豪豬致病性大腸桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)

張保平

摘要：從腹瀉病死仔豪豬的心血、肝臟、脾臟和腹瀉糞便中分離到2株細(xì)菌，染色鏡檢革蘭氏陰性，細(xì)菌在麥康凱培養(yǎng)基上呈紅色菌落。生化試驗(yàn)結(jié)果顯示分離到的2株細(xì)菌對葡萄糖、乳糖、麥芽糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不分解尿素，無硫化氫產(chǎn)生。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，分離到的2株細(xì)菌對頭孢噻吩、頭孢曲松、先鋒霉素、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、萬古霉素、復(fù)方新諾明等高度敏感。動物致病性試驗(yàn)結(jié)果表明，分離到的2株細(xì)菌對小鼠有強(qiáng)致病性。

關(guān)鍵詞：豪豬；大腸埃希菌；分離；鑒定

中圖分類號： S855.1+2文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2014）09-0189-02

1材料和方法

1.1材料

1.1.1藥品麥康凱培養(yǎng)基，購于北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司；普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，自制；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，購于北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司；細(xì)菌微量發(fā)酵管，杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)；藥敏紙片，北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)。

1.1.2試驗(yàn)動物20～22 g小白鼠：購自湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)小動物房。

1.1.3病料來源湖南常德市桃源縣堆金豪豬養(yǎng)殖基地發(fā)生仔豪豬黃痢的病死豪豬的心血、肝臟、脾臟和腹瀉糞便。

1.2方法

1.2.1細(xì)菌分離取病死仔豪豬的心血、肝、脾和糞便，分別接種于普通營養(yǎng)肉湯中，37 ℃培養(yǎng)24 h，取有細(xì)菌生長的普通營養(yǎng)肉湯接種于麥康凱瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察并記錄。

1.2.2細(xì)菌純培養(yǎng)將以上麥康凱培養(yǎng)基中的紅色菌落接種于普通營養(yǎng)肉湯中37 ℃培養(yǎng)24 h，再將肉湯接種于麥康凱瓊脂37 ℃培養(yǎng)24 h，進(jìn)行細(xì)菌純化。

1.2.3油鏡鏡檢取普通營養(yǎng)肉湯及麥康凱培養(yǎng)基中的細(xì)菌，涂片，革蘭氏染色鏡檢。

1.2.4生化試驗(yàn)按文獻(xiàn)[9]的方法進(jìn)行，取分離菌接種于細(xì)菌微量發(fā)酵管中，37 ℃培養(yǎng)，每隔24 h觀察1次，連續(xù)7 d，并做好記錄。

1.2.5動物試驗(yàn)用20只20～22 g健康正常的小白鼠，進(jìn)行致病性測定，將小鼠分為2組，實(shí)驗(yàn)組14只，對照組6只，實(shí)驗(yàn)組每只小白鼠腹腔注射分離菌肉湯培養(yǎng)物0.2 mL，對照組每只小白鼠腹腔注射滅菌肉湯培養(yǎng)物0.2 mL。飼養(yǎng)并觀察，同時對死亡小鼠剖檢，心血接種于普通營養(yǎng)肉湯中37 ℃培養(yǎng)24 h，染色鏡檢，觀察是否為接種菌。

1.2.6藥敏試驗(yàn)將分離菌株按Kirthybeuer建立的K-B紙片法[10]進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，依次將藥敏紙片均勻貼于瓊脂平板表面并做好標(biāo)記，37 ℃培養(yǎng)24 h，測量抑菌圈的直徑。

2結(jié)果與分析

2.1細(xì)菌的形態(tài)

該豪豬場病死仔豪豬的心血、肝、脾和糞便，接種于普通營養(yǎng)肉湯中，發(fā)現(xiàn)營養(yǎng)肉湯均勻渾濁，管底有沉淀；接種在麥康凱瓊脂平板上長出圓形、表面光滑、濕潤的紅色菌落。涂片染色鏡檢可見紅色、中等大小、短小的革蘭氏陰性桿菌。

2.2生化特性

從生化試驗(yàn)結(jié)果可以看出，分離的2株細(xì)菌都能發(fā)酵葡萄糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖和鼠李糖，并產(chǎn)酸產(chǎn)氣；均不產(chǎn)生硫化氫，不分解尿素，不利用枸櫞酸鹽；吲哚和甲基紅試驗(yàn)（MR）均為陽性，VP試驗(yàn)為陰性（表1），由此可判定分離的2株細(xì)菌為大腸埃希菌。

