冠心病與巨細(xì)胞病毒活動性感染的相關(guān)性研究＊

李青峰，周銳峰，朱帆，鐘晶，畢雷，尚鵬程，簡玲，汪波，譚韜，曠喜

（1.成都市公共衛(wèi)生醫(yī)療中心 610066；2.四川新健康成生物股份有限公司，成都 611731；3.四川大學(xué)華西藥學(xué)院藥理學(xué)系，成都 610041）

動脈粥樣硬化是嚴(yán)重危害人類健康的常見病，其確切病因與發(fā)病機制尚未完全闡明。1985年Fabricant等用禽類皰疹病毒誘發(fā)火雞冠狀動脈粥樣硬化成功后，人們逐漸開始關(guān)注巨細(xì)胞病毒與冠心病的關(guān)系。近年來國內(nèi)外的研究提示，人類動脈粥樣硬化發(fā)生過程中巨細(xì)胞病毒感染可能起到重要作用，但相關(guān)機制有待進一步研究。作者擬采用人血清中巨細(xì)胞病毒免疫球蛋白M 抗體HCMV－IgM 作為人巨細(xì)胞病毒活動性感染的指標(biāo)，對冠心病患者、體檢健康人群和其他疾病患者進行比較，探討人巨細(xì)胞病毒活動性感染與冠心病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料2010年6月至2011年2月成都市第十人民醫(yī)院、成都市傳染病醫(yī)院心血管內(nèi)科住院和門診患者中確診為冠心病的患者61例（男36例，女25例）設(shè)為冠心病組，平均年齡（63.0±12.1）歲。冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)為典型臨床表現(xiàn)、心電圖及心肌酶譜變化或經(jīng)冠狀動脈造影證實冠狀動脈狹窄大于50%者，排除心肌病、肝腎功能異常、各種感染性疾病及免疫性疾病。另選同期體檢健康者44例（肝腎功能、血脂及心肌酶譜指標(biāo)均正常）設(shè)為健康對照組，其中男22例，女22例；平均年齡（58.0±11.0）歲。選擇除心血管疾病和糖尿病外的其他疾病患者48例（血糖、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶及乳酸脫氫酶指標(biāo)均正常）設(shè)為其他疾病對照組，其中男30例，女18例；平均年齡（60.0±14.0）歲。各組間身高、體質(zhì)量、性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 標(biāo)本采集抽取患者清晨空腹靜脈血3mL，其中急性心肌梗死患者在發(fā)病時立即抽血，心絞痛患者在胸痛發(fā)作期抽血。血液標(biāo)本2000r／min，離心15min，然后分離血清樣本置－80℃保存，當(dāng)天和以后每15天均檢測一批巨細(xì)胞病毒抗體。標(biāo)本要求非溶血、非脂血、非污染和非黃疸。

1.3 HCMV－IgM 的檢測方法采用捕獲酶聯(lián)免疫吸附法檢測人血清中HCMV－IgM（試劑盒由德國維潤賽潤研發(fā)有限公司生產(chǎn)），嚴(yán)格按試劑盒說明書操作，加入類風(fēng)濕因子吸附劑去除類風(fēng)濕因子的干擾，酶標(biāo)儀判斷結(jié)果。結(jié)果判斷：HCMVIgM 做定性分析，取陽性對照平均吸光度（A）值后，從評估表（廠家提供）中找到陽性對照值所屬區(qū)間，從而得到陽性指標(biāo)和陰性指標(biāo)A值的判斷范圍；小于陰性指標(biāo)A值為陰性，大于陽性指標(biāo)A值為陽性；在大于陰性小于陽性指標(biāo)A值范圍區(qū)間內(nèi)，除灰色區(qū)域內(nèi)數(shù)值以外，其余區(qū)間內(nèi)的A值均視為陰性；如檢測血清A值落在灰色區(qū)間內(nèi)，視為疑惑或不確定值，需要重新檢測。

1.4 人員要求實驗人員均為經(jīng)過崗前培訓(xùn)且具有上崗證的專業(yè)技術(shù)人員。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析；計數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；以α＝0.05為檢驗水準(zhǔn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

