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    基于酶抑制原理的電噴霧質(zhì)譜法快速篩查蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留

    2014-11-19 09:18:34羅輝泰黃曉蘭吳惠勤張立郭寅龍
    分析化學 2014年11期
    關鍵詞:高通量蔬菜

    羅輝泰 黃曉蘭 吳惠勤 張立 郭寅龍 朱志鑫 黃芳 林曉珊

    摘要采用電噴霧質(zhì)譜(ESIMS),通過測定乙酰膽堿酯酶(Acetylcholinesterase, AChE)的抑制率,建立了蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥(Carbamate pesticides, CBPs)殘留的快速篩查方法。樣品經(jīng)QuEChERS方法簡單處理后,以硫代乙酰膽堿為底物,與AChE發(fā)生酶促反應,用ESIMS法測定底物轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物硫代膽堿的轉(zhuǎn)化率, 進而計算得到AChE的抑制率。本實驗優(yōu)化了酶促反應溫度、時間及濃度等條件,考察了10種常見CBPs農(nóng)藥濃度與AChE抑制率的關系,研究了實際蔬菜樣品存在的基質(zhì)效應,以不含農(nóng)藥的空白蔬菜樣品的酶抑制率的3倍確立了方法的檢出限。結(jié)果表明,方法檢出限可達到0.01~0.05 mg/kg,優(yōu)于現(xiàn)行的農(nóng)藥殘留快速篩查國家標準,完全滿足食品安全國家標準對食品中農(nóng)藥最大殘留限量的要求,且具有良好的抗基質(zhì)干擾能力,可有效避免假陽性結(jié)果的出現(xiàn),并通過了液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法的驗證。本方法簡便快速、靈敏可靠,適用于蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的快速、高通量篩查。關鍵詞酶抑制; 電噴霧質(zhì)譜; 蔬菜; 氨基甲酸酯類農(nóng)藥; 快速篩查; 高通量

    氨基甲酸酯類農(nóng)藥(CBPs)自問世以來,因其具有選擇性強、殺蟲譜廣等特點\[1\],被廣泛用于防治植物病蟲害,對提高農(nóng)作物產(chǎn)率,促進農(nóng)業(yè)經(jīng)濟發(fā)展起到非常重要的作用。但近年來,由于氨基甲酸酯類農(nóng)藥的長期使用、濫用或超量使用,導致蔬菜水果等植物源性食品中殘留農(nóng)藥超標嚴重,由此而造成的農(nóng)藥急慢性中毒事件時有發(fā)生。這類農(nóng)藥通過抑制體內(nèi)乙酰膽堿酯酶(AChE)的活性,使其不能分解乙酰膽堿(ACh)而導致組織中乙酰膽堿過量蓄積,引起人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀甚至導致死亡\[2\]。為了避免此類中毒事件的發(fā)生和實現(xiàn)農(nóng)產(chǎn)品中殘留農(nóng)藥的有效監(jiān)測,建立蔬菜水果中快速、靈敏的氨基甲酸酯類農(nóng)藥檢測方法顯得異常迫切。

    目前,已有許多分析方法用于氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的檢測,如生物傳感器[3]、液相色譜法\[4,5\]、氣相色譜法\[6\]、氣相色譜質(zhì)譜法\[7\]及液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法\[8~10\]等。由于大多數(shù)CBPs屬于難揮發(fā)化合物,氣相色譜法或氣相色譜質(zhì)譜法只能檢測少數(shù)幾種CBPs; 對于基質(zhì)復雜的樣品,液相色譜法的靈敏度和可靠性均難以達到要求; 而最適宜分析CBPs的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法,其分析時間也較長,且需要提供目標農(nóng)藥標準品做對照,無法實現(xiàn)快速高通量測試。