2.3動物試驗(yàn)結(jié)果

每只小白鼠腹腔注射分離菌肉湯的試驗(yàn)組小白鼠全部死亡，而每只小白鼠腹腔注射滅菌肉湯的對照組小白鼠存活。從死亡的小白鼠的心血中分離到接種菌。

2.4藥敏試驗(yàn)結(jié)果

2株分離菌對頭孢曲松等15種供試藥物存在不同的反應(yīng)性，其中分離菌對阿莫西林、吡哌酸、青霉素G、羧芐青霉素和環(huán)丙沙星等耐藥；分離菌對頭孢噻肟和諾氟沙星敏感性中等；高敏藥物分別為頭孢曲松、頭孢噻吩、鏈霉素、萬古霉素、卡那霉素、復(fù)方新諾明、先鋒霉素和慶大霉素（表2）。

表1豪豬致病細(xì)菌生化試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)名稱結(jié)果試驗(yàn)名稱結(jié)果葡萄糖+衛(wèi)茅醇-甘露糖+山梨醇+麥芽糖+VP試驗(yàn)-蔗糖+甘露醇+乳糖5+甲基紅（MR） 試驗(yàn)+鼠李糖+賴氨酸脫羧酶-棉籽糖-鳥氨酸脫羧酶-β-半乳糖苷-尿素-七葉苷吲哚試驗(yàn)+蛋白胨-H2S試驗(yàn)-枸櫞酸鹽-氨基酸對照-注：“+”表示陽性或有反應(yīng)，“-”表示陰性或無反應(yīng)。

3討論

從湖南常德地區(qū)病死仔豪豬中分離的細(xì)菌經(jīng)革蘭氏染色鏡檢，為兩端鈍圓的革蘭氏陰性短小桿菌；麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，長出圓形、凸起，光滑半透明的紅色菌落。生化試驗(yàn)結(jié)果顯示，對葡萄糖、乳糖、麥芽糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不分解尿素，無硫化氫產(chǎn)生，與大腸桿菌的生化特征[11]相符。接種小白鼠，小鼠全部死亡，由此證實(shí)從病死仔豪豬病料中分離到的2株細(xì)菌均是致病性大腸桿菌。另外由于試驗(yàn)設(shè)備欠缺，是否由病毒引起腹瀉未能進(jìn)行試驗(yàn)，但在仔豪豬腹瀉病的診斷、治療和防治過程中也不能忽視這些因素的影響。

經(jīng)調(diào)查，該豪豬場在仔豪豬發(fā)生腹瀉病時，曾使用了大量環(huán)丙沙星進(jìn)行治療，但效果不明顯。通過藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該菌已經(jīng)對環(huán)丙沙星、阿莫西林、吡哌酸、青霉素G、羧芐青霉素產(chǎn)生耐藥性，而頭孢曲松、頭孢噻吩、鏈霉素、萬古霉素、卡那霉素、復(fù)方新諾明、先鋒霉素和慶大霉素是高敏藥物，在治療時應(yīng)作為首選藥。因此在應(yīng)用抗生素藥物進(jìn)行治療時應(yīng)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，避免不必要的經(jīng)濟(jì)損失。

豪豬大腸桿菌病跟其他動物大腸桿菌病一樣，也是一種條件性疾病，本病最主要的防治措施是搞好豪豬舍環(huán)境衛(wèi)生，改善飼養(yǎng)管理?xiàng)l件，防止水源污染，搞好清潔衛(wèi)生和消毒工作。由于豪豬野性明顯，聽覺、嗅覺敏感，視覺發(fā)達(dá)，在飼養(yǎng)管理上，盡量保持環(huán)境安靜，由專人負(fù)責(zé)，減少對豪豬的應(yīng)激刺激有利于防止大腸桿菌病的發(fā)生。

參考文獻(xiàn)：

[1]張榮祖. 中國哺乳動物分布[M]. 北京：中國林業(yè)出版社，1997：172.

[2]王玉璽，張淑云. 中國獸類分布名錄（四）[J]. 野生動物，1993，14（5）：10-11.

