食管癌組織中RASSF1A的表達變化及意義

李秀梅，秦炳照，劉 波

(湖北醫(yī)藥學院附屬襄陽醫(yī)院，湖北襄陽441000)

食管癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，據(jù)統(tǒng)計，全球每年大約有30萬食管癌新增病例［1，2］。食管癌的發(fā)生、發(fā)展是多基因、多因素共同參與的過程。Ras相關(guān)區(qū)域家族1A(RASSF1A)是2000年發(fā)現(xiàn)的新型候選腫瘤抑制基因(TSG)，其在調(diào)節(jié)細胞周期和細胞凋亡方面具有重要作用，在肺、乳腺、腎、消化系統(tǒng)等部位的癌組織中存在不同程度的表達缺失［3～5］。本研究通過檢測RASSF1A在食管癌組織中的表達，進一步探討其在食管癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2013年1～12月湖北醫(yī)藥學院附屬襄陽醫(yī)院住院并接受開放手術(shù)治療的120例食管癌患者的癌組織及其相應(yīng)的癌旁正常組織(距腫瘤邊緣8 cm以上，并經(jīng)病理檢查排除腫瘤累及)，術(shù)前均未行任何抗癌藥物治療或放療。其中，男94例，女26例;年齡 43～83歲，中位年齡為 63歲;TNM分期(UICC-AJCC，2003)Ⅰ～Ⅱ期53例，Ⅲ～Ⅳ期67例;分化程度分為高、中、低分化各40例;均經(jīng)組織病理學檢查確診。

1.2 方法

1.2.1 RASSFIA檢測方法 所有標本常規(guī)用甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片;HE染色，光鏡觀察分級和分期。采用免疫組化 SP法，羊抗人RASSF1A多克隆抗體購于北京中山生物技術(shù)公司，按說明書操作。2名醫(yī)師雙盲法觀察切片，細胞質(zhì)呈棕黃色染色為RASSF1A陽性細胞。陽性細胞所占百分比計分:＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色強弱計分:無色0分，淡黃色1分，黃色2分，棕褐色3分。陽性細胞百分比與染色強度計分的乘積0～2為陰性，3～8分為陽性，9～12分為強陽性。陽性、強陽性均判為陽性表達。

1.2.2 統(tǒng)計學方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 RASSF1A在食管癌及其癌旁正常組織中的表達 RASSF1A在食管癌及其癌旁正常組織中的陽性表達率分別為 50.08%(61/120)、91.60%(110/120)，P ＜0.01。

2.2 RASSF1A表達與食管癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 RASSF1A陽性表達與食管癌的TNM分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P均＜0.05)，見表1。

表1 RASSF1A表達與食管癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

3 討論

食管癌的發(fā)生、發(fā)展是多基因改變、多階段變異累積的復(fù)雜病理過程，患者就診時多屬中、晚期。因此，要改善食管癌患者的預(yù)后，早期診斷是相當重要的。RASSF1A是2000年報道從3號染色體短臂克隆出來的肺癌新型候選抑癌基因，其作為抑癌基因的具體機制尚不清楚。目前已證實［6～9］，Ras-GTPase是調(diào)節(jié)增殖與凋亡的分子開關(guān)超家族一員，它的不同功能取決于細胞外的信號分子;由此，活化的Ras可能因與一系列不同的下游效應(yīng)分子相互作用而發(fā)揮兩種截然不同的功能，既可以促進細胞生長和分化，又可通過誘發(fā)細胞休眠，誘導(dǎo)終末分化和凋亡來抑制細胞生長。Lee等［10］用甲基化特定PCR法檢測正常結(jié)腸組織、結(jié)腸腺瘤、結(jié)直腸癌，發(fā)現(xiàn)RASSF1A CpG島甲基化在結(jié)直腸癌灶很頻繁，遠比癌灶旁及癌遠隔部位的甲基化概率高。有研究［11～15］發(fā)現(xiàn)，食管癌細胞、食管癌組織、胃癌細胞、原發(fā)性胃癌組織及膀胱癌細胞中RASSF1A明顯甲基化，且甲基化程度與臨床分期相關(guān)，進一步表明RASSF1A的表達失活部分是由RASSF1A啟動子區(qū)CpG島的高甲基化所引起的。本研究顯示，RASSF1A蛋白表達與食管癌TNM分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P均＜0.05)。因此，該基因有望在多種腫瘤的早期診斷和篩選中發(fā)揮重大作用，為消化道腫瘤早期診斷、預(yù)后判斷和干預(yù)治療提供新思路。