對人巨細(xì)胞病毒檢測陽性率進行比較，HCMV－IgM 陽性率結(jié)果顯示，冠心病組的HCMV－IgM 陽性率為8.20%，與健康對照組的陽性率（2.27%）以及其他疾病對照組的陽性率（4.17%）進行比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 冠心病組和對照組HCMV－IgM 檢測結(jié)果

3 討論

冠心病的危險因子包括了高血糖、高血脂、高血壓、遺傳因素、年齡及性別等［1］；但是目前這些傳統(tǒng)的危險因子只能解釋50%～70%左右的冠心病發(fā)病原因，其病因以及發(fā)病機制尚未完全明了［2］。近年來研究發(fā)現(xiàn)，病毒感染與動脈粥樣硬化的發(fā)生關(guān)系密切，尤其是人巨細(xì)胞病毒感染越來越受到人們的重視。從Fabricant等在火雞體內(nèi)用禽類皰疹病毒誘發(fā)動脈粥樣硬化模型成功以來，國內(nèi)外學(xué)者針對巨細(xì)胞病毒感染與動脈粥樣硬化的關(guān)系進行了大量研究。

人巨細(xì)胞病毒在成人及幼兒感染十分常見，多呈慢性持續(xù)性及潛在感染狀態(tài)。大多數(shù)個體免疫功能不能徹底消滅病毒，病毒通過單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞播散到全身，循環(huán)系統(tǒng)是其主要入侵對象，造成平滑肌細(xì)胞和血液細(xì)胞感染，過度勞累和免疫低下都能使?jié)撛诘母腥緩?fù)發(fā)［3］。目前，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為巨細(xì)胞病毒與動脈粥樣硬化有著密切的關(guān)系。Melnick 等［4］利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)檢測了135例動脈粥樣硬化患者的動脈活檢組織中的人巨細(xì)胞病毒，陽性率為76%。陳躍峰等［5］采用PCR 檢測了56例冠心病患者外周血人巨細(xì)胞病毒，結(jié)果發(fā)現(xiàn)冠心病組血人巨細(xì)胞病毒陽性率為58.93%，顯著高于對照組（28.57%）（P＜0.01）。Eryol等［6］對179例疑似冠心患者進行人巨細(xì)胞病毒免疫球蛋白G（HCMV－IgG）的檢測，僅6例無抗巨細(xì)胞病毒抗體，認(rèn)為高抗體水平（≥8U／mL）的HCMV－IgG 是冠心病的危險因子（P＝0.04）。Timoteo等［7］對急性冠狀動脈綜合征及穩(wěn)定型冠心病患者進行了HCMVIgG 檢測，結(jié)果急性冠狀動脈綜合征患者抗體陽性率為95%，而穩(wěn)定型冠心病患者為81%。這些研究都從某種程度上表明，巨細(xì)胞病毒的感染可能引發(fā)冠心病。但也有不少國內(nèi)外學(xué)者持反對觀點，邢美園等［2］通過meta分析方法來確定巨細(xì)胞病毒感染是否為冠心病的危險因素，共檢索國內(nèi)外相關(guān)文獻170篇，其中符合其納入標(biāo)準(zhǔn)的文獻33篇，均為已發(fā)表文獻，其結(jié)果為17篇文獻表明冠心病組的巨細(xì)胞病毒陽性率高于對照組，而其他16篇文獻則表明差異無統(tǒng)計學(xué)意義。雖然不少研究都表明巨細(xì)胞病毒感染與冠心病可能存在相關(guān)性，但基本都是從DNA 或者IgG 方向進行研究。血清HCMV－IgG 是人巨細(xì)胞病毒既往感染的標(biāo)志，而HCMV－IgM 是原發(fā)性或活動性感染的標(biāo)志，一般在病毒感染后3d特異免疫球蛋白M 即可開始上升，90d后消失，檢測免疫球蛋白M 對原發(fā)性或活動性感染所致冠心病較免疫球蛋白G 可能具有更為重要的意義［8］。然而，從巨細(xì)胞病毒原發(fā)性或活動性感染方向出發(fā)研究其與冠心病的相關(guān)性的文章較少，標(biāo)本數(shù)量也較少，并且缺乏前瞻性的研究。因此，本文從巨細(xì)胞病毒近期活動性感染的角度來研究冠心病的發(fā)生發(fā)展，對冠心病的臨床研究起一個補充的作用。