    氨基甲酸酯類農(nóng)藥的快速檢測方法是基于CBPs對AChE抑制的原理。AChE具有催化乙酰膽堿水解成膽堿的作用,過程如圖1所示,而一旦CBPs與其結(jié)合,將使其失去催化反應能力。因而,CBPs的殘留可以通過AChE活性被抑制的情況間接進行測定。目前,基于此原理測定農(nóng)殘的方法主要有速測卡法\[11\]、分光光度法\[12,13\]、pH法\[13\] 、酶生物傳感器法\[14\]。然而,前3種方法靈敏度過低,且極易受樣品基質(zhì)干擾而出現(xiàn)假陽性結(jié)果; 酶生物傳感器法雖然其靈敏度較高,但步驟多且繁瑣。與現(xiàn)有方法相比,質(zhì)譜儀因具有快速、準確、靈敏、抗基質(zhì)干擾能力強等多方面優(yōu)勢,已開始用于酶活測定。如Xu等\[15\]采用基質(zhì)輔助激光解析離子化傅立葉變換質(zhì)譜(MALDIFTMS),通過測定AChE底物及其產(chǎn)物的含量實現(xiàn)了酶活的測定,建立了基于此技術(shù)的有機磷農(nóng)藥篩查方法\[16~18\],這種方法具有快速、高通量、高靈敏度的優(yōu)勢,但由于MALDIFTMS儀器成本高昂,普及率低,方法難以推廣應用。另外,目前還未見基于此原理的質(zhì)譜法測定氨基甲酸酯類農(nóng)藥的報道。本實驗采用已較為普及的電噴霧質(zhì)譜(ESIMS),建立基于酶抑制原理的快速篩查蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的新方法,該法在滿足快速、靈敏、高通量要求的同時,大大降低了篩查成本,便于方法的推廣應用。迄今為止,采用ESIMS,通過測定AChE活性,快速篩查CBPs的方法尚未見報道。

    摘要采用電噴霧質(zhì)譜(ESIMS),通過測定乙酰膽堿酯酶(Acetylcholinesterase, AChE)的抑制率,建立了蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥(Carbamate pesticides, CBPs)殘留的快速篩查方法。樣品經(jīng)QuEChERS方法簡單處理后,以硫代乙酰膽堿為底物,與AChE發(fā)生酶促反應,用ESIMS法測定底物轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物硫代膽堿的轉(zhuǎn)化率, 進而計算得到AChE的抑制率。本實驗優(yōu)化了酶促反應溫度、時間及濃度等條件,考察了10種常見CBPs農(nóng)藥濃度與AChE抑制率的關系,研究了實際蔬菜樣品存在的基質(zhì)效應,以不含農(nóng)藥的空白蔬菜樣品的酶抑制率的3倍確立了方法的檢出限。結(jié)果表明,方法檢出限可達到0.01~0.05 mg/kg,優(yōu)于現(xiàn)行的農(nóng)藥殘留快速篩查國家標準,完全滿足食品安全國家標準對食品中農(nóng)藥最大殘留限量的要求,且具有良好的抗基質(zhì)干擾能力,可有效避免假陽性結(jié)果的出現(xiàn),并通過了液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法的驗證。本方法簡便快速、靈敏可靠,適用于蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的快速、高通量篩查。關鍵詞酶抑制; 電噴霧質(zhì)譜; 蔬菜; 氨基甲酸酯類農(nóng)藥; 快速篩查; 高通量

    氨基甲酸酯類農(nóng)藥(CBPs)自問世以來,因其具有選擇性強、殺蟲譜廣等特點\[1\],被廣泛用于防治植物病蟲害,對提高農(nóng)作物產(chǎn)率,促進農(nóng)業(yè)經(jīng)濟發(fā)展起到非常重要的作用。但近年來,由于氨基甲酸酯類農(nóng)藥的長期使用、濫用或超量使用,導致蔬菜水果等植物源性食品中殘留農(nóng)藥超標嚴重,由此而造成的農(nóng)藥急慢性中毒事件時有發(fā)生。這類農(nóng)藥通過抑制體內(nèi)乙酰膽堿酯酶(AChE)的活性,使其不能分解乙酰膽堿(ACh)而導致組織中乙酰膽堿過量蓄積,引起人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀甚至導致死亡\[2\]。為了避免此類中毒事件的發(fā)生和實現(xiàn)農(nóng)產(chǎn)品中殘留農(nóng)藥的有效監(jiān)測,建立蔬菜水果中快速、靈敏的氨基甲酸酯類農(nóng)藥檢測方法顯得異常迫切。