［1］Jenkins TD，F(xiàn)riedman LS.Adenocarcinoma of the esophagogastric junction［J］.Dig Dis，1999，17(3):153-162.

［2］Parkin DM.Global cancer statistics in the year 2000［J］.Lancet Oncol，2001，2(9):533-543.

［3］Dammann R，Schagdarsurengin U，Seidel C，et al.The tumor suppressor RASSF1A in hunman carcinogenesis:an update［J］.Histol Histopathol，2005，20(2):645-663.

［4］Dammann R，Li C，Yoon JH，et al.Epigenetic inactivation of a RAS association domain family protein from the lung tumor suppressor locus 3p21.3［J］.Nat Genet，2000，25(3):315-319.

［5］Hamilton DW，Lusher ME，Lindsey JC，et al.Epigenetic inativation of the RASSF1A tumour suppressor gene in ependymoma［J］.Cancer Lett，2005，227(1):75-81.

［6］Dammann R，Schagdarsurengin U，Strunnikova M，et al.Epigenetic inactivation of the Ras-association domain family 1(RASSF1A)gene and its function in human carcinogenesis［J］.Histol Histopathol，2003，18(2):665-677.

［7］Liu L，Tommasi S，Lee DH，et al.Control of microtubule stability by the RASSF1A tumor suppressor［J］.Oncogene，2003，22(50):8125-8136.

［8］Strunnikova M，Schagdarsurengin U，Kehlen A，et al.Chromatin inactivation precedes de novo DNA methylation during the progressive epigenetic silencing of the RASSF1A promoter［J］.Mol Cell Biol，2005，25(10):3923-3933.

［9］Chow LS，Lo KW，Kwong J，et al.RASSF1A is a target tumor suppressor from 3p21.3 in nasopharyngeal carcinoma［J］.Int J Cancer，2004，109(6):839-847.

［10］Lee S，Hwang KS，Lee HJ，et al.Aberrant CpG island hypermethylation of multiple genes in colorectal neoplasia［J］.Lab Invest，2004，87(4):884-893.

［11］Kuroki T，Trapasso F，Yendamuri S，et al.Allele loss and promoter hypermethylation of VHL，RAR-beta，RASSF1A，and FHIT tumor suppressor genes on chromosome 3p in esophageal squamous cell carcinoma［J］.Cancer Res，2003，63(13):3724-3728.

［12］Kuroki T，Trapasso F，Yendamuri S，et al.Promoter hypermethylation of RASSF1A in esophageal squamous cell carcinoma［J］.Clin Cancer Res，2003，9(4):1441-1445.

［13］Byun DS，Lee MG，Chae KS，et al.Frequent epigenetic inactivation of RASSF1A by aberrant promoter hypermethylation in human gastric adenocarcinoma［J］. Cancer Res，2001，61(19):7034-7038.

［14］Lee MG，Kim HY，Byun DS，et al.Frequent epigenetic inactivation of RASSF1A in human bladder carcinoma［J］.Cancer Res，2001，61(18):6688-6692.

［15］Hoque MO，Begum S，Topaloglu O，et al.Quantitative detection of promoter hypermethylation of multiple genes in the tumor，urine，and serum DNA of patientswith renal cancer［J］.Cancer Res，2004，64(15):5511-5517.