紫杉醇與順鉑聯(lián)合化療治療宮頸癌的療效及與組織微血管和微淋巴管密度的關(guān)系

盧建軍，張林燕

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學附屬醫(yī)院 婦產(chǎn)科，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010050)

宮頸癌為女性生殖系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一，近年來，年輕患者的發(fā)病率逐年上升。隨著臨床上對宮頸細胞學篩查的普及和液基細胞學的應(yīng)用，癌前病變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)和宮頸癌得以早期發(fā)現(xiàn)和治療［1］。隨著病情發(fā)展，腫瘤細胞進一步向子宮旁組織轉(zhuǎn)移，主要轉(zhuǎn)移方式有淋巴轉(zhuǎn)移、血行轉(zhuǎn)移、直接浸潤。化療是治療宮頸癌的最主要手段，近年來，微血管、微淋巴管在宮頸癌早期發(fā)生中的作用研究為國內(nèi)外腫瘤學研究的熱點［2］。本研究旨在探討紫杉醇與順鉑聯(lián)合化療方案治療宮頸癌的療效及與組織微血管和微淋巴管密度的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年5月～2013年12月內(nèi)蒙古醫(yī)科大學附屬醫(yī)院收治的宮頸癌前病變及早期宮頸癌患者的組織標本55例，經(jīng)倫理委員會批準，患者年齡28～51歲，平均(39.5±4.1)歲。國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)分期:Ⅰb期5例，Ⅱa期15例，Ⅱb期5例，選取標本均有典型病灶且周圍有≥5 mm范圍的正常組織。

1.2 方法

1.2.1 化療方案:所有患者簽署知情同意書，均為術(shù)前患者，化療前給予地塞米松10mg，隨后給予紫杉醇135mg/m2，第1天注射，第1～3天注射順鉑25mg/m2聯(lián)合化療，均采用靜脈化療，間隔2～3周，共3個療程。

1.2.2 免疫組化:各石蠟標本連續(xù)切片，切片厚度為3μm。免疫組織化學染色法進行切片淋巴管內(nèi)皮細胞透明質(zhì)酸受體1(LYVE－1)、CD31染色，2者分別是淋巴管內(nèi)皮細胞、微血管內(nèi)皮細胞特異性分子標志物。免疫組織化學染色步驟:石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟→乙醇梯度脫水→蒸餾水漂洗→抗原修復→蒸餾水漂洗→3%的過氧化氫消除內(nèi)源性過氧化物酶活性→蒸餾水清洗→磷酸鹽緩沖液清洗→滴加I抗(1∶80的LYVE－1，1∶100的CD31)→溫箱孵育1 h→磷酸鹽緩沖液清洗→滴加II抗→溫箱孵育30 min→磷酸鹽緩沖液清洗→DAB顯色→蒸餾水沖洗→蘇木精復染→蒸餾水沖洗→酒精梯度脫水→二甲苯透明→中性樹膠封片→光鏡下觀察。每個病例在低倍視野下取3個陽性染色密集區(qū)域，高倍鏡下觀察計數(shù)，取平均數(shù)為該病例的微淋巴管密度(lymphatic vessel density，LVD)和微血管密度(microvascular density，MVD)。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行分析，2組均數(shù)比較用t檢驗，正態(tài)計量資料用“±s”表示，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌化療療效及與微血管和微淋巴管密度的關(guān)系55例中共有44例患者完全緩解，部分緩解8例，完全緩解率為94.54%。高微淋巴管密度組(≥6.0個)和高微血管密度組(≥20.0個)患者化療完全緩解率分別為90.65%和84.21%，明顯高于低微淋巴管密度組和低微血管密度，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，見表1)。

表1 宮頸癌化療療效與組織微血管密度和微淋巴管密度的關(guān)系Tab.1 The relationship between chemotherapy and LVD，MVD

2.2 宮頸癌組織微血管和微淋巴管陽性染色情況 宮頸癌病例中，淋巴管陽性染色，數(shù)量較多，形態(tài)多變，可見圓形、橢圓形及不規(guī)則擴張狀態(tài)(見圖1左);癌灶中可見棕黃色陽性染色的管腔結(jié)構(gòu)形態(tài)完整;癌灶內(nèi)微血管管腔細小，癌灶旁微血管管壁薄厚不一(見圖1右)。

圖1 宮頸癌組病灶周圍組織免疫組織化學染色(×400)Fig.1 The expression of LYVE－1 and CD31 in cervical cancer tissue detected by IHC(×400)

2.3 微淋巴管密度相關(guān)因素分析 微淋巴管密度與是否絕經(jīng)、組織學分級、FIGO分期密切相關(guān)，絕經(jīng)病例的病灶內(nèi)及病灶周圍正常組織的微淋巴管密度明顯高于未絕經(jīng)病例(P＜0.01);組織學分級及FIGO分期越高的病例，其病灶周圍正常組織的微淋巴管密度越高(P＜0.01，見表2)。

表2 各組微淋巴管密度相關(guān)因素分析(個/高倍視野)Tab.2 Lymphatic density related factors analysis(per high power field)

