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    解淀粉芽孢桿菌Lx—11對水稻細菌性條斑病的防治效果

    2014-11-22 12:53:25張榮勝戴秀華陳志誼
    江蘇農(nóng)業(yè)科學 2014年10期
    關(guān)鍵詞:防治效果水稻

    張榮勝++戴秀華++陳志誼

    摘要:在不同時期噴施解淀粉芽孢桿菌Lx-11,研究生防菌Lx-11對水稻細菌性條斑病的防治效果。試驗結(jié)果表明,生防菌Lx-11具有一定的內(nèi)吸作用,保護作用下對水稻細菌性條斑病的防效為62.7%,顯著高于治療作用下的防效;生防菌Lx-11防治水稻條斑病的最佳防治時期為初發(fā)病期。

    關(guān)鍵詞:解淀粉芽孢桿菌;水稻;細菌性條斑病;防治效果

    中圖分類號: S435.111.4+9文獻標志碼: A文章編號:1002-1302(2014)10-0115-02

    收稿日期:2013-12-20

    基金項目:公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(編號:201303015、201103002-3);江蘇省自然科學基金(編號:BK20130713);江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金[編號:CX(12)3058]。

    作者簡介:張榮勝( 1982—),男,江蘇泗洪人,助理研究員,主要從事水稻細菌病害生物防治研究。E-mail:r_szhang@163.com。

    通信作者:陳志誼,研究員,主要從事水稻病害生物防治研究。E-mail:chzy@jaas.ac.cn。水稻細菌性條斑?。╞acterial leaf streak,BLS)由稻黃單胞菌稻生致病變種(Xanthomonas oryzae pv. oryzicola,Xooc)引起,在我國南方和東南亞稻區(qū)都有發(fā)生,氣候適宜時可導(dǎo)致水稻減產(chǎn)15%~25%,嚴重時可達40%~60%,對水稻的安全生產(chǎn)造成嚴重威脅[1-2]。目前,生產(chǎn)上還未選育出對水稻細菌性條斑病具有抗性的品種,病害防治主要以噻唑類殺菌劑為主,對條斑病的防效僅為50%~60%[3]。

    利用有益微生物防治植物病害具有廣闊的應(yīng)用前景,目前生防菌劑應(yīng)用以活菌制劑為主,在使用過程中受環(huán)境因子和土居微生物等多因素制約,影響防治效果。生防菌在植株上定殖是直接影響生防菌防效的關(guān)鍵因子,人們通過調(diào)控寄主根圍或葉圍微生物的組成及數(shù)量變化,惡化病原菌的生存微環(huán)境,從而抑制或減輕病害,達到促進作物生長的目的[4-6]。B. subtilis SQR9和內(nèi)生菌B3-7能分別在黃瓜和小麥根系定殖成為優(yōu)勢種,有效防治黃瓜枯萎病和小麥全蝕病[7-8];通過采摘前和采摘后使用Bacillus spp.分別處理蘋果葉片和果實,可以有效減少斑點病和炭疽病的發(fā)生[9]。解淀粉芽孢桿菌Lx-11對水稻細菌性條斑病具有良好的防效[10]。試驗通過不同時期噴施解淀粉芽孢桿菌Lx-11,研究該生防菌對水稻細菌性條斑病的防治效果,并進一步探索生防菌Lx-11的使用適期,以為其田間高效應(yīng)用提供科學依據(jù)。

    1材料與方法

    1.1試驗材料

    供試水稻品種為金剛30,為感病品種。供試菌株為生防菌Lx-11、Xooc b5-16,由江蘇省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所生物防治研究室提供,Lx-11菌株用YPG培養(yǎng)基(胰蛋白胨5.0 g,葡萄糖5.0 g,酵母膏5.0 g,水1 000 mL,pH值7.0)或固體培養(yǎng)基YPGA(在YPG培養(yǎng)基基礎(chǔ)上再加入20 g瓊脂)培養(yǎng),Xooc b5-16菌株用協(xié)本氏培養(yǎng)基[11]培養(yǎng)。供試藥劑為20%噻枯唑可濕性粉劑,惠州市中迅化工有限公司生產(chǎn)。

