血清Glypican－3聯(lián)合AFP對肝癌患者的診斷效果

李志陽，李歆，楊素冰，丘熙廉（.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院輸血科，廣州 50095；.中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗醫(yī)學(xué)部，廣州 50080）

2008年世界衛(wèi)生組織資料顯示肝癌發(fā)病率在所有腫瘤中位于第5位，其病死率為第3位，并且兩者均有逐年上升的趨勢［1］。目前切除術(shù)仍是外科治療肝癌最常用的方法，但由于大多數(shù)肝癌患者就診時已經(jīng)是中期或晚期，最佳手術(shù)切除的時機已經(jīng)錯過，因此影響肝癌治療及預(yù)后的關(guān)鍵就是早發(fā)現(xiàn)［2］。目前甲胎蛋白（AFP）是肝癌診斷中應(yīng)用最廣泛的一種腫瘤標(biāo)記物，但AFP在肝癌患者中敏感度很低，其特異性也不高，特別是在早期肝癌患者中陽性率更低，因此AFP作為肝癌的早期確診方法并不是很理想，當(dāng)前尋找新的腫瘤標(biāo)記物已迫在眉睫。磷脂酰肌醇蛋白聚糖－3（Glypican－3）已成為國內(nèi)外醫(yī)學(xué)者研究的熱點，Glypican－3是細(xì)胞膜表面的一種蛋白聚糖，在正常人體的肝臟及肝炎患者中均不表達(dá)，但是在肝癌患者的在肝細(xì)胞中呈高表達(dá)［3］。本研究以110例就診的肝病患者及40例健康體檢者的血清為研究對象，探討Glypican－3和AFP 對肝癌患者的診斷效果，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2012年1月至2013年12月廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院和中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院收治的110例肝病患者，其中肝癌患者42例（均為初發(fā)，且均沒有經(jīng)過任何抗癌治療），男29例，女13例，年齡35～69歲，平均49.9歲。肝硬化患者24例，男14例，女10例，年齡36～58歲，平均32.8歲。肝炎患者44例，男28例，女16例，年齡29～62歲，平均45.5歲。所有患者均經(jīng)影像學(xué)、病理學(xué)和實驗室明確診斷。另收集健康體檢者的血清40例，年齡26～45歲，為同期健康體檢的肝功能生化指標(biāo)檢測均正常者。

1.2 方法所有研究對象均抽取5 mL 清晨空腹外周靜脈血；4000r／min，離心10 min 后，分離出血清，然后放置于－80℃保存，集中檢測。檢測前將血清標(biāo)本拿出解凍并混勻。血清Glypican－3檢測：按美國BioMosaics公司提供的酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒的說明書進(jìn)行操作，并在瑞士TECAN F50多功能酶標(biāo)儀上進(jìn)行分析［4］。每例待測血清重復(fù)3個孔，取平均值。采用試劑盒提供標(biāo)準(zhǔn)品實驗，分6個濃度梯度，即0、50、150、450、1350和4050pg／mL。以標(biāo)準(zhǔn)品為自變量，以其對應(yīng)的吸光值為應(yīng)變量作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出每例血清樣品中Glypican－3濃度。正常參考值為：1.56～6.08pg／mL。血清AFP檢測：每例受試者取250μL 的血清樣品，應(yīng)用美國ARCHITECT i2000全自動免疫發(fā)光儀、相應(yīng)的檢測AFP試劑盒及其說明書來檢測血清中AFP 水平。正常參考值為3.09～5.21ng／mL。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理，計量資料采用來表示，組內(nèi)均數(shù)間比較使用t檢驗，陽性率比較采用χ2檢驗，組間均數(shù)比較使用單因素的方差分析（One－way ANOVA），雙變量計量資料的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4組研究對象血清Glypican－3及AFP 的表達(dá)水平Glypican－3在肝癌患者血清中的表達(dá)水平明顯高于肝硬化組、肝炎組及健康對照組的患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；AFP在肝癌組及肝硬化組患者血清中的表達(dá)水平均高于肝炎組及健康對照組患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 4組研究對象血清中的Glypican－3及AFP的表達(dá)水平（）

表1 4組研究對象血清中的Glypican－3及AFP的表達(dá)水平（）

注：與肝癌組相比，aP＜0.05；與肝硬化組相比，b P＜0.05。

2.2 Glypican－3、AFP及Glypican－3和AFP 的特異性與敏感性 Glypican－3和AFP 的值大于試劑盒規(guī)定的正常值（AFP＞20ng／mL，Glypican－3＞60pg／mL）均為陽性。42例肝癌患者血清Glypican－3和AFP 兩者聯(lián)合檢測敏感性（85.71%）明顯高于Glypican－3（76.19%）或AFP 單項檢測的敏感性（61.90%），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。40例健康患者血清Glypican－3與AFP 聯(lián)合檢測的特異性（95.00%）明顯高于Glypican－3（85.00%）或AFP單項檢測的特異性（82.50%），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