[3]王酉之，胡錦矗. 四川獸類原色圖鑒[M]. 北京：中國林業(yè)出版社，1999：251.

[4]彭孟德，張曉梅. 特種藥用動物養(yǎng)殖與加工技術(shù)[M]. 長沙：湖南科學(xué)技術(shù)出版社，1994：65-68.

[5]常祖光. 藥用豪豬可大力養(yǎng)殖[J]. 農(nóng)村實(shí)用科技信息，2005（9）：40.

[6]鄭國英. 豪豬人工養(yǎng)殖技術(shù)[J]. 云南農(nóng)業(yè)，2005（3）：12.

[7]武深秋. 豪豬的養(yǎng)殖技術(shù)[J]. 當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè)，2004（7）：44.

[8]崔盛平. 豪豬的馴養(yǎng)特性[J]. 經(jīng)濟(jì)動物學(xué)報，2001，5（3）：59-61.

[9]方定一，侯從遠(yuǎn)，杜念興，等. 獸醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001.

[10]盛彤笙. 獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M]. 南京：畜牧獸醫(yī)圖書出版社，1957.

[11]陸承平. 獸醫(yī)微生物和免疫學(xué)[M]. 3版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001：215.李玉全. 鹽度對脊尾白蝦生長、攝食及餌料轉(zhuǎn)化率的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（9）：191-193.endprint

摘要：從腹瀉病死仔豪豬的心血、肝臟、脾臟和腹瀉糞便中分離到2株細(xì)菌，染色鏡檢革蘭氏陰性，細(xì)菌在麥康凱培養(yǎng)基上呈紅色菌落。生化試驗(yàn)結(jié)果顯示分離到的2株細(xì)菌對葡萄糖、乳糖、麥芽糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不分解尿素，無硫化氫產(chǎn)生。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，分離到的2株細(xì)菌對頭孢噻吩、頭孢曲松、先鋒霉素、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、萬古霉素、復(fù)方新諾明等高度敏感。動物致病性試驗(yàn)結(jié)果表明，分離到的2株細(xì)菌對小鼠有強(qiáng)致病性。

關(guān)鍵詞：豪豬；大腸埃希菌；分離；鑒定

中圖分類號： S855.1+2文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2014）09-0189-02

1材料和方法

1.1材料

1.1.1藥品麥康凱培養(yǎng)基，購于北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司；普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，自制；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，購于北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司；細(xì)菌微量發(fā)酵管，杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)；藥敏紙片，北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)。

1.1.2試驗(yàn)動物20～22 g小白鼠：購自湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)小動物房。

1.1.3病料來源湖南常德市桃源縣堆金豪豬養(yǎng)殖基地發(fā)生仔豪豬黃痢的病死豪豬的心血、肝臟、脾臟和腹瀉糞便。

1.2方法

1.2.1細(xì)菌分離取病死仔豪豬的心血、肝、脾和糞便，分別接種于普通營養(yǎng)肉湯中，37 ℃培養(yǎng)24 h，取有細(xì)菌生長的普通營養(yǎng)肉湯接種于麥康凱瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察并記錄。

1.2.2細(xì)菌純培養(yǎng)將以上麥康凱培養(yǎng)基中的紅色菌落接種于普通營養(yǎng)肉湯中37 ℃培養(yǎng)24 h，再將肉湯接種于麥康凱瓊脂37 ℃培養(yǎng)24 h，進(jìn)行細(xì)菌純化。

1.2.3油鏡鏡檢取普通營養(yǎng)肉湯及麥康凱培養(yǎng)基中的細(xì)菌，涂片，革蘭氏染色鏡檢。

1.2.4生化試驗(yàn)按文獻(xiàn)[9]的方法進(jìn)行，取分離菌接種于細(xì)菌微量發(fā)酵管中，37 ℃培養(yǎng)，每隔24 h觀察1次，連續(xù)7 d，并做好記錄。

1.2.5動物試驗(yàn)用20只20～22 g健康正常的小白鼠，進(jìn)行致病性測定，將小鼠分為2組，實(shí)驗(yàn)組14只，對照組6只，實(shí)驗(yàn)組每只小白鼠腹腔注射分離菌肉湯培養(yǎng)物0.2 mL，對照組每只小白鼠腹腔注射滅菌肉湯培養(yǎng)物0.2 mL。飼養(yǎng)并觀察，同時對死亡小鼠剖檢，心血接種于普通營養(yǎng)肉湯中37 ℃培養(yǎng)24 h，染色鏡檢，觀察是否為接種菌。

