前裂長(zhǎng)管繭蜂低溫儲(chǔ)存技術(shù)的研究

龍秀珍，陳科偉，冼繼東，陸永躍，曾 玲*

(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲生態(tài)研究室，廣州 510642;2.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，南寧 530007)

前裂長(zhǎng)管繭蜂Diachasmimorpha longicaudata(Ashmead) 屬膜翅 目 Hymenoptera、繭蜂科Braconidae、潛蠅繭蜂亞科Opiinae、閉口繭蜂屬Diachasmimorpha，是許多重大實(shí)蠅類害蟲，如桔小實(shí)蠅Bactrocera dorsalis (Hendel)、地中海實(shí)蠅Ceratitis capitata (Wiedemann)、南美按實(shí)蠅Anastrepha fraterculus (Wiedemann)、加勒比按實(shí)蠅Anastrepha suspensa (Loew) 西印度按實(shí)蠅Anastrepha oblique 等幼蟲-蛹期的重要寄生性天敵(Wong et al.，1987;Baranowski et al.，1993;Montoya et al.，2000;Carvalho，2005)。該蜂原產(chǎn)于印度-太平洋地區(qū)，1947-1952年由夏威夷從馬來西亞-菲律賓地區(qū)引進(jìn)用于防治桔小實(shí)蠅(Clausen et al.1965)。由于其良好的控制效果且容易飼養(yǎng)繁殖，被許多國(guó)家和地區(qū)相互引進(jìn)用于實(shí)蠅類害蟲的生物防治，并且取得良好的控制效果(Baranowski et al.，1993;Sivinski et al.，1996;Montoya et al.，2000)。

本研究室自2004年從泰國(guó)引進(jìn)前裂長(zhǎng)管繭蜂后已在室內(nèi)大量繁殖并應(yīng)用于田間防治桔小實(shí)蠅。寄生蜂的大規(guī)模繁殖是田間應(yīng)用釋放的前提，而低溫儲(chǔ)存是釋放前進(jìn)行寄生蜂儲(chǔ)備和運(yùn)輸?shù)挠行Х椒?，使得田間大面積釋放工作能夠有計(jì)劃地進(jìn)行。國(guó)外對(duì)于前裂長(zhǎng)管繭蜂的室內(nèi)飼養(yǎng)技術(shù)比較成熟(Cancino et al.，2006)，而關(guān)于該蜂低溫儲(chǔ)存方面的報(bào)道卻很少，僅Baeza et al.(2002)報(bào)道了短時(shí)低溫處理成蟲對(duì)其壽命和繁殖力的影響。國(guó)內(nèi)對(duì)該蜂的研究主要是對(duì)室內(nèi)繁殖技術(shù)及基礎(chǔ)生物學(xué)方面(邵屯等，2008;邵屯等，2009;張南南，2009)。因此，對(duì)前裂長(zhǎng)管繭蜂的低溫儲(chǔ)存技術(shù)進(jìn)行研究，確定其最適宜儲(chǔ)存的蟲態(tài)、溫度及時(shí)間，可為繁蜂和田間大量釋放提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 供試寄主與蜂種

桔小實(shí)蠅和前裂長(zhǎng)管繭蜂的來源及飼養(yǎng)方法參照邵屯等(2008)的方法。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 不同生長(zhǎng)階段的前裂長(zhǎng)管繭蜂在5℃條件下儲(chǔ)存不同時(shí)間對(duì)羽化率的影響

養(yǎng)蟲室溫度:(26 ±1)℃，RH:(70 ±5)%，光照L ∶D=14 h ∶10 h，將剛羽化的前裂長(zhǎng)管繭蜂引入養(yǎng)蟲籠(30 cm×30 cm×30 cm)中飼養(yǎng)，每天添加濃度為15%蜂蜜水供其取食，飼養(yǎng)密度為每籠500 對(duì)左右。羽化三天后前裂長(zhǎng)管繭蜂處于產(chǎn)卵盛期，接入適量二、三齡桔小實(shí)蠅幼蟲供其寄生，8 h 后取出幼蟲讓其入沙化蛹，24 h 化蛹完畢后挑取被寄生的蛹(剔除被多次寄生的蛹)裝入試管內(nèi)，每管30 粒。分別放置1、3、5、7、9 和12 d 后將蛹放入冰箱，冷藏溫度控制在 (5 ±1)℃，每3 天作為一個(gè)儲(chǔ)藏時(shí)間(即3、6、9 和12 d)處理，以未作冷藏的前裂長(zhǎng)管繭蜂作為對(duì)照，每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)。冷藏相應(yīng)的時(shí)間后將冷藏的蛹取出置于飼養(yǎng)室，每天觀察記錄前裂長(zhǎng)管繭蜂的羽化情況。

