地格達(dá)-4對(duì)酒精性脂肪肝模型大鼠氧化指標(biāo)的影響*

烏日?qǐng)D那順 包納日斯

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京 100029；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110）

依據(jù)酒精性脂肪肝發(fā)病過程中的臨床癥狀，從蒙醫(yī)學(xué)理論角度可將其分為3個(gè)階段，即初期、中期和晚期。初期屬蒙醫(yī)學(xué)“未消毒癥”范疇，是因?yàn)殚L(zhǎng)期大量服用酒精而導(dǎo)致胃中毒，出現(xiàn)惡心、嘔吐、泛酸、食欲減退，胃部出現(xiàn)燒灼感等“希拉”增盛性癥狀。而中期和晚期屬“通拉嘎未消癥”范疇，主要出現(xiàn)非正常性脂肪過盛相關(guān)的癥狀和體征，如腹部肥胖、四肢消瘦、食欲減退、面色灰暗、乏力等。地格達(dá)-4是治療希拉增盛性疾病的代表性方藥［1］，有抑“希拉”之功效，主治“希拉”增盛所致的胃脘疼痛等癥。因此將其選定為自然科學(xué)基金課題 “蒙醫(yī)三根調(diào)節(jié)法及其代表性方劑對(duì)酒精性脂肪肝的作用機(jī)制研究”當(dāng)中調(diào)節(jié)“三根”之一“希拉”的代表性方劑。本次試驗(yàn)旨在觀察地格達(dá)-4影響酒精性脂肪肝相關(guān)指標(biāo)而發(fā)揮調(diào)節(jié)“希拉”作用的機(jī)理，從而為系統(tǒng)闡明蒙醫(yī)三根法治療酒精性脂肪肝的作用機(jī)理奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 雄性Wistar大鼠，80只，體質(zhì)量150～170 g。動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK-（軍 2012-0004）。

1.2 試藥與儀器 地格達(dá)-4［主要成分為肋柱花、沙蓬、肉豆蔻、梔子，由國(guó)家蒙藥制劑中心內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院制劑室提供，批準(zhǔn)號(hào)：呼衛(wèi)注字（97）001-013］，硫普羅寧片（山西云中制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字 H20093445）， 超氧化物歧化酶 （SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-px）試劑盒（由上海滬尚生物科技有限公司提供），酶標(biāo)儀。

1.3 分組與造模 大鼠隨機(jī)分為2組，空白組15只，以蒸餾水每日0.5 mL/100 g連續(xù)灌胃8周；造模組65只，以56°白酒逐步增加酒精量灌胃，前3 d稀釋為15%的酒精含量以0.5 mL/100 g灌胃，再稀釋為30%酒精含量灌胃3 d，其后增加到45%的酒精含量灌胃8周［2-3］。8周后空白和造模組每組隨機(jī)選取3只鼠處死后取肝臟，制成肝組織病理切片，顯微鏡下觀察，判定是否造模成功。然后將成模大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、硫普羅寧組和地格達(dá)-4高、中、低劑量組。

1.4 給藥方法 空白組和模型對(duì)照組以1%羧甲基纖維素鈉溶液每日0.5 mL/100 g連續(xù)灌胃4周；地格達(dá)-4 高、中、低劑量組分別用 1400、700、350 mg/kg的地格達(dá)-4，以1%羧甲基纖維素鈉溶液配制成混懸溶液后每日0.5 mL/100 g連續(xù)灌胃4周；硫普羅寧組用40 mg/kg的硫普羅寧片研磨后以1%羧甲基纖維素鈉溶液配制成混懸溶液，每日0.5 mL/100 g連續(xù)灌胃4周；同時(shí)繼續(xù)造模。

1.5 標(biāo)本采集與檢測(cè) 4周后各組同時(shí)禁食不禁水16 h，用20%烏拉坦0.5 mL/100 g腹腔注射麻醉，開腹，腹主動(dòng)脈采血，3000 r/min離心，取血清，-20℃冷藏備用；取肝組織用錫紙包裹-80℃冷藏備用。肝組織制成勻漿，2000 r/min離心10min，取上清液；-20℃冰箱內(nèi)取出血清，自然融化，然后用酶標(biāo)儀檢測(cè)SOD、MDA、GSH-px等指標(biāo)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。計(jì)量資料以（）表示，各組間數(shù)據(jù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P＜0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 地格達(dá)-4對(duì)各組大鼠肝組織SOD、MDA的影響見表1。除地格達(dá)-4低劑量組外，其余各組肝組織SOD、MDA水平與模型組比較，均有顯著差異 （P＜0.01）；地格達(dá)-4中劑量組和疏普羅寧組肝組織SOD、MDA與地格達(dá)-4高劑量組比較有顯著差異 （P＜0.01）。

表1 各組大鼠肝組織SOD、MDA水平比較（mmol/g，）

表1 各組大鼠肝組織SOD、MDA水平比較（mmol/g，）

與模型對(duì)照組比較，△P＜0.01；與地格達(dá)-4高劑量組比較，☆P＜0.01。下同。

2.2 地格達(dá)-4對(duì)各組大鼠肝組織和血清中GSH-px的影響 見表2。除地格達(dá)-4低劑量外組，其余各組肝組織和血清中GSH-px水平與模型對(duì)照組比較，均有顯著差異（P＜0.01）；而且地格達(dá)-4中劑量組與高劑量組比，肝組織和血清中GSH-px也有顯著差異（P＜0.01）。