    目前,已有許多分析方法用于氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的檢測,如生物傳感器[3]、液相色譜法\[4,5\]、氣相色譜法\[6\]、氣相色譜質(zhì)譜法\[7\]及液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法\[8~10\]等。由于大多數(shù)CBPs屬于難揮發(fā)化合物,氣相色譜法或氣相色譜質(zhì)譜法只能檢測少數(shù)幾種CBPs; 對于基質(zhì)復雜的樣品,液相色譜法的靈敏度和可靠性均難以達到要求; 而最適宜分析CBPs的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法,其分析時間也較長,且需要提供目標農(nóng)藥標準品做對照,無法實現(xiàn)快速高通量測試。

    氨基甲酸酯類農(nóng)藥的快速檢測方法是基于CBPs對AChE抑制的原理。AChE具有催化乙酰膽堿水解成膽堿的作用,過程如圖1所示,而一旦CBPs與其結(jié)合,將使其失去催化反應能力。因而,CBPs的殘留可以通過AChE活性被抑制的情況間接進行測定。目前,基于此原理測定農(nóng)殘的方法主要有速測卡法\[11\]、分光光度法\[12,13\]、pH法\[13\] 、酶生物傳感器法\[14\]。然而,前3種方法靈敏度過低,且極易受樣品基質(zhì)干擾而出現(xiàn)假陽性結(jié)果; 酶生物傳感器法雖然其靈敏度較高,但步驟多且繁瑣。與現(xiàn)有方法相比,質(zhì)譜儀因具有快速、準確、靈敏、抗基質(zhì)干擾能力強等多方面優(yōu)勢,已開始用于酶活測定。如Xu等\[15\]采用基質(zhì)輔助激光解析離子化傅立葉變換質(zhì)譜(MALDIFTMS),通過測定AChE底物及其產(chǎn)物的含量實現(xiàn)了酶活的測定,建立了基于此技術(shù)的有機磷農(nóng)藥篩查方法\[16~18\],這種方法具有快速、高通量、高靈敏度的優(yōu)勢,但由于MALDIFTMS儀器成本高昂,普及率低,方法難以推廣應用。另外,目前還未見基于此原理的質(zhì)譜法測定氨基甲酸酯類農(nóng)藥的報道。本實驗采用已較為普及的電噴霧質(zhì)譜(ESIMS),建立基于酶抑制原理的快速篩查蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的新方法,該法在滿足快速、靈敏、高通量要求的同時,大大降低了篩查成本,便于方法的推廣應用。迄今為止,采用ESIMS,通過測定AChE活性,快速篩查CBPs的方法尚未見報道。

    摘要采用電噴霧質(zhì)譜(ESIMS),通過測定乙酰膽堿酯酶(Acetylcholinesterase, AChE)的抑制率,建立了蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥(Carbamate pesticides, CBPs)殘留的快速篩查方法。樣品經(jīng)QuEChERS方法簡單處理后,以硫代乙酰膽堿為底物,與AChE發(fā)生酶促反應,用ESIMS法測定底物轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物硫代膽堿的轉(zhuǎn)化率, 進而計算得到AChE的抑制率。本實驗優(yōu)化了酶促反應溫度、時間及濃度等條件,考察了10種常見CBPs農(nóng)藥濃度與AChE抑制率的關系,研究了實際蔬菜樣品存在的基質(zhì)效應,以不含農(nóng)藥的空白蔬菜樣品的酶抑制率的3倍確立了方法的檢出限。結(jié)果表明,方法檢出限可達到0.01~0.05 mg/kg,優(yōu)于現(xiàn)行的農(nóng)藥殘留快速篩查國家標準,完全滿足食品安全國家標準對食品中農(nóng)藥最大殘留限量的要求,且具有良好的抗基質(zhì)干擾能力,可有效避免假陽性結(jié)果的出現(xiàn),并通過了液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法的驗證。本方法簡便快速、靈敏可靠,適用于蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的快速、高通量篩查。關鍵詞酶抑制; 電噴霧質(zhì)譜; 蔬菜; 氨基甲酸酯類農(nóng)藥; 快速篩查; 高通量