1.2.2 不同儲(chǔ)存溫度-時(shí)間組合對(duì)前裂長(zhǎng)管繭蜂生長(zhǎng)發(fā)育及繁殖的影響

根據(jù)1.2.1 試驗(yàn)結(jié)果，選擇將被寄生12 日的桔小實(shí)蠅蛹(未被寄生的桔小實(shí)蠅已羽化)裝入試管內(nèi)，每管30 粒，分別置于2、5、8、11、14℃條件下儲(chǔ)存3、6、9 及12 d，共20個(gè)組合處理，每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)。儲(chǔ)存相應(yīng)的時(shí)間后將桔小實(shí)蠅蛹取出置于飼養(yǎng)室，每天觀察記錄前裂長(zhǎng)管繭蜂的羽化情況。以未經(jīng)儲(chǔ)存的前裂長(zhǎng)管繭蜂作為各對(duì)照。

當(dāng)處理的前裂長(zhǎng)管繭蜂羽化并充分交配24 h后，將雌蜂、雄蜂按1∶1的比例引入自制的圓柱形塑料養(yǎng)蟲籠(D:16 cm，H:33 cm)，每籠20對(duì)，每天添加15%蜂蜜水，同時(shí)接入適量適齡桔小實(shí)蠅幼蟲供其寄生。將每天寄生的幼蟲按正常繁蜂程序飼養(yǎng)，分別做好標(biāo)記，直至羽化出蜂。及時(shí)觀察記錄前裂長(zhǎng)管繭蜂的壽命、繁殖子代數(shù)和子代性比。每處理3個(gè)重復(fù)。

1.3 數(shù)據(jù)處理及分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 14.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。種群趨勢(shì)指數(shù)(Index of population trend，I)的計(jì)算方法參照龐雄飛和梁廣文(1995):I=N1/N0=SESSSLSPFPFP♀。

其中:N1、N0為下代、當(dāng)代卵量;SE、SS、SL、SP分別為卵、低齡幼蟲、高齡幼蟲和蛹的存活率;F為雌蟲標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)卵量;PF為達(dá)標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)卵量的概率;P♀為成蟲雌蟲比率;SESSSLSP=羽化率;FPF=實(shí)際寄生卵量。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同生長(zhǎng)階段的前裂長(zhǎng)管繭蜂在5℃條件下儲(chǔ)存不同時(shí)間對(duì)羽化率的影響

在儲(chǔ)存相同時(shí)間的情況下，隨著蟲態(tài)日齡的增加，前裂長(zhǎng)管繭蜂的羽化率不斷增高;相同日齡的前裂長(zhǎng)管繭蜂隨著儲(chǔ)藏時(shí)間的延長(zhǎng)，其羽化率逐漸降低，甚至不羽化(表1)。

低溫對(duì)卵期(1 日齡)及低齡幼蟲期(3-5日齡)前裂長(zhǎng)管繭蜂的發(fā)育影響極大，冷藏3 d 后只有少部分前裂長(zhǎng)管繭蜂羽化，其羽化率分別為6.67%、9.33%、36.00%。短期的低溫儲(chǔ)藏對(duì)幼蟲中后期(7 日齡)及蛹期(9-12 日齡)前裂長(zhǎng)管繭蜂的影響較小，冷藏3 d 這一處理的羽化率都在50%以上，但隨著冷藏時(shí)間的延長(zhǎng)，羽化率逐漸降低，冷藏至12 d，羽化率均降至20%以下。在所有的處理中，低溫儲(chǔ)存對(duì)12 日齡的前裂長(zhǎng)管繭蜂的影響最小，冷藏3 d 這一處理項(xiàng)的羽化率高達(dá)94.67%，與對(duì)照差異不顯著，冷藏至6 d，其羽化率仍高達(dá)70.00%，但隨后其羽化率急劇下降，冷藏至12 d，羽化率僅為14.00%。