表2 Glypican－3、AFP及二者聯(lián)合檢測的特異性與敏感性

3 討論

早期診斷和早治療是診治肝細(xì)胞癌的關(guān)鍵，AFP 廣泛應(yīng)用于肝細(xì)胞癌的普查、診斷及判斷預(yù)后［5］。Glypican－3作為Glypican家族中的一員，其氨基端的可溶性片段可被分泌到細(xì)胞外并且能被檢測到，因此Glypican－3在臨床肝細(xì)胞癌患者的血清中的水平是否存在一定的價值值得研究［6］。熊波［7］報道，在區(qū)分肝癌與肝良性疾病方面，Glypican－3顯示了良好的診斷價值。本研究通過分析110例就診的肝病患者和40例健康對照者的血清中Glypican－3和AFP的表達(dá)情況，探討Glypican－3聯(lián)合AFP對肝癌患者的診斷價值。

本研究結(jié)果顯示，肝細(xì)胞癌患者血清中Glypican－3的表達(dá)水平明顯增高，顯著高于肝硬化組、肝炎組及健康對照組，這結(jié)果與江楓等［8］的研究結(jié)果一致，這一結(jié)果提示Glypican－3蛋白作為一個肝癌的特異性的標(biāo)記物，在肝細(xì)胞發(fā)生癌變時在惡性癌細(xì)胞內(nèi)有穩(wěn)定的表達(dá)。本研究中AFP在肝癌組及肝硬化組血清中的表達(dá)水平均高于肝炎組及健康對照組，但是在肝硬化患者的血清中AFP的表達(dá)水平明顯低于肝癌患者，這結(jié)果與文獻(xiàn)［9］的結(jié)果有些出入，分析原因可能是由于試驗中所規(guī)定的界限值不同有關(guān)，也可能與本研究所選的對象所處階段及病例數(shù)有關(guān)。這一結(jié)果也提示在肝癌診斷方面，Glypican－3蛋白的特異性高于AFP。本研究結(jié)果還顯示，Glypican－3聯(lián)合AFP檢測肝細(xì)胞癌的敏感性明顯高于Glypican－3或AFP單項檢測的敏感性；在特異性方面，Glypican－3聯(lián)合AFP 明顯高于Glypican－3或AFP單項檢測。這一結(jié)果與Ozkan等［10］的研究結(jié)果一致，分析其原因可能是由于在診斷肝細(xì)胞癌中Glypican－3聯(lián)合AFP檢測兩者可以進(jìn)行互相補充，彌補Glypican－3或AFP單項檢測的局限性；同時還為肝癌患者篩選出了個體化的敏感腫瘤標(biāo)志物，并可以對其進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測，最終在判斷療效及提示復(fù)發(fā)等方面提供了重要的提示作用。

綜上所述，Glypican－3為一種新型的、敏感性和特異性均很好的肝癌的腫瘤標(biāo)志物，聯(lián)合AFP檢測可有效提高肝癌患者的診斷效率。Glypican－3聯(lián)合AFP 檢測在臨床工作肝癌的診斷中應(yīng)該大力推廣應(yīng)用。

［1］宋孟锜，楊永飛，王冬冬，等.磷脂酰肌醇蛋白聚糖－3和甲胎蛋白聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的診斷價值［J］.臨床肝膽病雜志，2011，27（4）：391－399.

［2］楊永飛.Glypican－3、AFP、CD133聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的價值［D］.華中科技大學(xué)，2010：299.

［3］Matsuda M，Asakawa M，Amemiya H，et al.Lens culinaris agglutinin－reactive fraction of AFP is a useful prognostic biomarker for survival after repeat hepatic resection for HCC［J］.J Gastroenterol Hepatol，2011，26（8）：731－738.

［4］馬慶慶，黃建廷，童華波，等.血清標(biāo)志Glypican－3對肝細(xì)胞癌診斷價值初步評價［J］.中華腫瘤預(yù)防雜志，2014，21（2）：127－130.

［5］王麗麗，王立群，高歌.原發(fā)性肝癌患者血清中Glypican－3檢測及與AFP 聯(lián)合試驗的診斷價值［J］.中國實驗診斷學(xué)，2011，15（6）：1055－1056.

［6］郭大偉，侯學(xué)忠，魏云濤，等.GPC3基因轉(zhuǎn)染的樹突狀細(xì)胞對人肝癌HepG2細(xì)胞殺傷作用的觀察［J］.中華腫瘤防治雜志，2009，16（12）：906－909.

［7］熊波.血清腫瘤標(biāo)記物GPC3對原發(fā)性肝癌診斷價值的系統(tǒng)評價［D］.重慶醫(yī)科大學(xué)，2012：30.

［8］江楓，肖明兵，倪潤洲，等.血清glypican3ELISA 檢測法的建立及初步應(yīng)用［J］.臨床檢驗雜志，2011，29（6）：244－246.

［9］Yao M，Yao DF，Bian YZ，et al.Oncofetal antigen glypican－3as a promising early diagnostic marker for hepatocellular carcinoma［J］.Hepatobiliary Pancreat Dis Int，2011，10（3）：289－294.

［10］Ozkan H，Erdal H，Kocak E，et al.Diagnostic and prognostic role of serum glypican 3in patients with hepatocellular carcinoma［J］.J Clin Lab Anal，2011，25（5）：350－353.