正交試驗優(yōu)化小兒止咳顆粒提取工藝研究*

廣東省深圳市中醫(yī)院 魏俊婷 何泰東 李曙光 張尚斌 (深圳518033)

小兒止咳顆粒是深圳市中醫(yī)院在研醫(yī)院制劑，處方由紫菀30 g，防風(fēng)、百部、款冬花、陳皮、茯苓、前胡、桔梗、枳殼各10 g，麥冬、百合各25 g組成，用于治療小兒呼吸道感染之發(fā)熱、咳嗽、流涕、頭痛等癥狀。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters Alliance e2695－2998 高效液相色譜儀(美國Waters 公司);Sartorius BP 211D型電子天平(十萬分之一，德國Sartorius 公司)，BINDER ED53 烘箱(德國BINDER 公司)。

1.2 試藥 紫菀等藥材(購自深圳市華輝藥業(yè)有限公司)，經(jīng)深圳市中醫(yī)院藥檢室檢驗，均符合藥典標準;水為超純水，甲醇為色譜純 (德國Merck 公司);其他試劑為分析純。紫菀酮對照品(批號110735－200501，中國藥品生物制品檢定所)。

2 方法與結(jié)果

2.1 紫菀酮的含量測定

2.1.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性實驗:ECOSIL C18 色譜柱(5 μm，250 mm×4.6 mm);流動相乙腈︰水=95︰5，流速1 mL/min;柱溫:40℃，進樣體積10 μL，檢測波長為200 nm。系統(tǒng)適應(yīng)性符合要求，理論塔板以紫菀酮峰計算不低于4 000。

2.1.2 對照品溶液的制備:取紫菀酮對照品0.01 006 g，精密稱定，置100 mL 容量瓶，加乙腈溶解并稀釋至刻度，即得對照品儲備液，精密取對照品儲備液5、2、1、1、1 mL 到10、10、10、25、50 mL，配制成 50.300、20.120、10.060、4.024、2.012 μg/mL 的系列對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備:取紫菀30 g，防風(fēng)、陳皮、前胡、桔梗、枳殼各10 g，精密稱定重量，按正交表回流提取，精密取相當于紫菀藥材1 g 的提取液，水浴蒸干，殘渣入甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至50 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，溶液經(jīng)0.45 μm 微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即為供試品溶液。

2.1.4 線性范圍考察:取紫菀酮對照品溶液，按上述色譜條件進樣，測定紫菀酮峰面積，以對照品濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，得回歸方程Y=22 505X+932.1，r=0.999 5，表明紫菀酮在2.012 μg/mL～50.300 μg/mL 呈良好線性關(guān)系。

2.1.5 含量測定:按“2.1.3”方制備供試品，按“2.1.1”色譜條件進樣，測定提取液中紫菀酮的含量。

2.2 干膏得率 取茯苓、百部、款冬花各10 g，麥冬、百合各25 g，精密稱定重量，按正交表提取，精密取相當于藥材10 g 的提取液，置干燥至恒重的蒸發(fā)皿，水浴濃縮至干，于105℃干燥至恒重，得干膏，精密稱重干膏重量。求干膏得率。干膏得率(%)=干膏重量(g)/藥材重量(g)×100%

2.3 醇提部分正交實驗

2.3.1 正交試驗及結(jié)果:以乙醇濃度、溶劑用量、提取次數(shù)、提取時間為因素進行正交實驗，每個因素設(shè)3 個水平，見表1。以紫菀酮含量為指標，選用L9(34)正交表，不考慮交互作用，進行試驗，試驗安排及結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表1 正交試驗因素水平表