表1 5℃儲(chǔ)存條件下不同日齡前裂長(zhǎng)管繭蜂蛹的羽化率(%)Table 1 Emergence rate of different day-old pupae of Diachasmimorpha longicaudata at 5℃

2.2 不同儲(chǔ)存溫度-時(shí)間組合對(duì)前裂長(zhǎng)管繭蜂生長(zhǎng)發(fā)育及繁殖的影響

2.2.1 不同儲(chǔ)存溫度-時(shí)間組合對(duì)前裂長(zhǎng)管繭蜂羽化率的影響

在相同的儲(chǔ)存時(shí)間下，前裂長(zhǎng)管繭蜂的羽化率隨著溫度的升高而增高。低溫對(duì)前裂長(zhǎng)管繭蜂的發(fā)育影響很大，在2℃條件下儲(chǔ)存3 d，僅有少部分前裂長(zhǎng)管繭蜂能正常羽化，羽化率僅為17.33%，當(dāng)儲(chǔ)存至6 d，前裂長(zhǎng)管繭蜂已不能正常羽化;在5℃和8℃條件下儲(chǔ)存3 d，其羽化率雖均高達(dá)90%以上，但隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，羽化率隨之下降。在11℃和14℃條件下，前裂長(zhǎng)管繭蜂的羽化率受儲(chǔ)存時(shí)間的長(zhǎng)短影響不大，每個(gè)處理的羽化率都高達(dá)90%以上，且與對(duì)照差異不顯著(表2)。

表2 不同溫度-時(shí)間儲(chǔ)存條件下前裂長(zhǎng)管繭蜂的羽化率(%)Table 2 Emergence rate of D.longicaudata stored at different temperatures and periods

2.2.2 不同儲(chǔ)存溫度-時(shí)間組合對(duì)前裂長(zhǎng)管繭蜂繁殖力的影響

圖1 不同溫度-時(shí)間儲(chǔ)存條件下前裂長(zhǎng)管繭蜂的繁殖子代數(shù)和繁殖子代雌蜂數(shù)Fig.1 Offspring and female offspring of D.longicaudata stored at different temperatures and periods

從圖1 可以看出，低溫對(duì)前裂長(zhǎng)管繭蜂的繁殖力影響大，在2℃和5℃條件下各處理羽化出的前裂長(zhǎng)管繭蜂的繁殖子代數(shù)和繁殖子代雌蜂數(shù)都顯著低于對(duì)照。在8℃條件下，前裂長(zhǎng)管繭蜂的繁殖力則受儲(chǔ)存時(shí)間的長(zhǎng)短影響較大，儲(chǔ)存3 d的前裂長(zhǎng)管繭蜂的繁殖子代數(shù)和繁殖子代雌蜂數(shù)都與對(duì)照沒有顯著差異，但隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，其繁殖子代數(shù)和繁殖子代雌蜂數(shù)都急劇下降，明顯低于對(duì)照差異。在11℃條件下，各處理時(shí)間下的前裂長(zhǎng)管繭蜂繁殖子代數(shù)和繁殖子代雌蜂數(shù)都顯著低于對(duì)照。在所有的處理溫度中，14℃儲(chǔ)存條件下的前裂長(zhǎng)管繭蜂的繁殖力與對(duì)照沒有顯著差異，且部分處理的繁殖力參數(shù)甚至超過對(duì)照，如儲(chǔ)存3 d 這一處理的繁殖子代數(shù)以及儲(chǔ)藏6 d 這一處理的繁殖子代雌蜂數(shù)。

