UPLC-MS/MS法與分光光度法測定乳及乳制品中左旋肉堿的比較*

單藝，王象欣，趙秋蓮，陳美君，梁杰，姜毓君

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省乳品工業(yè)技術(shù)開發(fā)中心，黑龍江哈爾濱，150028)

肉堿(L-carnitine)是一種人體中天然存在的類維生素營養(yǎng)物質(zhì)。其主要功能是轉(zhuǎn)運(yùn)脂肪進(jìn)入線粒體，促進(jìn)脂肪酸燃燒，為機(jī)體提供能量［1－2］。肉堿有 L型、D型和DL型3種光學(xué)旋光體，其中只有L-肉堿具有生理活性，D-肉堿為合成物質(zhì)，不存在于生物系統(tǒng)中，而D-肉堿和DL-肉堿則會競爭性地抑制肉堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)和肉堿脂肪酰轉(zhuǎn)移酶(PTC)的活性，阻礙細(xì)胞的脂肪代謝。因此國內(nèi)外只允許左旋肉堿(L-carnitine)作為食用肉堿添加到食物中。正常機(jī)體的L-肉堿來源有2種:一種通過肝臟和腎臟進(jìn)行內(nèi)源性合成，二是從膳食主要是動物性食品中攝?。?］。L-肉堿缺乏將干擾脂肪酸的代謝而導(dǎo)致能量合成不足，出現(xiàn)易疲勞，肌肉無力，心慌等癥狀，嚴(yán)重者會出現(xiàn)代謝紊亂，昏迷甚至死亡。隨著人們對L-肉堿營養(yǎng)價值的關(guān)注及認(rèn)可，它已經(jīng)被越來越多的用于減肥食品，嬰幼兒食品，飲料，營養(yǎng)補(bǔ)充劑，臨床等方面［4］。因?yàn)閶胗變翰荒芡ㄟ^其不成熟的合成系統(tǒng)合成L-肉堿，所以L-肉堿對嬰幼兒來說是一種重要的營養(yǎng)物質(zhì)［5］。國家標(biāo)準(zhǔn) GB 10765－2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)嬰兒配方食品》規(guī)定，L-肉堿為可選擇性加入成分，規(guī)定最小添加量為0.3 mg/100kJ。

嬰兒配方食品中的L-肉堿含量測定尚沒有國標(biāo)方法，文獻(xiàn)報道有高效液相色譜法［6－8］、離子色譜法［9－10］、質(zhì)譜法［11－12］、酶顯色法［13－15］等。由于肉堿的極性大、沒有生色團(tuán)等特點(diǎn)，一般的檢測手段都需借助于衍生反應(yīng)，這樣就使分析方法變得復(fù)雜，而且檢出限較高，并且不適合具有復(fù)雜基質(zhì)的食品中肉堿的分析。

本文針對乳制品這一復(fù)雜基質(zhì)，開發(fā)了超高壓液相色譜─質(zhì)譜聯(lián)用法與分光光度法，在已有的標(biāo)準(zhǔn)與文獻(xiàn)基礎(chǔ)上，優(yōu)化了提取方法，并對2種方法進(jìn)行了比較。結(jié)果表明2種方法檢測數(shù)據(jù)差異不顯著，但超高壓液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法前處理簡單、分析速度快、靈敏度高，適用于實(shí)驗(yàn)室常規(guī)大批量的集中檢測。

1 儀器與試劑

1.1 儀器與設(shè)備

美國Waters ACQUITY超高壓液相色譜儀;Waters Xevo TQ質(zhì)譜儀;Waters MassLynxTM色譜工作站;QGC-12T干熱式氮吹儀(上海泉島科貿(mào)有限公司);BS210S型電子天平(北京賽多利斯天平有限公司);超純水儀(美國 MILLIPORE);固相萃取裝置(美國Mediwax);5430/5430R離心機(jī)(德國 Eppendorf);PB-10/C酸度計(賽多利斯);B-260恒溫水浴鍋(上海亞榮);T6新悅型可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);超聲波清洗器(上海安普科學(xué)儀器有限公司);磁力攪拌器(上海安普科學(xué)儀器有限公司)。