2.4 微血管密度相關(guān)因素分析 微血管密度與是否絕經(jīng)、FIGO分期密切相關(guān)，絕經(jīng)病例的病灶內(nèi)及病灶周圍正常組織的微血管密度明顯高于未絕經(jīng)病例(P＜0.01);FIGO分期越高的病例，其病灶內(nèi)及病灶周圍正常組織的微血管密度越高(P＜0.05，見表3)。

表3 各組微血管密度相關(guān)因素分析(個/高倍視野)Tab.3 Capillaries density related factors analysis(per high power field)

3 討論

目前，宮頸癌的化療方案較多，且不良反應(yīng)大，大部分患者不能耐受，而不同患者對不同藥物的化療敏感性不同，部分患者對化療效果明顯，而部分對化療藥物耐受，化療療程結(jié)束后腫瘤大小沒有縮小，臨床緩解率沒有提高，究其原因，可能與腫瘤患者的個體性差異有關(guān)，而腫瘤的生物學行為將直接影響腫瘤的化療敏感性。紫杉醇和順鉑是最常用的腫瘤化療藥物，在女性卵巢癌中得到了廣泛應(yīng)用，其通過抑制腫瘤細胞的有絲分裂，促進腫瘤細胞壞死而達到化療效果，大量研究證實了2藥聯(lián)合的化療效應(yīng)，本研究結(jié)果也證實了紫杉醇和順鉑聯(lián)合化療后宮頸癌患者臨床有效率達94.54%;進一步通過免疫組化計算組織微血管密度和微淋巴管密度，統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，高微淋巴管密度組和高微血管密度組患者化療完全緩解率分別為90.65%和84.21%，明顯高于低微淋巴管密度組和低微血管密度，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，初步表明不同血管密度患者對化療藥物的敏感性不同。

近年來，有關(guān)微淋巴管在腫瘤早期發(fā)生發(fā)展中作用成為臨床和基礎(chǔ)研究的熱點，已有研究表明［3］，微淋巴管的數(shù)目與腫瘤的分期、病理分級密切相關(guān)。隨著近年來對淋巴管內(nèi)皮特異性標記的研究不斷深入，新生微淋巴管與腫瘤發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移之間的相互作用也成為臨床研究的熱點。大多數(shù)學者認為［4－5］，實體腫瘤內(nèi)無淋巴管存在，其僅在癌旁組織中發(fā)現(xiàn)。分析可能是迅速生長的癌細胞導致腫瘤內(nèi)壓力增加，即阻止了淋巴管的形成。微淋巴管常采用微淋巴管密度表示，臨床研究表明［6－8］，直腸癌、喉癌、食管鱗癌等腫瘤中，癌旁組織中的微淋巴管均有高水平表達的現(xiàn)象。淋巴管內(nèi)皮的特異性標記物較多，LYVE－1是其中最為常用的，也是表達最穩(wěn)定的標記物之一。LYVE－1是CD44糖蛋白的同系化合物，為淋巴管內(nèi)皮細胞透明質(zhì)酸受體。研究表明［9－10］，LYVE－1 是腫瘤新生微淋巴管的良好標記物。國外學者在黑色素瘤、乳腺癌的標本中均發(fā)現(xiàn)了LYVE－1的陽性表達，但關(guān)于其與宮頸癌的研究較少，有學者用癌胚抗原M2A單克隆抗體標記淋巴管內(nèi)皮，結(jié)果表明，宮頸癌中淋巴管密度與病理類型有一定關(guān)系［11］。可見，癌灶內(nèi)及癌灶周圍的淋巴管密度對宮頸癌的作用值得研究。1971年，腫瘤血管生成理論被提出，認為腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴腫瘤血管的生存［12－13］，已有研究證實［14］，宮頸CIN到浸潤癌的發(fā)生過程中均存在腫瘤血管的生成，微血管密度則是評估腫瘤血管生成的金標準。CD31為微血管良好的標記物，可作為宮頸癌無疾病進展生存率和總生存率一個獨立的預后指標［15］。目前，國內(nèi)外研究中并沒有對宮頸癌病灶周圍微淋巴管密度、微血管密度的范圍給出較為明確的定義，學者們僅做了病灶內(nèi)、病灶周圍的粗略劃分。本研究觀察了宮頸癌病灶及病灶周圍的微淋巴管密度及微血管密度。結(jié)果表明，絕經(jīng)病例的病灶內(nèi)及病灶周圍正常組織的微淋巴管密度明顯高于未絕經(jīng)病例;FIGO分期越高的病例，其病灶周圍正常組織的微淋巴管密度越高。宮頸癌病例的病灶內(nèi)微血管密度明顯多于微淋巴管密度，微血管密度與是否絕經(jīng)、FIGO分期密切相關(guān)，絕經(jīng)病例的病灶內(nèi)及病灶周圍正常組織的微血管密度明顯高于未絕經(jīng)病例;FIGO分期越高的病例，其病灶內(nèi)及病灶周圍正常組織的微血管密度越高。

綜上所述，紫杉醇與順鉑聯(lián)合化療方案治療宮頸癌的療效肯定，且與宮頸癌組織LVD和MVD關(guān)系密切，LVD和MVD可作為宮頸CIN和早期宮頸癌發(fā)展的預測指標之一。

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