    1.2接種時間和接種方法

    水稻移栽后60 d左右,采用針刺法接種病原菌。挑取1環(huán)新鮮活化的Xoocb5-16,轉(zhuǎn)接到50 mL培養(yǎng)液中,28 ℃、150 r/min 振蕩培養(yǎng)24 h,稀釋100倍,孢子濃度約為 107 CFU/mL;蘸取稀釋病原菌液的接種針穿刺水稻葉片中間部位,每處理接種6穴水稻24張葉片。

    1.3生防菌Lx-11菌液制備

    從保存菌株Lx-11的試管中挑取1環(huán)在YPGA斜面上活化,于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,即得到新鮮活化的Lx-11菌株;挑取1環(huán)轉(zhuǎn)接到含有330 mL YPG培養(yǎng)基的1 L三角瓶中,28 ℃、150 r/min條件下培養(yǎng)48 h,此時菌含量為 109 CFU/mL。

    1.4脂肽類粗提物的提取

    將發(fā)酵液于10 000×g 冷凍離心15 min;取20 mL上清液置于離心管中,25 ℃真空濃縮干燥;在干燥樣品中加入 2 mL 70%甲醇水溶液提取20 min,10 000×g冷凍離心 5 min 獲得甲醇提取液;提取液經(jīng)0.22 μm 尼龍樹脂過濾,濾液即為脂肽類抗菌物質(zhì)的粗提液,在4 ℃冰箱保存待用。

    1.5生防菌Lx-11和脂肽類粗提物不同噴施時期防效測定

    分別于噴施生防菌Lx-11前2 d(水漬狀病斑出現(xiàn),治療作用)、噴施生防菌0 d(噴施水稻中下部位,接種水稻上部葉片,內(nèi)吸作用)和噴施生防菌后1 d(保護作用)接種病原菌Xooc b5-16。噴施Lx-11菌液的濃度為108 CFU/mL,每處理噴霧量40 mL菌液,以噴施空白培養(yǎng)液為對照。噴施生防菌 14 d 后測量條斑病病斑大小,計算防效,公式為:防效=(對照區(qū)病斑長度-處理區(qū)病斑長度)/對照區(qū)病斑長度×100%。

    1.6生防菌Lx-11防治細菌性條斑病田間試驗

    田間小區(qū)試驗于2013年分別在江蘇省泗陽縣高渡鎮(zhèn)和三莊鄉(xiāng)豐產(chǎn)試驗田中進行,水稻品種分別為II優(yōu)0293和Y兩優(yōu)808,均為感病品種。試驗小區(qū)面積為20 m2,每處理重復(fù)3次,小區(qū)隨機排列。Lx-11發(fā)酵液由江蘇省蘇科農(nóng)化有限公司發(fā)酵制成,發(fā)酵液菌含量為6×109 CFU/mL;田間用量為7.5 L/hm2,使用濃度為6×107 CFU/mL。在水稻細菌性條斑病自然發(fā)病初期、田間零星發(fā)病時施藥,間隔10 d左右進行第2次施藥防治,施藥前和初次施藥后21 d,參考張榮勝等分級標準[12],調(diào)查各處理葉片的病情指數(shù),統(tǒng)計防效。每小區(qū)隨機選取4點,每點5穴,調(diào)查水稻植株分蘗最上部3張葉片。病情指數(shù)和防效計算公式分別為:病情指數(shù)= (各級發(fā)病數(shù)×各級代表值)/(調(diào)查總?cè)~片數(shù)×最高級代表值)×100%;防效=[1-(處理區(qū)藥后病情指數(shù)×對照區(qū)藥前病情指數(shù))/(處理區(qū)藥前病情指數(shù)×對照區(qū)藥后病情指數(shù))]×100%。

    1.7數(shù)據(jù)分析

    利用DPS 7.05軟件Duncans新復(fù)極差法進行統(tǒng)計分析。

    2結(jié)果與分析

    2.1生防菌Lx-11對水稻細菌性條斑病的防效

    由表1可見,生防菌Lx-11、脂肽類粗提物在保護作用下,對水稻細菌性條斑病的防效分別為62.7%、47.8%,顯著高于治療作用下的防效,生防菌Lx-11和脂肽類粗提物對水稻細菌性條斑病的防治以保護作用為主,兼顧治療作用;生防菌Lx-11和脂肽類粗提物具有一定的內(nèi)吸作用,對水稻細菌性條斑病的防效分別為37.8%、36.4%,均低于保護作用和治療作用下的防效。