2.2.3 不同溫度-時(shí)間儲(chǔ)存條件對(duì)前裂長(zhǎng)管繭蜂子代性比的影響

由表3 可知，2℃儲(chǔ)存條件對(duì)前裂長(zhǎng)管繭蜂的子代性比影響大，處理3 d的前裂長(zhǎng)管繭蜂的雌雄比僅為0.33。在5℃條件下儲(chǔ)存3 d 對(duì)子代性比沒有顯著影響，但隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，子代雌雄比急劇降低。在8℃條件下短期儲(chǔ)存(6 d 內(nèi))對(duì)子代性比沒有顯著影響，但是儲(chǔ)存至第9 d，子代雌雄比急劇下降。在11℃和14℃下的各處理中，除了11℃儲(chǔ)存6 d 和14℃儲(chǔ)存6 d 及9 d 這三個(gè)處理的子代雌雄比顯著高于對(duì)照外，其他與對(duì)照沒有顯著差異。這表明，適當(dāng)?shù)牡蜏靥幚聿坏粫?huì)降低子代雌雄比例，反而可以增加子代雌性概率。

表3 不同溫度-時(shí)間儲(chǔ)存條件下前裂長(zhǎng)管繭蜂的子代性比(雌/雄)Table 3 Sex ratio of the offspring of D.longicaudata stored at different temperatures and periods (female/male)

2.2.4 不同溫度-時(shí)間儲(chǔ)存條件對(duì)前裂長(zhǎng)管繭蜂發(fā)育歷期的影響

在相同的儲(chǔ)存時(shí)間下，隨著溫度的升高，前裂長(zhǎng)管繭蜂雌、雄蜂的發(fā)育歷期都逐漸縮短;在相同的溫度下，隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，前裂長(zhǎng)管繭蜂雌、雄蜂的發(fā)育歷期也都逐漸延(表4、表5)長(zhǎng)。各處理都對(duì)前裂長(zhǎng)管繭蜂的發(fā)育歷期起到了顯著延緩的作用。

表4 不同溫度-時(shí)間儲(chǔ)存條件下前裂長(zhǎng)管繭蜂雄蜂的發(fā)育歷期(d)Table 4 Developmental duration of male D.longicaudata stored at different temperatures and periods

表5 不同溫度-時(shí)間儲(chǔ)存條件下前裂長(zhǎng)管繭蜂雌蜂的發(fā)育歷期(d)Table 5 Developmental duration of female D.longicaudata stored at different temperatures and periods

2.2.5 不同溫度-時(shí)間儲(chǔ)存條件對(duì)前裂長(zhǎng)管繭蜂雌蜂壽命的影響

在相同的處理時(shí)間下，隨著儲(chǔ)存溫度的升高，羽化出的前裂長(zhǎng)管繭蜂雌蜂的壽命隨之緩慢延長(zhǎng)(表6)。但在相同的處理溫度下，儲(chǔ)存時(shí)間的長(zhǎng)短對(duì)羽化出的前裂長(zhǎng)管繭蜂的雌蜂的壽命影響不大。除了在8℃條件下儲(chǔ)存12 d 處理外，在8℃、11℃和14℃條件下各處理羽化出的前裂長(zhǎng)管繭蜂雌蜂的壽命均不短于對(duì)照，并且儲(chǔ)存3 d 這一處理的雌蜂壽命均顯著高于對(duì)照。值得注意的是，在14℃條件下各處理的雌蜂的壽命均顯著長(zhǎng)于對(duì)照。

表6 不同溫度-時(shí)間儲(chǔ)存條件下前裂長(zhǎng)管繭蜂雌蜂的壽命(d)Table 6 Female longevity of D.longicaudata stored at different temperatures and periods

2.3 低溫儲(chǔ)存對(duì)前裂長(zhǎng)管繭蜂種群趨勢(shì)指數(shù)的影響

如圖2 所示，2℃和5℃對(duì)前裂長(zhǎng)管繭蜂的種群趨勢(shì)指數(shù)影響較大，各處理的種群趨勢(shì)指數(shù)均小于10，與對(duì)照的25.16 相比相差較大;8℃下冷藏3 d 和6 d，其種群趨勢(shì)指數(shù)處于較高水平，分別為29.32 和18.86，但冷藏至9 d，種群趨勢(shì)指數(shù)迅速下降至1 以下;11℃對(duì)前裂長(zhǎng)管繭蜂的生長(zhǎng)發(fā)育也有較大影響，該條件下各處理的前裂長(zhǎng)管繭蜂的種群趨勢(shì)指數(shù)均遠(yuǎn)小于對(duì)照;14℃對(duì)12日齡前裂長(zhǎng)管繭蜂的發(fā)育起到了促進(jìn)的作用，冷藏3 d、6 d 和9 d的種群趨勢(shì)指數(shù)分別為26.75、32.85 和27.04，均高于對(duì)照。