1.2 材料與試劑

HClO4，70%，Sigma-Aldrich;HCl，37%，Sigma-Aldrich;NaOH，98%，Sigma-Aldrich;KOH ，86%，Sigma-Aldrich;2-硝基苯甲酸(2-Nitrobenzoic acid，94%，Vetec);N-(2-羥乙基)哌嗪-N＇-(2-乙磺酸)(HEPES，99.5%，Sigma);乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2，99.0%，Sigma);乙酰輔酶 A三鋰鹽(acetyl-CoA，93%，Sigma);肉堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(EC:2.3.1.7，70 units/mg，Sigma);甲 醇 (MeOH，99%，Burdick＆Jackson);七氟丁酸(HFBA，99%，Sigma-Aldrich);L-肉堿內(nèi)鹽［(CH3)3N+CH2CH(OH)CH2COO－，USP標(biāo)準(zhǔn)品，F(xiàn)luka］;L-肉毒堿-(甲基-d3)鹽酸鹽(13CD3(CH3)2N+CH2CH(OH)CH2CO2H Cl－，99 atom%13C，98 atom%D，97%(CP)，Aldrich)。

1.3 試劑與標(biāo)樣的配制

1.3.1 HClO4溶液(13%)

13 mL高氯酸稀釋至100 mL。

1.3.2 NaOH溶液(10 mol/L)

稱取40 g NaOH用水溶解，冷卻后稀釋至100 mL。

1.3.3 KOH溶液(4.0 mol/L)

稱取22.4 g KOH用水溶解，冷卻后定容至100 mL。

1.3.4 顯色儲備液

分別稱取50 mg 2-硝基苯甲酸、5.96 gN-(2-羥乙基)哌嗪-N＇-(2-乙磺酸)、185 mg乙二胺四乙酸二鈉溶于30 mL去離子水中，用10 mol/L NaOH溶液調(diào)pH值至7.4～7.6，然后用水定容至50 mL。此液置于4℃冰箱中可保存3個月。

1.3.5 顯色工作液

吸取5.0 mL顯色儲備液用水定容至25 mL。

1.3.6 乙酰輔酶A(acetyl-CoA)溶液

稱取20.0 mg乙酰輔酶A溶于2.0 mL水中。臨用時配制。

1.3.7 乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶溶液

吸取100 μL乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶懸浮液，經(jīng)1 500 r/min離心10 min，棄去上層清液，沉淀用2 mL水溶解。臨用時配制。

1.3.8 KOH溶液(2.0 mol/L)

稱取56.1 g KOH用水溶解，冷卻后用水定容至500 mL。

1.3.9 HCl溶液(1.6 mol/L)

吸取67.5 mL HCl于500 mL容量瓶中，定容搖勻。

1.3.10 內(nèi)標(biāo)溶液的配制(30 μg/mL)

快速稱取(因其吸濕性)L-肉毒堿-(甲基-d3)鹽酸鹽7.5 mg于50 mL燒杯中，用去離子水轉(zhuǎn)移到250 mL容量瓶中，定容，搖勻。配制好的溶液于－20℃冰箱中可保存1年。

1.3.11 L-肉堿標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制(50 μg/mL)

準(zhǔn)確稱取0.075 g(精確至0.000 1 g)L-肉堿標(biāo)準(zhǔn)品于500 mL容量瓶中，用超純水溶解后定容。

1.3.12 L-肉堿標(biāo)準(zhǔn)中間液的配制(0.15 μg/mL)

取1 mLL-肉堿標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1.3.11)于1 000 mL容量瓶中，用超純水溶解后定容。

2 樣品測定方法

2.1 分光光度法分析步驟

2.1.1 試樣處理

(1)準(zhǔn)確稱取5 g(精確到0.000 1 g)混合均勻的固體樣品于燒杯中，用30 mL 40℃溫水溶解，轉(zhuǎn)入100 mL容量瓶中。(2)準(zhǔn)確稱取 30 g(精確到0.000 1 g)混合均勻的液體樣品100 mL容量瓶中。