    氨基甲酸酯類農(nóng)藥(CBPs)自問世以來,因其具有選擇性強、殺蟲譜廣等特點\[1\],被廣泛用于防治植物病蟲害,對提高農(nóng)作物產(chǎn)率,促進農(nóng)業(yè)經(jīng)濟發(fā)展起到非常重要的作用。但近年來,由于氨基甲酸酯類農(nóng)藥的長期使用、濫用或超量使用,導致蔬菜水果等植物源性食品中殘留農(nóng)藥超標嚴重,由此而造成的農(nóng)藥急慢性中毒事件時有發(fā)生。這類農(nóng)藥通過抑制體內(nèi)乙酰膽堿酯酶(AChE)的活性,使其不能分解乙酰膽堿(ACh)而導致組織中乙酰膽堿過量蓄積,引起人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀甚至導致死亡\[2\]。為了避免此類中毒事件的發(fā)生和實現(xiàn)農(nóng)產(chǎn)品中殘留農(nóng)藥的有效監(jiān)測,建立蔬菜水果中快速、靈敏的氨基甲酸酯類農(nóng)藥檢測方法顯得異常迫切。

    目前,已有許多分析方法用于氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的檢測,如生物傳感器[3]、液相色譜法\[4,5\]、氣相色譜法\[6\]、氣相色譜質(zhì)譜法\[7\]及液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法\[8~10\]等。由于大多數(shù)CBPs屬于難揮發(fā)化合物,氣相色譜法或氣相色譜質(zhì)譜法只能檢測少數(shù)幾種CBPs; 對于基質(zhì)復雜的樣品,液相色譜法的靈敏度和可靠性均難以達到要求; 而最適宜分析CBPs的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法,其分析時間也較長,且需要提供目標農(nóng)藥標準品做對照,無法實現(xiàn)快速高通量測試。

    氨基甲酸酯類農(nóng)藥的快速檢測方法是基于CBPs對AChE抑制的原理。AChE具有催化乙酰膽堿水解成膽堿的作用,過程如圖1所示,而一旦CBPs與其結(jié)合,將使其失去催化反應能力。因而,CBPs的殘留可以通過AChE活性被抑制的情況間接進行測定。目前,基于此原理測定農(nóng)殘的方法主要有速測卡法\[11\]、分光光度法\[12,13\]、pH法\[13\] 、酶生物傳感器法\[14\]。然而,前3種方法靈敏度過低,且極易受樣品基質(zhì)干擾而出現(xiàn)假陽性結(jié)果; 酶生物傳感器法雖然其靈敏度較高,但步驟多且繁瑣。與現(xiàn)有方法相比,質(zhì)譜儀因具有快速、準確、靈敏、抗基質(zhì)干擾能力強等多方面優(yōu)勢,已開始用于酶活測定。如Xu等\[15\]采用基質(zhì)輔助激光解析離子化傅立葉變換質(zhì)譜(MALDIFTMS),通過測定AChE底物及其產(chǎn)物的含量實現(xiàn)了酶活的測定,建立了基于此技術(shù)的有機磷農(nóng)藥篩查方法\[16~18\],這種方法具有快速、高通量、高靈敏度的優(yōu)勢,但由于MALDIFTMS儀器成本高昂,普及率低,方法難以推廣應用。另外,目前還未見基于此原理的質(zhì)譜法測定氨基甲酸酯類農(nóng)藥的報道。本實驗采用已較為普及的電噴霧質(zhì)譜(ESIMS),建立基于酶抑制原理的快速篩查蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的新方法,該法在滿足快速、靈敏、高通量要求的同時,大大降低了篩查成本,便于方法的推廣應用。迄今為止,采用ESIMS,通過測定AChE活性,快速篩查CBPs的方法尚未見報道。

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