圖2 低溫儲(chǔ)存對(duì)前裂長(zhǎng)管繭蜂種群趨勢(shì)指數(shù)的影響Fig.2 Effect of cold storage on the index of population trend of D.longicaudata

3 結(jié)論與討論

低溫儲(chǔ)存對(duì)于不同日齡前裂長(zhǎng)管繭蜂的羽化率影響顯著，結(jié)果顯示卵及低齡幼蟲受低溫影響較大。劉春燕(2005)和張南南(2009)的研究也表明1 日齡、6 日齡前裂長(zhǎng)管繭蜂在低溫條件下羽化率顯著降低;羽化率隨冷藏蟲態(tài)日齡的增加而增大，這與王華玲(2011)對(duì)阿里山潛蠅繭蜂進(jìn)行低溫儲(chǔ)存的結(jié)果類似，本試驗(yàn)中以12 日齡受到的影響最小。12 日齡的前裂長(zhǎng)管繭蜂已發(fā)育至蛹期，并且沒有被寄生的桔小實(shí)蠅也已在第10、11 天羽化完畢，在實(shí)際應(yīng)用中不必考慮未被寄生的桔小實(shí)蠅羽化的問題，所以12 日齡前裂長(zhǎng)管繭蜂是該蜂較適宜進(jìn)行低溫儲(chǔ)存的時(shí)期。

溫度對(duì)前裂長(zhǎng)管繭蜂的羽化率影響較大，隨著儲(chǔ)存溫度的升高羽化率逐漸增大，這與其他寄生蜂的結(jié)果相似(黃山春等，2008;周亞奎等，2011)。同時(shí)，溫度對(duì)儲(chǔ)存的前裂長(zhǎng)管繭蜂的生長(zhǎng)發(fā)育有很大影響，以8℃下儲(chǔ)藏3 d 及14℃下儲(chǔ)存9 d 內(nèi)受到的影響最小，前裂長(zhǎng)管繭蜂的繁殖子代數(shù)、繁殖子代雌蜂數(shù)都沒有降低，甚至還有部分處理值顯著提高，這和細(xì)點(diǎn)扁股小蜂(周亞奎等，2011)在低溫儲(chǔ)存時(shí)的結(jié)果相似，但其中的原因尚未清楚，這有待進(jìn)一步研究。

分析低溫儲(chǔ)存對(duì)寄生蜂品質(zhì)的影響時(shí)，不能僅僅考慮對(duì)羽化率、發(fā)育歷期的影響(張李香等，2008;張南南，2009)而應(yīng)綜合考慮對(duì)羽化率、壽命、活動(dòng)能力、繁殖力、繁殖子代性比等的影響(忻介六，1982)，才能可觀全面地評(píng)價(jià)低溫儲(chǔ)存的效果。以種群系統(tǒng)為理論的生命表技術(shù)可系統(tǒng)地將這些單一的生物學(xué)參數(shù)綜合起來，全面直觀地反映種群的品質(zhì)(陳科偉等，2004)。本文通過種群趨勢(shì)指數(shù)系統(tǒng)地評(píng)價(jià)了低溫儲(chǔ)藏對(duì)前裂長(zhǎng)管繭蜂品質(zhì)的影響，篩選出了最佳冷藏條件，即8℃下儲(chǔ)存3 d 及14℃下儲(chǔ)存9d 以內(nèi)，其種群趨勢(shì)指數(shù)都較對(duì)照稍高，是12 日齡前裂長(zhǎng)管繭蜂的最佳儲(chǔ)存條件。

與其他寄生蜂能夠長(zhǎng)期儲(chǔ)存相比 (茍雪琪，1985;劉青云，1994;張李香等，2008)，前裂長(zhǎng)管繭蜂僅能作短期(9 d 內(nèi))儲(chǔ)存，這對(duì)該蜂的保種及田間大量釋放帶來了不便，在繁殖和實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)根據(jù)需要做好繁蜂和儲(chǔ)存計(jì)劃。

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