將上述樣品加入10 mL 13%HClO4溶液，混合均勻后靜止20 min。用蒸餾水定容至刻度，混勻，用定量濾紙過濾。取濾液20 mL，用4 mol/L KOH溶液調(diào)pH值為12.5～13.0后，40℃水浴60 min。冷卻后用13%HClO4調(diào)pH值為7.0～7.5。將樣液轉(zhuǎn)入50 mL容量瓶中，用蒸餾水定容?；靹蚝笾糜?℃冰箱中12 h。將試樣處理液從冰箱中取出放置至室溫，取上清液用0.45 μm濾膜過濾后備用。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

吸取左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)工作液2.0 mL于1 cm比色皿中，加入0.8 mL顯色工作液(1.3.5)和100 μL乙酰輔酶A溶液(1.3.6)，蓋上比色皿蓋，混合均勻后放入分光光度計中，分光光度計的波長調(diào)為412 nm，反應(yīng)5 min后歸零。迅速加入100 μL乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶溶液(1.3.7)，混合均勻后放入分光光度計中，反應(yīng)10 min后記錄吸光值。以左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.2 UPLC-MS/MS法分析步驟

2.2.1 試樣處理

準(zhǔn)確稱取12 g(精確到0.000 1 g)混合均勻的樣品于150 mL三角瓶中，加入3 mL 2 mol/L的KOH溶液，再加入44 mL超純水，混勻。用封口膜封住瓶口并把其置于水浴鍋中于(50±2)℃條件下水浴30 min。取出后冷卻至室溫。再加入3 mL 1.6 mol/L的HCL溶液，然后用去離子水轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，定容，混勻。根據(jù)被測樣品中L-肉堿的大概含量，吸取15 mL上述處理液于500 mL容量瓶中(根據(jù)樣品中L-肉堿的含量可吸取上述處理溶液0.3～15 mL于500 mL容量瓶中，使其L-肉堿的濃度定容后在20－40 ng/mL之間)，加入250 μL的內(nèi)標(biāo)溶液(1.3.10)，用超純水定容至刻度。然后用0.22 μm PTFE膜過濾，上機(jī)。

2.2.2 儀器分析條件

色譜柱:WatersSymmetry C8柱(3.5 μm，2.1 mm×30 mm);

流動相:A，0.1%HFBA的水溶液，吸取0.5 mL HFBA于500 mL容量瓶中，用超純水定容，混勻;

B，0.1%HFBA的甲醇溶液，吸取0.5 mL HFBA于500 mL容量瓶中，用甲醇定容，混勻。

質(zhì)譜操作參數(shù)見表1;梯度洗脫條件詳見表2;L-肉堿質(zhì)譜檢測條件見表3。

表1 質(zhì)譜操作參數(shù)Table 1 UPLC-MS/MS operating conditions

表2 UPLC-MS/MS梯度洗脫條件Table 2 The lineargradientcondition of UPLC-MS/MS

2.3 試樣測定

取2.0 mL試樣處理液按2.2.2的步驟測定其吸光值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得試樣待測液的濃度。

表3 L-肉堿質(zhì)譜檢測條件Table 3 MS determine conditions ofL-Carnitine

3 結(jié)果與討論

3.1 酶的專一性

分光光度法是由Marquis等［16］于1964年首次建立的，經(jīng)進(jìn)一步完善成為現(xiàn)在的方法。該方法是以乙酰轉(zhuǎn)移酶為催化劑，生成乙酰-L-肉堿后再與顯色劑進(jìn)行反應(yīng)生成黃色物質(zhì)，以此定量。其反應(yīng)機(jī)理如下:

輔酶 A+5，5-二硫代雙-2-硝基苯甲酸→5-硫-2-硝基苯甲酸根(黃色)+CoA-S-NB+H+

L-肉堿有2種光學(xué)異構(gòu)體，即左旋肉堿(L-型)和右旋肉堿(D型)。但只有L-型具有生命活性，具有一定的生理功能。通過用左旋肉堿(L-carnitine)和右旋肉堿(D-carnitine)的標(biāo)準(zhǔn)品配制相同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，使用上述分光光度法測定其412nm處吸光值，結(jié)果顯示右旋肉堿本身無論濃度多少經(jīng)與酶反應(yīng)，紫外412nm處均沒有紫外吸收。通過實(shí)驗(yàn)證明，乙酰輔酶A和乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶具有高度專一性，只作用于左旋肉堿，對右旋肉堿有沒有作用。

3.2 前處理的選擇

采用分光光度法測定樣品，其樣品處理的研究開始主要針對游離態(tài)L-肉堿。根據(jù)有關(guān)資料，采用高氯酸沉淀蛋白質(zhì)后，濾液用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至中性進(jìn)行測定。此種方式處理的樣品測定的是游離態(tài)的L-肉堿。之后根據(jù)國外查找的資料，認(rèn)為L-肉堿在嬰幼兒配方乳粉中約有30%為結(jié)合態(tài)［17］，并且其生理作用與游離態(tài)等同，所以要改進(jìn)樣品處理。根據(jù)樣品的特點(diǎn)及L-肉堿的性質(zhì)，對樣品處理技術(shù)重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)后，確定樣品前處理方法為，用高氯酸沉淀蛋白質(zhì)后，吸取一定量的濾液用KOH皂化，使結(jié)合態(tài)L-肉堿變成游離態(tài)，然后再用HClO4調(diào)pH至中性，效果較好。

由于UPLC-MS/MS儀器的高靈敏度，必須使樣品稀釋500倍以上，使處理液中L-肉堿的含量在儀器的最佳線性范圍內(nèi)。稀釋還可以是樣品基質(zhì)潛在的干擾減小，使儀器的信噪比降低。同時，反相色譜和多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)的高選擇性使得樣品在進(jìn)樣前不需要通常的固相萃取凈化，這可以從樣品按照前述方法處理后在MRM色譜條件下只有單一峰(詳見圖1)得到驗(yàn)證。當(dāng)然為了測得肉堿的總量，需要皂化使樣品中天然的乙酰肉堿轉(zhuǎn)化為游離肉堿。

圖1 L-肉堿標(biāo)準(zhǔn)品的多反應(yīng)檢測色譜圖Fig.1 MRM chromatograms of L-carnitein standards

3.3 色譜條件的選擇

L-肉堿是一種小分子強(qiáng)極性化合物，所以用傳統(tǒng)的反相色譜柱很難得到滿意的分析結(jié)果。先前的研究都是通過衍生化反應(yīng)來減小L-肉堿的極性，使其帶有生色團(tuán)的同時更適合于在反相條件的保留。本實(shí)驗(yàn)不需衍生，在流動相中加入揮發(fā)性酸——七氟丁酸(HFBA)，通過HFBA與L-肉堿的離子對作用，L-肉堿上氮原子所帶的正電荷被掩蔽，從而減小了L-肉堿的極性。采用弱極性C8色譜柱，通過在流動相中加入0.1%HFBA，使L-肉堿與內(nèi)標(biāo)L-肉堿-d3均得到了很好的分離。