    表1生防菌Lx 11 和脂肽類粗提物對水稻細菌性條斑病的防效

    處理防效(%)Lx-11脂肽類粗提物噴施生防菌Lx-11后1 d(保護作用)62.7a47.8a噴施生防菌Lx-11前2 d(治療作用)45.1b44.7b噴施生防菌Lx-11前0 d(內(nèi)吸作用)37.8b36.4b注:同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著(P<005)。表2同。

    2.2生防菌Lx-11防治水稻細菌性條斑病的田間試驗

    由表2可見,2013年在泗陽縣2個鄉(xiāng)鎮(zhèn)使用生防菌 Lx-11 防治水稻細菌性條斑病的田間防效分別為600%、619%,顯著高于20%噻枯唑可濕性粉劑對水稻細菌性條斑病的防效??梢娚谰鶯x-11在生產(chǎn)中可以替代或部分替代化學農(nóng)藥來防治水稻細菌性條斑病。

    表2生防菌Lx-11防治水稻細菌性條斑病的田間防效

    處理泗陽縣不同地區(qū)的田間防效 (%)高渡鎮(zhèn)三莊鄉(xiāng)生防菌Lx-1161.9a60.0a20%噻枯唑可濕性粉劑55.7b47.2b

    3結(jié)論

    試驗結(jié)果表明,接種病原菌前1 d噴施生防菌Lx-11對水稻細菌性條斑病的防治效果最好,防效為62.7%;當病斑初現(xiàn)時即接種病原菌后2 d再噴施生防菌,防效為45.1%。推測這與水稻細菌性條斑病病菌侵染特性有關(guān),該病菌侵染水稻葉片主要通過氣孔和傷口侵入,在水稻薄壁組織細胞間隙繁殖擴展[1],引起病害迅速蔓延,接種病原菌后2 d再噴施生防菌,由于病原菌進入植株體內(nèi)并擴展,很難起到較好的防治效果。因此,田間應(yīng)用生防菌Lx-11防治水稻細菌性條斑病,最適噴施期應(yīng)在田間零星發(fā)病時,及時大量噴施生防菌Lx-11,利用生防菌占領(lǐng)侵染位點、分泌抗菌物質(zhì)、抑制病原菌生長繁殖、誘導(dǎo)寄主植株產(chǎn)生抗病性[12-13]等來減輕病原菌為害。Jourdan等研究表明,根圍促生菌和產(chǎn)生的脂肽類物質(zhì)能誘導(dǎo)寄主植株產(chǎn)生ISR抵御病原菌入侵[14-15]。本試驗研究表明,生防菌Lx-11能夠誘導(dǎo)水稻植株產(chǎn)生系統(tǒng)抗病性,生防菌和脂肽類粗提物都具有一定的內(nèi)吸作用,脂肽類物質(zhì)能通過誘導(dǎo)水稻防衛(wèi)反應(yīng)基因表達,表現(xiàn)出對水稻細菌性條斑病有一定的防治效果,防效低于40%。田間試驗顯示,在病害初現(xiàn)期使用生防菌Lx-11,能夠有效地防治水稻細菌性條斑病,防效顯著高于常用化學藥劑噻枯唑。

    參考文獻:

    [1]Nio-Liu D,Ronald P C,Bogdanove A J.Xanthomonas oryzae pathovars:model pathogens of a model crop[J]. Molecular Plant Pathology,2006,7(5):303-324.

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    [11]沈素文,劉永鋒,周蘇津,等. 4株拮抗細菌與鏈霉素、葉枯唑協(xié)同控制水稻細菌性條斑病研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學,2010(4):98-100.

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    [15]Henry G,Deleu M,Jourdan E,et al. The bacterial lipopeptide surfactin targets the lipid fraction of the plant plasma membrane to trigger immune-related defence responses[J]. Cellular Microbiology,2011,13(11):1824-1837.