1.2.6藥敏試驗(yàn)將分離菌株按Kirthybeuer建立的K-B紙片法[10]進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，依次將藥敏紙片均勻貼于瓊脂平板表面并做好標(biāo)記，37 ℃培養(yǎng)24 h，測量抑菌圈的直徑。

2結(jié)果與分析

2.1細(xì)菌的形態(tài)

該豪豬場病死仔豪豬的心血、肝、脾和糞便，接種于普通營養(yǎng)肉湯中，發(fā)現(xiàn)營養(yǎng)肉湯均勻渾濁，管底有沉淀；接種在麥康凱瓊脂平板上長出圓形、表面光滑、濕潤的紅色菌落。涂片染色鏡檢可見紅色、中等大小、短小的革蘭氏陰性桿菌。

2.2生化特性

從生化試驗(yàn)結(jié)果可以看出，分離的2株細(xì)菌都能發(fā)酵葡萄糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖和鼠李糖，并產(chǎn)酸產(chǎn)氣；均不產(chǎn)生硫化氫，不分解尿素，不利用枸櫞酸鹽；吲哚和甲基紅試驗(yàn)（MR）均為陽性，VP試驗(yàn)為陰性（表1），由此可判定分離的2株細(xì)菌為大腸埃希菌。

2.3動物試驗(yàn)結(jié)果

每只小白鼠腹腔注射分離菌肉湯的試驗(yàn)組小白鼠全部死亡，而每只小白鼠腹腔注射滅菌肉湯的對照組小白鼠存活。從死亡的小白鼠的心血中分離到接種菌。

2.4藥敏試驗(yàn)結(jié)果

2株分離菌對頭孢曲松等15種供試藥物存在不同的反應(yīng)性，其中分離菌對阿莫西林、吡哌酸、青霉素G、羧芐青霉素和環(huán)丙沙星等耐藥；分離菌對頭孢噻肟和諾氟沙星敏感性中等；高敏藥物分別為頭孢曲松、頭孢噻吩、鏈霉素、萬古霉素、卡那霉素、復(fù)方新諾明、先鋒霉素和慶大霉素（表2）。

表1豪豬致病細(xì)菌生化試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)名稱結(jié)果試驗(yàn)名稱結(jié)果葡萄糖+衛(wèi)茅醇-甘露糖+山梨醇+麥芽糖+VP試驗(yàn)-蔗糖+甘露醇+乳糖5+甲基紅（MR） 試驗(yàn)+鼠李糖+賴氨酸脫羧酶-棉籽糖-鳥氨酸脫羧酶-β-半乳糖苷-尿素-七葉苷吲哚試驗(yàn)+蛋白胨-H2S試驗(yàn)-枸櫞酸鹽-氨基酸對照-注：“+”表示陽性或有反應(yīng)，“-”表示陰性或無反應(yīng)。

3討論

從湖南常德地區(qū)病死仔豪豬中分離的細(xì)菌經(jīng)革蘭氏染色鏡檢，為兩端鈍圓的革蘭氏陰性短小桿菌；麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，長出圓形、凸起，光滑半透明的紅色菌落。生化試驗(yàn)結(jié)果顯示，對葡萄糖、乳糖、麥芽糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不分解尿素，無硫化氫產(chǎn)生，與大腸桿菌的生化特征[11]相符。接種小白鼠，小鼠全部死亡，由此證實(shí)從病死仔豪豬病料中分離到的2株細(xì)菌均是致病性大腸桿菌。另外由于試驗(yàn)設(shè)備欠缺，是否由病毒引起腹瀉未能進(jìn)行試驗(yàn)，但在仔豪豬腹瀉病的診斷、治療和防治過程中也不能忽視這些因素的影響。