3.4 質(zhì)譜條件的選擇

L-肉堿標(biāo)準(zhǔn)品在MRM反相色譜條件下出峰時間為1.61(圖1)。2 min以后的柱后流出液建議切換到廢液管路，避免因離子源被污染而導(dǎo)致信號抑制、信噪比減小。內(nèi)標(biāo)化合物L(fēng)-carnitine-d3的出峰時間與L-肉堿相同(詳見圖2)。L-肉堿分子結(jié)構(gòu)中含有季胺堿性基團(tuán)，適合用電噴霧離子源，正離子檢測方式，L-肉堿和內(nèi)標(biāo)化合物L(fēng)-carnitine-d3的準(zhǔn)分子離子［M+H］+質(zhì)核比m/z分別為162和165。二級質(zhì)譜顯示信號最強(qiáng)烈的碎片離子質(zhì)核比m/z為60，85和103。機(jī)理為L-肉堿先發(fā)生C—N鍵的斷裂，產(chǎn)生質(zhì)核比m/z分別為60和103的2個離子碎片分別為+NH(CH3)3和+CH2—CH(OH)—CH2—COOH。碎片離子m/z 103再脫去一分子H2O，生成碎片離子m/z 85，其結(jié)構(gòu)為+CH2—CHCH—COOH。內(nèi)標(biāo)化合物L(fēng)-carnitine-d3與L-肉堿機(jī)理相同。最終由于m/z 85和103的信號最強(qiáng)烈的，分別作為定性離子和定量離子。樣品L-肉堿的信號值由于基質(zhì)影響被抑制大約20～30%，通過內(nèi)標(biāo)可以被校正。

圖2 L-肉堿-d3標(biāo)準(zhǔn)品的多反應(yīng)檢測色譜圖Fig.2 MRM chromatograms of L-carnitine-d3

3.5 方法驗(yàn)證

3.5.1 分光光度法的線性范圍和檢出限

準(zhǔn)確稱取0.020 g(精確至0.000 1 g)L-肉堿標(biāo)準(zhǔn)品，用水定容至250 mL容量瓶中。左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)工作液:分別吸取左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.5、1、2、3、5 mL于25 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勻。該方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線、回歸方程以及回歸方程相關(guān)系數(shù)見表4，由此可見在0～16.072 μg/mL內(nèi)符合比爾定律。根據(jù)GB/T5009.1－2003中A2.2吸光法和熒光法的計算方法，確認(rèn)該方法的檢出限為2.0 mg/100 g。

表4 分光光度法測定L-肉堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線及吸光值回歸方程與相關(guān)系數(shù)Table 4 The standard curve，regression equation，correlation coefficient of L-carnitinebyspectrophotometry

3.5.2 超高壓液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(UPLC-MS/MS)線性范圍和檢出限

分別吸取 L-肉堿標(biāo)準(zhǔn)中間液(1.3.12)0.25、0.5、1、2、4 mL 于10 mL 容量瓶中，再加入5 μL 的內(nèi)標(biāo)溶液(1.3.10)，用水定容至刻度，混勻。

使用Masslynx軟件中Targetlynx進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，UPLC-MS/MS法L-肉堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程以及回歸方程相關(guān)系數(shù)見表5，由此可見在0～60 ng/mL內(nèi)線性良好。進(jìn)空白樣，以基線3倍噪聲值在標(biāo)準(zhǔn)曲線查得結(jié)果計算，該方法的檢出限為2 ng/100 g。UPLC-MS/MS法的檢出限比分光光度法低100萬倍，線性范圍低260倍。

表5 UPLC-MS/MS法L-肉堿標(biāo)準(zhǔn)曲線及吸光值回歸方程與相關(guān)系數(shù)Table 5 The standard curve，regression equation，correlation coefficient of L-carnitinebyUPLC-MS/MS

3.5.3 分光光度法與UPLC-MS/MS法回收率和精密度的計算

在液態(tài)奶、奶粉基質(zhì)中添加L-肉堿濃度分別添加3種濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。采用2種方法分別進(jìn)行測定，對其回收率和精密度進(jìn)行比較。

2種方法樣品加標(biāo)回收率見表6。由此可見2種方法回收率很好。根據(jù)JJF 1059.1－2012《測量不確定度評定與表示》，精密度為在規(guī)定條件下，對同一或類似被測對象重復(fù)測量所得示值或測得值間的一致程度。按照試驗(yàn)方法，取一份樣品重復(fù)測定6次，所得結(jié)果，分光光度法的回收率在96.2%～104.7%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD在1.34%～3.69%。UPLC-MS/MS法的回收率在97.8%～109%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.77%～5.65%。

表6 兩種方法的回收率與精密度(n=6)Table 6 Recoveries and precisions of the two methods(n=6)

