埋線療法對(duì)衰老模型大鼠皮膚的抗氧化作用

周雙琳 張 聰 林 殷

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京，100029)

皮膚老化是機(jī)體衰老外在表現(xiàn)。自由基學(xué)說己被認(rèn)為人類衰老機(jī)制現(xiàn)代理論中具有代表性的學(xué)說之一，如何有效保護(hù)皮膚組織免受自由基攻擊，是延緩皮膚衰老的途徑之一。埋線療法是將可吸收性外科縫線(主要是指羊腸線)置入穴位內(nèi)，利用線對(duì)穴位產(chǎn)生的持續(xù)刺激作用以防治疾病[1]，近年來該療法在經(jīng)絡(luò)美容、面部除皺、抗皮膚老化等方面療效滿意[2－4]。有研究表明[5]針刺療法具有清除自由基，提高抗氧化酶的活性起到抗氧化的作用。作為一種長(zhǎng)效針灸的埋線療法是否同樣對(duì)皮膚組織具有抗氧化作用?相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究文獻(xiàn)少見報(bào)道，因此本課題以D－半乳糖致亞急性雌性衰老大鼠皮膚為研究對(duì)象，在背部皮下進(jìn)行埋線，檢測(cè)皮膚組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽過氧化物酶(GHS－Px)活力，觀察其對(duì)衰老大鼠皮膚的抗氧化作用效應(yīng)，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 隨機(jī)選取3月齡雌性Wistar大鼠30只，體重(220.6±18)g，由維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供(批號(hào):SCXK京2011－0010)，飼養(yǎng)于中國中醫(yī)科學(xué)院基礎(chǔ)理論研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室。

1.1.2 儀器設(shè)備 羊腸線(上海浦東金環(huán)醫(yī)療用品有限公司出品的00號(hào)鉻制醫(yī)用羊腸線);一次性使用埋線針(揚(yáng)州市邗江國祥醫(yī)療器械廠出品的9號(hào)埋線針);試劑:D－半乳糖(上海試劑二廠);SOD試劑盒、MDA試劑盒、GHS－Px試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.2 方法

1.2.1 衰老動(dòng)物模型的制備 采用D－半乳糖致亞急性衰老法，將D－半乳糖50 g溶于500 mL生理鹽水中，按注射劑量125 mg/(kg·d)(即每克體重0.01 mL)予大鼠腹腔內(nèi)注射，造模時(shí)間為100 d，每周稱重1次，依據(jù)末次稱重的大鼠體重克數(shù)調(diào)整給藥劑量，從而建立亞急性衰老大鼠模型。

1.2.2 埋線操作 使用眼科鑷夾持羊腸線從埋線針尖端推入，至針尖外無線體外露;左手拇食指繃緊或提捏起進(jìn)針皮膚，右手拇中指夾持埋線針針柄，食指輕壓針芯帽，針尖斜面朝上，迅速將針刺入穴位皮下，左手拇、食指緩緩?fù)苿?dòng)針芯，右手拇食中三指緩緩后退針管，待羊腸線完全植入后，立即出針，用干棉球壓迫針孔片刻。

1.2.3 分組及治療 空白對(duì)照組:大鼠10只，進(jìn)行捆綁操作，不注射，不埋線;衰老模型組:大鼠10只，按照衰老動(dòng)物模型的制備方法進(jìn)行操作;埋線治療組:大鼠10只，先在大鼠背部進(jìn)行皮下埋線一次，大鼠背部皮膚選取9點(diǎn)(分3行，行距為1 cm;每行3點(diǎn)，點(diǎn)距為1 cm)，分別埋入0.5 cm羊腸線。然后每天按照衰老動(dòng)物模型的制備方法進(jìn)行操作。100 d后在各組大鼠背部皮膚取材，檢測(cè)皮膚組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽過氧化物酶(GHS－Px)活力。

1.2.4 指標(biāo)檢測(cè) 第100 d脫椎處死大鼠，立即脫毛后取背部皮膚組織約2 cm×3 cm，生理鹽水漂洗后去除多余脂肪組織，制成10%的皮膚組織勻漿，做SOD活性、MDA含量、GHS－Px活力的測(cè)定。嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。數(shù)據(jù)均以(±s)表示，定量資料組間比較采用t檢驗(yàn)。

表1 各組大鼠皮膚SOD、MDA和GHS－Px活力的含量(±s)

表1 各組大鼠皮膚SOD、MDA和GHS－Px活力的含量(±s)

注:與空白對(duì)照組比較，＊＊P＜0.01，與衰老模型組比較，*P＜0.05。

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2 結(jié)果

1)與空白對(duì)照組相比，模型組SOD活性、GHSPx活力明顯低于空白組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，模型組MDA含量明顯高于空白組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，可認(rèn)為D－半乳糖致亞急性衰老動(dòng)物模型造模成功;埋線治療組皮膚組織中的SOD活性、GHS－Px活力及MDA含量無明顯改變(P＞0.05)。(見表1)

2)與模型組相比，埋線治療組SOD活性、GHSPx活力明顯升高，MDA含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(見表1)