表2 正交實驗及結(jié)果表

表3 醇提試驗方差分析表

2.3.2 數(shù)據(jù)分析:由表2可知，各因素對紫菀酮含量值影響:A (乙醇濃度)＞C (提取次數(shù))＞B (溶劑用量)＞D (提取時間)，各水平之間的趨勢:A3＞A2＞A1，B1＞B2＞B3，C3＞C2＞C1，D1＞D2＞D3。D 因素影響值最小，以D 因素為誤差項，進行方差分析，表3結(jié)果表明A 因素、C 因素不同水平對紫菀酮含量均有顯著性，A2(60%乙醇)、C2(提取3 次)為最佳水平，B 因素、D 因素為無顯著影響的因素，從節(jié)省時間和試劑方面考慮，選擇B3(6 倍溶劑)、D1(提取1 h)，確定A2C2B3D1為最佳組合，即加6 倍量60%乙醇，提取3 次，每次1 h。

2.4 水提部分正交實驗

2.4.1 正交試驗及結(jié)果:以溶劑量、提取次數(shù)、提取時間為因素進行正交實驗，每個因素設(shè)3 個水平，見表4。以干膏得率為指標，選用L9(34)正交表，不考慮交互作用，進行試驗，試驗安排及結(jié)果見表5，方差分析見表6。

2.4.2 數(shù)據(jù)分析:由表5可知，各因素對干膏得率值影響:B (提取次數(shù))＞A (溶劑用量)＞C (提取時間)，各水平之間的趨勢:B3＞B2＞B1，A1＞A2＞A3，C3＞C1＞C2。方差分析結(jié)果表明B 因素、A 因素不同水平對干膏得率值均有顯著性，B3(提取3 次)、A1(16 倍溶劑)為最佳水平，C 因素為無顯著影響的因素，從節(jié)省時間方面考慮，選擇C1(提取1 h)，確定B3A1C3為最佳組合，即加16 倍量水，提取3 次，每次1 h。

表4 正交試驗因素水平表

表5 正交實驗及結(jié)果表

表6 水提試驗方差分析表

2.5 驗證實驗 為驗證選擇的工藝的優(yōu)劣，取處方量藥材3 份，紫菀等按A2C2B3D1提取，即加6 倍量60% 乙醇，提取3 次，每次1 h。按“2.1.3”方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件，測定紫菀酮含量，茯苓等B3A1C3提取，即加16 倍量水，提取3 次，每次1 h，按“2.2”方法測得干膏得率，結(jié)果見表7。紫菀酮含量和出膏率均接近最大值，說明工藝合理穩(wěn)定。

表7 驗證結(jié)果表

3 討論與結(jié)論

紫菀是小兒止咳顆粒的君藥，具有潤肺下氣，消痰止咳功效，歸肺經(jīng)，用于痰多喘咳、新久咳嗽、勞嗽咳血。［1］紫菀酮是紫菀主要成分之一，［2］紫菀中紫菀酮的常規(guī)提取方法為乙醇提取法，也有文獻報道［3－4］采用超臨界CO2萃取提取法及微波輔助加壓溶劑提取法，具有較好的提取效果，但因設(shè)備昂貴，難以實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，故我們采用常規(guī)提取方法，即以乙醇為溶劑進行提取，并進行正交試驗優(yōu)化醇提工藝。其他藥材采用水為溶劑進行提取，以干膏得率為指標進行正交試驗。

本研究確定紫菀等藥的最佳提取工藝為:A2C2B3D1，即加6 倍量60%乙醇，提取3 次，每次1 h。茯苓等藥最佳提取工藝為:B3A1C3，即加16 倍量水，提取3 次，每次1 h。提取工藝經(jīng)驗證表明:結(jié)果準確可靠，工藝合理可行。本研究為小兒止咳顆粒的研制和生產(chǎn)提供了資料。

［1］中國藥典委員會.中國藥典(一部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.322

［2］盧艷花，戴岳，王崢濤，等.紫菀祛痰鎮(zhèn)咳作用及其有效部位和有效成分［J］.中草藥，1999，30 (5):360－362

［3］莫尚志，黃星，王崢濤，等.超臨界CO2 萃取紫菀中紫菀酮的工藝研究［J］.中藥材，2004，27 (9):676－679

［4］程存歸，成則豐，劉幸海.紫菀中紫菀酮的微波輔助加壓溶劑提取研究［J］.中國藥學(xué)雜志，2006，41 (7):502－505