3.5.4 L-肉堿溶液穩(wěn)定性

L-肉堿溶液的長期穩(wěn)定性經(jīng)過研究已經(jīng)證明，在－20℃條件下保存1年沒有衰減。內(nèi)標(biāo)化合物L(fēng)-carnitine-d3的長期穩(wěn)定性沒有在本次試驗(yàn)中被證實(shí)。但是由于L-carnitine-d3與L-肉堿相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)，唯一的不同就是L-肉堿與L-carnitine-d3的惰性基團(tuán)+NH(CH3)3和13CD3(CH3)2N+的不同，因此可以推斷出L-肉堿與L-carnitine-d3在－20℃條件下有相同的穩(wěn)定性。樣品處理溶液的短期穩(wěn)定性見表7，由此可以得出結(jié)論樣品處理溶液在室溫放置兩天，其中的L-肉堿不會衰減。

表7 L-肉堿短期穩(wěn)定性的評估Table 7 Evaluation of short-term L-carnitine stability

3.6 分光光度法與UPLC-MS/MS法測定L-肉堿數(shù)據(jù)的對比

在市場上購買3種不同品牌的嬰幼兒配方奶粉，分別用分光光度法以及UPLC-MS/MS法測定樣品中L-肉堿的含量，3種品牌樣品，連續(xù)測定3 d，每天每個樣品做2個平行，結(jié)果見表8。

表8 分光光度法與UPLC-MS/MS法測定L-肉堿數(shù)據(jù)的對比Table 8 The comparison of UPLC-MS/MS

2種測定方法的相對誤差在0.2%～5.2%，可以分析出2種方法差異性不大。但UPLC-MS/MS法的測定結(jié)果略高于分光光度法，分析其原因或?yàn)榉止夤舛确ㄆ浜诵臑槊阜磻?yīng)和顯色反應(yīng)，眾所周知化學(xué)反應(yīng)的效率并非100%，但UPLC-MS/MS法不涉及到化學(xué)反應(yīng)，只是單純的色譜分離質(zhì)譜檢測，所以分光光度法的結(jié)果略低于UPLC-MS/MS法。

4 結(jié)論

本研究建立了2種測定乳及乳制品中左旋肉堿的方法，即分光光度法和UPLC-MS/MS法。分光光度法是間接測定L-肉堿的方法，UPLC-MS/MS法是直接測定L-肉堿的方法。2種方法的檢出限分別為2.0 mg/100 g，2 ng/100 g。UPLC-MS/MS 的檢出限低于分光光度法。分光光度法的回收率在96.2%～104.7%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD在1.34%～3.69%。UPLC-MS/MS法的回收率在97.8%～109%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.77%～5.65%。兩種方法的穩(wěn)定性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，均適用于乳及乳制品中L-肉堿的測定。

分光光度法是檢測L-肉堿的傳統(tǒng)方法，分光光度計價格便宜，便于普及，而且此法對L-肉堿有高度的專一性。但是其檢出限遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于UPLC-MS/MS法，而且，在酶反應(yīng)過程中，樣品制備復(fù)雜，操作時間長，可控性差，不適合大量樣品的快速檢測。

UPLC-MS/MS法測定乳及乳制品中L-肉堿，其樣品制備相對直接快速，儀器分析速度快，并且是直接測定L-肉堿的方法，可控性強(qiáng)，適用于大量樣品的快速檢測，但是儀器設(shè)備價格昂貴。此外，本研究對市售乳制品進(jìn)行檢測，比較了UPLC-MS/MS法和分光光度法的數(shù)據(jù)，得出兩者檢測數(shù)據(jù)差異不顯著。

隨著今后技術(shù)的發(fā)展，液質(zhì)聯(lián)用儀已經(jīng)不僅僅局限于痕量物質(zhì)的定性和定量分析，目前也應(yīng)用于常量物質(zhì)的測定中。此外，由于UPLC-MS/MS具有高效、快速、高通量等特點(diǎn)，更加適用于多種物質(zhì)的同時測定，大大提高檢測效率、降低檢測成本。

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