    1.7數(shù)據(jù)分析

    利用DPS 7.05軟件Duncans新復(fù)極差法進行統(tǒng)計分析。

    2結(jié)果與分析

    2.1生防菌Lx-11對水稻細菌性條斑病的防效

    由表1可見,生防菌Lx-11、脂肽類粗提物在保護作用下,對水稻細菌性條斑病的防效分別為62.7%、47.8%,顯著高于治療作用下的防效,生防菌Lx-11和脂肽類粗提物對水稻細菌性條斑病的防治以保護作用為主,兼顧治療作用;生防菌Lx-11和脂肽類粗提物具有一定的內(nèi)吸作用,對水稻細菌性條斑病的防效分別為37.8%、36.4%,均低于保護作用和治療作用下的防效。

    表1生防菌Lx 11 和脂肽類粗提物對水稻細菌性條斑病的防效

    處理防效(%)Lx-11脂肽類粗提物噴施生防菌Lx-11后1 d(保護作用)62.7a47.8a噴施生防菌Lx-11前2 d(治療作用)45.1b44.7b噴施生防菌Lx-11前0 d(內(nèi)吸作用)37.8b36.4b注:同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著(P<005)。表2同。

    2.2生防菌Lx-11防治水稻細菌性條斑病的田間試驗

    由表2可見,2013年在泗陽縣2個鄉(xiāng)鎮(zhèn)使用生防菌 Lx-11 防治水稻細菌性條斑病的田間防效分別為600%、619%,顯著高于20%噻枯唑可濕性粉劑對水稻細菌性條斑病的防效。可見生防菌Lx-11在生產(chǎn)中可以替代或部分替代化學農(nóng)藥來防治水稻細菌性條斑病。

    表2生防菌Lx-11防治水稻細菌性條斑病的田間防效

    處理泗陽縣不同地區(qū)的田間防效 (%)高渡鎮(zhèn)三莊鄉(xiāng)生防菌Lx-1161.9a60.0a20%噻枯唑可濕性粉劑55.7b47.2b

    3結(jié)論

    試驗結(jié)果表明,接種病原菌前1 d噴施生防菌Lx-11對水稻細菌性條斑病的防治效果最好,防效為62.7%;當病斑初現(xiàn)時即接種病原菌后2 d再噴施生防菌,防效為45.1%。推測這與水稻細菌性條斑病病菌侵染特性有關(guān),該病菌侵染水稻葉片主要通過氣孔和傷口侵入,在水稻薄壁組織細胞間隙繁殖擴展[1],引起病害迅速蔓延,接種病原菌后2 d再噴施生防菌,由于病原菌進入植株體內(nèi)并擴展,很難起到較好的防治效果。因此,田間應(yīng)用生防菌Lx-11防治水稻細菌性條斑病,最適噴施期應(yīng)在田間零星發(fā)病時,及時大量噴施生防菌Lx-11,利用生防菌占領(lǐng)侵染位點、分泌抗菌物質(zhì)、抑制病原菌生長繁殖、誘導(dǎo)寄主植株產(chǎn)生抗病性[12-13]等來減輕病原菌為害。Jourdan等研究表明,根圍促生菌和產(chǎn)生的脂肽類物質(zhì)能誘導(dǎo)寄主植株產(chǎn)生ISR抵御病原菌入侵[14-15]。本試驗研究表明,生防菌Lx-11能夠誘導(dǎo)水稻植株產(chǎn)生系統(tǒng)抗病性,生防菌和脂肽類粗提物都具有一定的內(nèi)吸作用,脂肽類物質(zhì)能通過誘導(dǎo)水稻防衛(wèi)反應(yīng)基因表達,表現(xiàn)出對水稻細菌性條斑病有一定的防治效果,防效低于40%。田間試驗顯示,在病害初現(xiàn)期使用生防菌Lx-11,能夠有效地防治水稻細菌性條斑病,防效顯著高于常用化學藥劑噻枯唑。

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    [12]Zhang R S,Liu Y F,Luo C P,et al. Baillus amyloliquefaciens Lx-11—a potential biocontrol agent against rice bacterial leaf streak[J]. Journal of Plant Pathology,2012,94(3):609-619.

    [13]張榮勝,王曉宇,羅楚平,等. 解淀粉芽孢桿菌Lx-11產(chǎn)脂肽類物質(zhì)鑒定及表面活性素對水稻細菌性條斑病的防治作用[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學,2013,46(10):2014-2021.

    [14]Jourdan E,Henry G,Duby F,et al. Insights into the defense-related events occurring in plant cells following perception of surfactin-type lipopeptide from Bacillus subtilis[J]. Molecular Plant-Microbe Interactions,2009,22(4):456-468.

