab 7Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of NE in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

Tab 7Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of NE in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

＊＊P ＜0.01 vs control group;△P ＜0.05，△△P ＜0.01 vs model group.

Perfusion time/min Content of NE in striatal extracellular fluid/μmol·L －1 Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 22.26 ±0.26 10.56 ±0.35＊＊ 19.86 ±0.48△△ 17.36 ±0.57△ 16.98 ±0.26△ 20.36 ±0.25△△40 24.35 ±0.37 10.94 ±0.27＊＊ 20.27 ±0.37△ 18.15 ±0.28△ 18.05 ±0.55△ 20.59 ±0.61△△60 24.98 ±0.49 11.05 ±0.39＊＊ 21.42 ±0.26△△ 18.49 ±0.35△ 18.31 ±0.52△ 21.24 ±0.33△△80 25.66 ±0.51 11.31 ±0.47＊＊ 21.68 ±0.54△△ 19.11 ±0.44△ 19.06 ±0.32△ 21.39 ±0.56△△100 26.04 ±0.44 11.42 ±0.36＊＊ 22.31 ±0.67△△ 20.24 ±0.43△ 19.98 ±0.61△ 22.58 ±0.45△△120 26.28 ±0.39 11.78 ±0.52＊＊ 22.62 ±0.37△△ 19.92 ±0.43△ 19.57 ±0.43△ 22.46 ±0.68△△140 25.77 ±0.41 11.59 ±0.25＊＊ 23.01 ±0.28△△ 20.35 ±0.61△ 19.99 ±0.58△ 22.97 ±0.34△△160 25.39 ±0.56 11.27 ±0.71＊＊ 22.64 ±0.46△△ 20.26 ±0.51△ 19.34 ±0.71△ 22.69 ±0.29△△180 25.02 ±0.71 11.04 ±0.44＊＊ 20.73 ±0.57△△ 19.91 ±0.48△ 18.75 ±0.58△ 20.61 ±0.35△△200 24.45 ±0.38 10.88 ±0.35＊＊ 20.20 ±0.29△ 19.67 ±0.36△ 18.59 ±0.61△ 20.34 ±0.55△△

Tab 8Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of NE in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

Tab 8Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of NE in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

＊＊P ＜0.01 vs control group;△P ＜0.05，△△P ＜0.01 vs model group.

ime Content of NE in hippocampus extracellular fluid/μmol·L －1 Perfusion t/min Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 23.89 ±0.35 11.76 ±0.41＊＊ 21.40 ±0.45△△ 18.91 ±0.25△ 18.41 ±0.31△ 21.97 ±0.27△△40 25.93 ±0.46 11.99 ±0.52＊＊ 21.77 ±0.27△ 19.69 ±0.26△ 19.44 ±0.27△ 22.24 ±0.38△△60 26.62 ±0.42 12.13 ±0.67＊＊ 22.97 ±0.36△△ 20.10 ±0.36△ 19.76 ±0.37△ 22.96 ±0.55△△80 27.41 ±0.58 12.37 ±0.29＊＊ 23.19 ±0.51△△ 20.64 ±0.31△ 20.70 ±0.42△ 23.13 ±0.49△△100 27.60 ±0.41 12.48 ±0.36＊＊ 23.84 ±0.28△ 21.73 ±0.51△ 21.51 ±0.57△ 24.21 ±0.52△△120 27.94 ±0.39 12.88 ±0.48＊＊ 24.15 ±0.32△△ 21.45 ±0.44△ 21.03 ±0.26△ 24.16 ±0.54△△140 27.40 ±0.51 12.67 ±0.35＊＊ 24.65 ±0.35△△ 21.78 ±0.46△ 21.39 ±0.31△ 24.56 ±0.37△△160 26.93 ±0.47 12.29 ±0.26＊＊ 24.21 ±0.24△ 21.79 ±0.29△ 20.77 ±0.44△ 24.36 ±0.57△△180 26.58 ±0.33 12.13 ±0.19＊＊ 22.32 ±0.47△△ 21.50 ±0.32△ 20.12 ±0.57△ 22.20 ±0.38△△200 25.99 ±0.40 11.90 ±0.22＊＊ 21.74 ±0.59△△ 21.23 ±0.43△ 20.01 ±0.29△ 21.94 ±0.33△△

Tab 9 Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of 5-HT in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

Tab 9 Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of 5-HT in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

＊＊P ＜0.01 vs control group;△P ＜0.05，△△P ＜0.01 vs model group.