表2 各組大鼠肝組織和血清中GSH-px水平比較（）

表2 各組大鼠肝組織和血清中GSH-px水平比較（）

2.3 地格達(dá)-4對(duì)各組大鼠血清SOD、MDA的影響見表3?？瞻捉M、硫普羅寧組、地格達(dá)-4高、中劑量組血清SOD、MDA水平與模型對(duì)照組比較，均有顯著差異（P＜0.01）；并且地格達(dá)-4中劑量組與高劑量組比兩項(xiàng)指標(biāo)也有顯著差異（P＜0.01）；而地格達(dá)-4低劑量組與模型對(duì)照組比，只有血清MDA有顯著差異 （P＜0.01）。

表3 各組大鼠血清SOD、MDA水平比較（mmol/L，）

表3 各組大鼠血清SOD、MDA水平比較（mmol/L，）

3 討 論

SOD、CSH-px和MDA在酒精性脂肪肝的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸當(dāng)中起著非常重要的作用。有研究表明［4］，自由基增加、肝細(xì)胞過度氧化是發(fā)生酒精性脂肪肝的關(guān)鍵所在。因?yàn)橐胰┖妥杂芍舅釢舛鹊脑黾涌纱龠M(jìn)過氧化物酶體β的氧化，釋放大量的高活性自由基，這些使脂質(zhì)過氧化，細(xì)胞膜過氧化，釋放4-羥基壬烯醛（NXN）和MDA。其中NXN趨化中性粒細(xì)胞產(chǎn)生炎癥，MDA則作用與核因子NF-κB，使致炎因子表達(dá)，釋放白介素-8、細(xì)胞間黏附分子-1和腫瘤壞死因子-α等。同時(shí)NXN和MDA均可與細(xì)胞內(nèi)其他蛋白發(fā)生交聯(lián)，形成酒精性透明小體，二者又可激活貯脂細(xì)胞而形成脂肪肝，還能促進(jìn)膠原纖維的合成，形成纖維化，甚至肝硬化。而SOD則能催化氧自由基歧化反應(yīng)，清除自由基，使細(xì)胞免受損傷。SOD可催化O2-生成O2和H2O2，H2O2則由 CSH-px 進(jìn)一步催化，變成 O2和 H2O2，從而防止體內(nèi)自由基引起膜脂質(zhì)過氧化［5］。而MDA則為脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，它具有強(qiáng)毒力性，與枯否細(xì)胞及肝細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子一起介導(dǎo)肝細(xì)胞死亡、Mallory小體形成、肝星狀細(xì)胞活化和肝纖維化形成等等，因此，升高SOD含量、降低和清除MDA對(duì)阻斷脂肪肝的形成與發(fā)展極其重要［6］。

而本研究結(jié)果表明地格達(dá)-4能顯著升高酒精性脂肪肝模型大鼠血清和肝組織當(dāng)中的SOD和CSH-px，同時(shí)能顯著降低MDA的含量。這提示地格達(dá)-4具有抗氧化作用，它是通過增高SOD和CSH-px，降低MDA而起到保護(hù)肝細(xì)胞氧化損傷的。并且從研究結(jié)果可以得知對(duì)于血清SOD的作用，中劑量地格達(dá)-4優(yōu)于高劑量地格達(dá)-4，而低劑量地格達(dá)-4則對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)幾乎無作用。對(duì)于肝組織中SOD的作用，高劑量地格達(dá)-4優(yōu)于中劑量地格達(dá)-4，也優(yōu)于硫普羅寧。而對(duì)于肝組織中CSH-px的作用，中劑量地格達(dá)-4則優(yōu)于高劑量地格達(dá)-4，對(duì)MDA的作用兩者則相同。因此綜合考量上屬結(jié)果，中劑量地格達(dá)-4應(yīng)作為首選治療劑量，也就是相當(dāng)于人體的常規(guī)劑量。

綜上所述，地格達(dá)-4具有確切的抗肝細(xì)胞氧化損傷的作用?？寡趸?、清除自由基是地格達(dá)-4治療酒精性脂肪肝的主要作用機(jī)理之一，并且從蒙醫(yī)學(xué)理論角度看，地格達(dá)-4是治療“希拉”增盛性疾病的代表性方藥。酒精性脂肪肝則是由辛辣、熱性物質(zhì)酒精引發(fā)的，屬“齊素、希拉”增盛性、熱性疾病范疇。從而可以推斷出“希拉”增盛與體內(nèi)自由基增多、發(fā)生氧化反應(yīng)成正相關(guān)關(guān)系，有待進(jìn)一步研究闡明。

［1］楊·阿敏.方劑學(xué)［M］.沈陽：遼寧民族出版社，1995：174.

［2］張偉.大 鼠酒精性脂肪肝模型的建立［J］.安徽醫(yī)藥，2012，16（7）：885.

［3］羅先欽，徐曉玉，黃崇剛，等.決明子總蒽醌對(duì)酒精性脂肪肝大鼠肝組織脂質(zhì)過氧化與PPAR-γ表達(dá)的影響［J］.中國(guó)中藥雜志，2012，36（12）：1654-1659.

［4］瑪·安巴嘎，博·薩仁琪琪格.赫依-希拉-巴達(dá)干與細(xì)胞膜的關(guān)系（新蒙文版）［M］.烏蘭巴托：蒙古國(guó)烏蘭巴托出版社，2002：65-69.

［5］楊牧祥，張一昕，耿蘭書，等.脂肝泰膠囊對(duì)高脂血癥性脂肪肝患者和的影響［J］.河北中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2002，17（4）：1.

［6］梅全喜，孔祥廉，鐘希文，等.昆藻調(diào)脂膠囊對(duì)高脂血癥脂肪肝大鼠血清和肝組織及含量的影響［J］.中醫(yī)藥學(xué)刊，2006，24（11）：2031.