3 討論

傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，女性皮膚衰老過程中，三陽經(jīng)氣虛衰是根本原因?！端貑枴ど瞎盘煺嬲摗?女子“五七，陽明脈衰，面始焦……;六七，三陽脈衰于上，面皆焦”。陽明胃經(jīng)為多氣多血之經(jīng)，陽明脈衰是氣血虛衰之兆。氣血不旺，不能上達(dá)于面，使皮膚失去濡養(yǎng)滋潤(rùn)，導(dǎo)致干枯、出現(xiàn)皺紋，呈現(xiàn)衰老的面貌。另一方面，機(jī)體氣血虛衰不能推動(dòng)血液運(yùn)行，導(dǎo)致血瘀痰濁內(nèi)停，血瘀痰濁停聚日久又成為新的致衰因素[6－7]。血瘀在皮膚衰老中會(huì)出現(xiàn)不同程度的老年斑、肌膚甲錯(cuò)。痰濁內(nèi)停在皮膚衰老方面主要表現(xiàn)為面色晦暗或面色光亮如油，皮膚油垢明顯，肌肉松軟如綿等痰凝肌腠、痰留皮膚的病變[8]。因而衰老是一個(gè)慢性、漸進(jìn)性過程，《靈樞·終始》:“久病者，邪氣深，刺此病者，深內(nèi)而久留之?！甭窬€療法通過將線體留置于經(jīng)穴內(nèi)，長(zhǎng)久疏通經(jīng)絡(luò)，起到平衡陰陽、激發(fā)氣血化生之功，因而該療法已被廣泛應(yīng)用于現(xiàn)代養(yǎng)生抗衰老領(lǐng)域。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)關(guān)于衰老自由基學(xué)說是目前國內(nèi)外普遍公認(rèn)的衰老理論。該學(xué)說認(rèn)為機(jī)體受內(nèi)、外源性刺激作用可產(chǎn)生大量自由基如活性氧(ROS)等[9]。自由基具有極強(qiáng)的氧化能力，可使生物膜中不飽和脂類發(fā)生過氧化，形成過氧化脂質(zhì)，經(jīng)分解后產(chǎn)過氧化物丙二醛(MDA)。丙二醛(MDA)與蛋白質(zhì)、肽類或脂類聚合交聯(lián)可形成老年色素或脂褐質(zhì)的積累。當(dāng)自由基過度堆積，攻擊皮膚組織細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，從而引起皮膚老化[10]。由于機(jī)體存在自由基的防御系統(tǒng)，超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－Px)是機(jī)體酶促防御系統(tǒng)的主要抗氧化酶，它們組成體內(nèi)的第一道抗氧化防線，早期生成的自由基都會(huì)被它們所還原，從而保證機(jī)體不會(huì)受到損害，防止衰老。當(dāng)機(jī)體的自由基超過了它們的清除能力時(shí)，它們的活性就會(huì)降低。因此抗氧化酶和過氧化產(chǎn)物的含量成為皮膚衰老與抗衰老研究的重要指標(biāo)。本研究通過檢測(cè)埋線后大鼠皮膚組織中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－Px)，以及過氧化物丙二醛(MDA)含量情況來觀察其對(duì)衰老大鼠皮膚的抗氧化作用效應(yīng).本研究采用D－半乳糖致衰的大鼠模型，通過連續(xù)注射D－半乳糖，影響細(xì)胞的滲透壓，使細(xì)胞腫脹，進(jìn)而使細(xì)胞功能障礙、代謝紊亂，最終導(dǎo)致機(jī)體衰老[9]。姜國良等[11]證實(shí)注射D－半乳糖可構(gòu)建的建立穩(wěn)定可靠的衰老大鼠模型，能在皮膚組織及其他多層面上反映出機(jī)體的衰老情況。本研究表1中顯示，模型組SOD活性、GHS－Px活力明顯低于空白組，MDA含量明顯高于空白組，說明D－半乳糖可使機(jī)體產(chǎn)生嚴(yán)重氧化應(yīng)激，導(dǎo)致急性衰老，可認(rèn)為D－半乳糖致衰老動(dòng)物模型造模成功。埋線治療組大鼠雖經(jīng)注射D－半乳糖，但組皮膚組織中的 SOD活性、GHS－Px活力及MDA含量與空白組相比無明顯改變;與模型組相比，埋線治療組SOD活性、GHS－Px活力明顯升高，MDA含量降低，說明皮膚局部埋線有明顯的抗氧化作用，通過提高抗氧化酶的活性提高清除自由基能力，降低皮膚組織內(nèi)自由基的堆積從而保護(hù)皮膚。這可能是埋線療法能有效抗皮膚老化的作用機(jī)制之一。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果證明，埋線療法對(duì)雌性衰老大鼠皮膚有明顯的抗氧化效應(yīng)，其抗皮膚老化作用機(jī)制可能與皮膚組織中SOD、MDA和GHS－Px活力的改變相關(guān)。

目前國內(nèi)外關(guān)于埋線療法抗皮膚老化的臨床及基礎(chǔ)研究較少，本研究?jī)H從局部探討了埋線后皮膚抗氧化方面的效應(yīng)機(jī)制，對(duì)于埋線療法整體的抗皮膚老化機(jī)制仍不明確，這將是我們下一步研究要關(guān)注的重點(diǎn)。

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