本研究設(shè)置了冠心病組，健康對照組及其他疾病對照組（除外心血管疾病和糖尿病），結(jié)果表明，冠心病組HCMV－Ig陽性率略高于其他兩個對照組，但是分別與其他兩個對照組比較HCMV－Ig陽性率，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），尚不能認(rèn)為巨細(xì)胞病毒原發(fā)性或活動性感染可引起冠心病，分析其原因可能有：（1）巨細(xì)胞病毒活動性感染確實未能引起冠心病。（2）所納入的冠心病患者在本院確診之前就已經(jīng)感染了巨細(xì)胞病毒，且由于感染時間長，體內(nèi)免疫球蛋白M 已經(jīng)消失或者效價很低，導(dǎo)致檢測結(jié)果陽性率很低［9］。（3）血清HCMV－IgG 是人巨細(xì)胞病毒既往感染的標(biāo)志，而HCMV－IgM 是原發(fā)性或活動性感染的標(biāo)志，一般人巨細(xì)胞病毒感染后3d特異免疫球蛋白M 即可開始上升，90d后消失。而在巨細(xì)胞病毒感染初期，可能不引起冠心病的相關(guān)癥狀或者病理改變，所以可能較難在冠心病患者血液中檢測到HCMV－IgM。（4）由于條件的限制，本研究的樣本量較小，且只單獨做了HCMV－IgM 的檢測。從實驗結(jié)果來看，雖然冠心病組與健康對照組及其他疾病對照組之間差異均沒有統(tǒng)計學(xué)意義，但是冠心病組的HCMV－IgM 陽性率仍略高于兩個對照組，如在條件允許的情況下，擴大樣本量，可能會得出有統(tǒng)計學(xué)意義的結(jié)果。此外，如結(jié)合免疫球蛋白M 及DNA 檢測，可進一步提高結(jié)果的說服力。

綜上所述，通過對人巨細(xì)胞病毒陽性率進行比較，本實驗尚不能認(rèn)為冠心病與巨細(xì)胞病毒活動性感染有關(guān)，需要進一步擴大樣本或采用結(jié)合其他檢測方法進行驗證。

［1］卓志娟，湯蘭桂.冠心病患者血清同型半胱氨酸和N 端前體腦鈉肽檢測及意義［J］.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8（18）：2199－2200.

［2］邢美園，沈毅，蘇開顏，等.巨細(xì)胞病毒感染與冠心病關(guān)系的匯總分析［J］.中華心血管病雜志，2004，32（4）：336－340.

［3］吳愛成.1535例育齡婦女巨細(xì)胞病毒IgG 和IgM 抗體檢測分析［J］.臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2011，10（13）：996－997.

［4］Melnick JL，Hu CZ，Burek J，et al.Cytomegalovirus DNA in arterial walls of patients with atherosclerosis［J］.J Med Virol，1994，42（2）：170－174.

［5］陳躍峰，蔡元元.冠心病患者巨細(xì)胞病毒檢測結(jié)果及臨床意義［J］.中國動脈硬化雜志，2000，8（2）：154－156.

［6］Eryol NK，Kilic H，Gul A，et al.Are the high levels of cytomegalovirus antibodies a determinant in the development of coronary artery disease［J］.Int Heart J，2005，46（2）：205－209.

［7］Timoteo A，F(xiàn)erreira J，Paixao P，et al.Serologic markers for cytomegalovirus in acute coronary syndromes［J］.Rev Port Cardiol，2003，22（5）：619－631.

［8］陳志剛，孫海燕，岳兵，等.人巨細(xì)胞病毒感染與冠心病的相關(guān)性研究［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2013，23（12）：2831－2833.

［9］韓衛(wèi)紅，李國良，王強，等.人巨細(xì)胞病毒感染與急性冠脈綜合征發(fā)生的關(guān)系［J］.山東醫(yī)藥，2010，50（33）：13－15.