    [15]Henry G,Deleu M,Jourdan E,et al. The bacterial lipopeptide surfactin targets the lipid fraction of the plant plasma membrane to trigger immune-related defence responses[J]. Cellular Microbiology,2011,13(11):1824-1837.

    1.7數(shù)據(jù)分析

    利用DPS 7.05軟件Duncans新復(fù)極差法進行統(tǒng)計分析。

    2結(jié)果與分析

    2.1生防菌Lx-11對水稻細菌性條斑病的防效

    由表1可見,生防菌Lx-11、脂肽類粗提物在保護作用下,對水稻細菌性條斑病的防效分別為62.7%、47.8%,顯著高于治療作用下的防效,生防菌Lx-11和脂肽類粗提物對水稻細菌性條斑病的防治以保護作用為主,兼顧治療作用;生防菌Lx-11和脂肽類粗提物具有一定的內(nèi)吸作用,對水稻細菌性條斑病的防效分別為37.8%、36.4%,均低于保護作用和治療作用下的防效。

    表1生防菌Lx 11 和脂肽類粗提物對水稻細菌性條斑病的防效

    處理防效(%)Lx-11脂肽類粗提物噴施生防菌Lx-11后1 d(保護作用)62.7a47.8a噴施生防菌Lx-11前2 d(治療作用)45.1b44.7b噴施生防菌Lx-11前0 d(內(nèi)吸作用)37.8b36.4b注:同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著(P<005)。表2同。

    2.2生防菌Lx-11防治水稻細菌性條斑病的田間試驗

    由表2可見,2013年在泗陽縣2個鄉(xiāng)鎮(zhèn)使用生防菌 Lx-11 防治水稻細菌性條斑病的田間防效分別為600%、619%,顯著高于20%噻枯唑可濕性粉劑對水稻細菌性條斑病的防效??梢娚谰鶯x-11在生產(chǎn)中可以替代或部分替代化學農(nóng)藥來防治水稻細菌性條斑病。

    表2生防菌Lx-11防治水稻細菌性條斑病的田間防效

    處理泗陽縣不同地區(qū)的田間防效 (%)高渡鎮(zhèn)三莊鄉(xiāng)生防菌Lx-1161.9a60.0a20%噻枯唑可濕性粉劑55.7b47.2b

    3結(jié)論

    試驗結(jié)果表明,接種病原菌前1 d噴施生防菌Lx-11對水稻細菌性條斑病的防治效果最好,防效為62.7%;當病斑初現(xiàn)時即接種病原菌后2 d再噴施生防菌,防效為45.1%。推測這與水稻細菌性條斑病病菌侵染特性有關(guān),該病菌侵染水稻葉片主要通過氣孔和傷口侵入,在水稻薄壁組織細胞間隙繁殖擴展[1],引起病害迅速蔓延,接種病原菌后2 d再噴施生防菌,由于病原菌進入植株體內(nèi)并擴展,很難起到較好的防治效果。因此,田間應(yīng)用生防菌Lx-11防治水稻細菌性條斑病,最適噴施期應(yīng)在田間零星發(fā)病時,及時大量噴施生防菌Lx-11,利用生防菌占領(lǐng)侵染位點、分泌抗菌物質(zhì)、抑制病原菌生長繁殖、誘導(dǎo)寄主植株產(chǎn)生抗病性[12-13]等來減輕病原菌為害。Jourdan等研究表明,根圍促生菌和產(chǎn)生的脂肽類物質(zhì)能誘導(dǎo)寄主植株產(chǎn)生ISR抵御病原菌入侵[14-15]。本試驗研究表明,生防菌Lx-11能夠誘導(dǎo)水稻植株產(chǎn)生系統(tǒng)抗病性,生防菌和脂肽類粗提物都具有一定的內(nèi)吸作用,脂肽類物質(zhì)能通過誘導(dǎo)水稻防衛(wèi)反應(yīng)基因表達,表現(xiàn)出對水稻細菌性條斑病有一定的防治效果,防效低于40%。田間試驗顯示,在病害初現(xiàn)期使用生防菌Lx-11,能夠有效地防治水稻細菌性條斑病,防效顯著高于常用化學藥劑噻枯唑。

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