經(jīng)調(diào)查，該豪豬場在仔豪豬發(fā)生腹瀉病時，曾使用了大量環(huán)丙沙星進(jìn)行治療，但效果不明顯。通過藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該菌已經(jīng)對環(huán)丙沙星、阿莫西林、吡哌酸、青霉素G、羧芐青霉素產(chǎn)生耐藥性，而頭孢曲松、頭孢噻吩、鏈霉素、萬古霉素、卡那霉素、復(fù)方新諾明、先鋒霉素和慶大霉素是高敏藥物，在治療時應(yīng)作為首選藥。因此在應(yīng)用抗生素藥物進(jìn)行治療時應(yīng)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，避免不必要的經(jīng)濟(jì)損失。

豪豬大腸桿菌病跟其他動物大腸桿菌病一樣，也是一種條件性疾病，本病最主要的防治措施是搞好豪豬舍環(huán)境衛(wèi)生，改善飼養(yǎng)管理?xiàng)l件，防止水源污染，搞好清潔衛(wèi)生和消毒工作。由于豪豬野性明顯，聽覺、嗅覺敏感，視覺發(fā)達(dá)，在飼養(yǎng)管理上，盡量保持環(huán)境安靜，由專人負(fù)責(zé)，減少對豪豬的應(yīng)激刺激有利于防止大腸桿菌病的發(fā)生。

參考文獻(xiàn)：

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[2]王玉璽，張淑云. 中國獸類分布名錄（四）[J]. 野生動物，1993，14（5）：10-11.

[3]王酉之，胡錦矗. 四川獸類原色圖鑒[M]. 北京：中國林業(yè)出版社，1999：251.

[4]彭孟德，張曉梅. 特種藥用動物養(yǎng)殖與加工技術(shù)[M]. 長沙：湖南科學(xué)技術(shù)出版社，1994：65-68.

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[6]鄭國英. 豪豬人工養(yǎng)殖技術(shù)[J]. 云南農(nóng)業(yè)，2005（3）：12.

[7]武深秋. 豪豬的養(yǎng)殖技術(shù)[J]. 當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè)，2004（7）：44.

[8]崔盛平. 豪豬的馴養(yǎng)特性[J]. 經(jīng)濟(jì)動物學(xué)報，2001，5（3）：59-61.

[9]方定一，侯從遠(yuǎn)，杜念興，等. 獸醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001.

[10]盛彤笙. 獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M]. 南京：畜牧獸醫(yī)圖書出版社，1957.

[11]陸承平. 獸醫(yī)微生物和免疫學(xué)[M]. 3版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001：215.李玉全. 鹽度對脊尾白蝦生長、攝食及餌料轉(zhuǎn)化率的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（9）：191-193.endprint

摘要：從腹瀉病死仔豪豬的心血、肝臟、脾臟和腹瀉糞便中分離到2株細(xì)菌，染色鏡檢革蘭氏陰性，細(xì)菌在麥康凱培養(yǎng)基上呈紅色菌落。生化試驗(yàn)結(jié)果顯示分離到的2株細(xì)菌對葡萄糖、乳糖、麥芽糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不分解尿素，無硫化氫產(chǎn)生。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，分離到的2株細(xì)菌對頭孢噻吩、頭孢曲松、先鋒霉素、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、萬古霉素、復(fù)方新諾明等高度敏感。動物致病性試驗(yàn)結(jié)果表明，分離到的2株細(xì)菌對小鼠有強(qiáng)致病性。

關(guān)鍵詞：豪豬；大腸埃希菌；分離；鑒定

中圖分類號： S855.1+2文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2014）09-0189-02

1材料和方法

1.1材料

1.1.1藥品麥康凱培養(yǎng)基，購于北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司；普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，自制；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，購于北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司；細(xì)菌微量發(fā)酵管，杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)；藥敏紙片，北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)。

1.1.2試驗(yàn)動物20～22 g小白鼠：購自湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)小動物房。

1.1.3病料來源湖南常德市桃源縣堆金豪豬養(yǎng)殖基地發(fā)生仔豪豬黃痢的病死豪豬的心血、肝臟、脾臟和腹瀉糞便。

1.2方法

1.2.1細(xì)菌分離取病死仔豪豬的心血、肝、脾和糞便，分別接種于普通營養(yǎng)肉湯中，37 ℃培養(yǎng)24 h，取有細(xì)菌生長的普通營養(yǎng)肉湯接種于麥康凱瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察并記錄。