Perfusion time/min Content of 5-HT in striatal extracellular fluid/μmol·L －1 Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 8.35 ±0.26 4.28 ±0.43＊＊ 6.58 ±0.37△△ 5.87 ±0.27△ 5.24 ±0.31△ 6.47 ±0.87△△40 8.86 ±0.37 3.96 ±0.38＊＊ 6.95 ±0.31△ 6.03 ±0.37△ 5.67 ±0.47△ 6.89 ±0.92△△60 9.49 ±0.49 4.18 ±0.25＊＊ 7.31 ±0.41△△ 6.34 ±0.42△ 6.15 ±0.38△ 7.42 ±0.48△△80 10.31 ±0.51 4.55 ±0.53＊＊ 7.59 ±0.45△△ 6.86 ±0.51△ 6.74 ±0.52△ 7.66 ±0.62△△100 11.05 ±0.44 5.26 ±0.47＊＊ 7.98 ±0.54△△ 7.21 ±0.62△ 7.01 ±0.63△ 7.95 ±0.53△△120 11.28 ±0.39 5.86 ±0.61＊＊ 8.53 ±0.35△ 7.63 ±0.74△ 7.34 ±0.72△ 8.65 ±0.74△△140 10.82 ±0.41 5.11 ±0.72＊＊ 8.04 ±0.36△△ 7.52 ±0.48△ 7.33 ±0.69△ 8.06 ±0.28△△160 10.43 ±0.56 4.48 ±0.74＊＊ 7.58 ±0.72△△ 7.09 ±0.54△ 6.86 ±0.58△ 7.71 ±0.54△△180 10.01 ±0.71 4.01 ±0.38＊＊ 7.11 ±0.59△△ 6.85 ±0.43△ 6.41 ±0.69△ 7.30 ±0.37△△200 9.36 ±0.38 3.97 ±0.45＊＊ 6.87 ±0.44△△ 6.52 ±0.63△△ 5.95 ±0.74△ 6.94 ±0.46△△

Tab 10Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of 5-HT in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

Tab 10Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of 5-HT in Parkinson's disease rats(±s，n=8)

＊＊P ＜0.01 vs control group;△P ＜0.05，△△P ＜0.01 vs model group.

Perfusion time/min Content of 5-HT in hippocampus extracellular fluid/μmol·L －1 Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 9.16 ±0.45 4.92 ±0.25＊＊ 7.47 ±0.34△△ 6.69 ±0.31△△ 6.00 ±0.22△ 7.33 ±0.35△△40 9.72 ±0.37 4.88 ±0.18＊＊ 7.94 ±0.25△△ 6.88 ±0.46△ 6.51 ±0.35△ 7.96 ±0.54△△60 10.31 ±0.54 4.93 ±0.33＊＊ 8.53 ±0.27△△ 7.21 ±0.50△ 6.87 ±0.41△ 8.36 ±0.27△△80 11.29 ±0.61 5.45 ±0.28＊＊ 8.51 ±0.56△△ 7.69 ±0.28△ 7.44 ±0.42△ 8.60 ±0.38△△100 11.70 ±0.36 6.04 ±0.46＊＊ 8.90 ±0.62△△ 8.10 ±0.43△ 7.65 ±0.36△ 8.93 ±0.46△△120 12.15 ±0.42 6.72 ±0.35＊＊ 9.51 ±0.47△△ 8.57 ±0.24△ 8.21 ±0.43△ 9.62 ±0.51△△140 11.76 ±0.54 5.73 ±0.29＊＊ 8.99 ±0.44△△ 8.35 ±0.31△ 8.19 ±0.35△ 9.03 ±0.37△△160 11.32 ±0.33 5.30 ±0.17＊＊ 8.53 ±0.27△△ 7.92 ±0.25△ 7.59 ±0.19△ 8.75 ±0.25△△180 10.90 ±0.51 4.65 ±0.27＊＊ 8.02 ±0.38△△ 7.63 ±0.36△△ 7.15 ±0.27△ 8.34 ±0.36△△200 10.17 ±0.47 4.31 ±0.32＊＊ 7.81 ±0.30△△ 7.29 ±0.22△ 6.79 ±0.30△ 7.94 ±0.42△△

3 討論

研究表明，PD的病變主要發(fā)生在黑質(zhì)和紋狀體，多巴胺能神經(jīng)元喪失，導致紋狀體內(nèi)乙酰膽堿－多巴胺兩種遞質(zhì)失去平衡而發(fā)?。?］，從而導致PD大鼠出現(xiàn)靜止性震顫、肌強直、運動徐緩、姿勢反射減少、甚至會出現(xiàn)明顯的學習記憶障礙，并發(fā)癡呆等。由于大腦海馬區(qū)主要負責學習和記憶，因此本實驗旨在研究PD的形成是否還與海馬細胞外液神經(jīng)遞質(zhì)的變化有關(guān)，進一步探討ECH治療PD大鼠的可能機制。

從以上結(jié)果可以看出，在整個灌流期內(nèi)，模型組大鼠紋狀體及海馬細胞外液中各時間點的5種神經(jīng)遞質(zhì)含量均明顯低于對照組(P＜0.01)，說明模型成功且可靠，PD大鼠除紋狀體外，海馬內(nèi)這5種遞質(zhì)的含量也有明顯的變化。而與模型組比較，ECH高、中、低劑量組和陽性藥MD組各時間點5種遞質(zhì)的含量均有不同程度的升高(P＜0.05，P＜0.01)，其中ECH高劑量組與陽性藥MD組相差不大，個別存在一定誤差，可能是因為存在個體差異，以及個體對藥物的耐受程度不同。

綜上，ECH對PD大鼠紋狀體及海馬細胞外液中的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量減少具有改善作用，對于PD具有一定的治療作用，這是ECH對PD大鼠腦神經(jīng)保護作用的可能機制之一。

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