1.2.2細(xì)菌純培養(yǎng)將以上麥康凱培養(yǎng)基中的紅色菌落接種于普通營養(yǎng)肉湯中37 ℃培養(yǎng)24 h，再將肉湯接種于麥康凱瓊脂37 ℃培養(yǎng)24 h，進(jìn)行細(xì)菌純化。

1.2.3油鏡鏡檢取普通營養(yǎng)肉湯及麥康凱培養(yǎng)基中的細(xì)菌，涂片，革蘭氏染色鏡檢。

1.2.4生化試驗(yàn)按文獻(xiàn)[9]的方法進(jìn)行，取分離菌接種于細(xì)菌微量發(fā)酵管中，37 ℃培養(yǎng)，每隔24 h觀察1次，連續(xù)7 d，并做好記錄。

1.2.5動物試驗(yàn)用20只20～22 g健康正常的小白鼠，進(jìn)行致病性測定，將小鼠分為2組，實(shí)驗(yàn)組14只，對照組6只，實(shí)驗(yàn)組每只小白鼠腹腔注射分離菌肉湯培養(yǎng)物0.2 mL，對照組每只小白鼠腹腔注射滅菌肉湯培養(yǎng)物0.2 mL。飼養(yǎng)并觀察，同時對死亡小鼠剖檢，心血接種于普通營養(yǎng)肉湯中37 ℃培養(yǎng)24 h，染色鏡檢，觀察是否為接種菌。

1.2.6藥敏試驗(yàn)將分離菌株按Kirthybeuer建立的K-B紙片法[10]進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，依次將藥敏紙片均勻貼于瓊脂平板表面并做好標(biāo)記，37 ℃培養(yǎng)24 h，測量抑菌圈的直徑。

2結(jié)果與分析

2.1細(xì)菌的形態(tài)

該豪豬場病死仔豪豬的心血、肝、脾和糞便，接種于普通營養(yǎng)肉湯中，發(fā)現(xiàn)營養(yǎng)肉湯均勻渾濁，管底有沉淀；接種在麥康凱瓊脂平板上長出圓形、表面光滑、濕潤的紅色菌落。涂片染色鏡檢可見紅色、中等大小、短小的革蘭氏陰性桿菌。

2.2生化特性

從生化試驗(yàn)結(jié)果可以看出，分離的2株細(xì)菌都能發(fā)酵葡萄糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖和鼠李糖，并產(chǎn)酸產(chǎn)氣；均不產(chǎn)生硫化氫，不分解尿素，不利用枸櫞酸鹽；吲哚和甲基紅試驗(yàn)（MR）均為陽性，VP試驗(yàn)為陰性（表1），由此可判定分離的2株細(xì)菌為大腸埃希菌。

2.3動物試驗(yàn)結(jié)果

每只小白鼠腹腔注射分離菌肉湯的試驗(yàn)組小白鼠全部死亡，而每只小白鼠腹腔注射滅菌肉湯的對照組小白鼠存活。從死亡的小白鼠的心血中分離到接種菌。

2.4藥敏試驗(yàn)結(jié)果

2株分離菌對頭孢曲松等15種供試藥物存在不同的反應(yīng)性，其中分離菌對阿莫西林、吡哌酸、青霉素G、羧芐青霉素和環(huán)丙沙星等耐藥；分離菌對頭孢噻肟和諾氟沙星敏感性中等；高敏藥物分別為頭孢曲松、頭孢噻吩、鏈霉素、萬古霉素、卡那霉素、復(fù)方新諾明、先鋒霉素和慶大霉素（表2）。

表1豪豬致病細(xì)菌生化試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)名稱結(jié)果試驗(yàn)名稱結(jié)果葡萄糖+衛(wèi)茅醇-甘露糖+山梨醇+麥芽糖+VP試驗(yàn)-蔗糖+甘露醇+乳糖5+甲基紅（MR） 試驗(yàn)+鼠李糖+賴氨酸脫羧酶-棉籽糖-鳥氨酸脫羧酶-β-半乳糖苷-尿素-七葉苷吲哚試驗(yàn)+蛋白胨-H2S試驗(yàn)-枸櫞酸鹽-氨基酸對照-注：“+”表示陽性或有反應(yīng)，“-”表示陰性或無反應(yīng)。

3討論

從湖南常德地區(qū)病死仔豪豬中分離的細(xì)菌經(jīng)革蘭氏染色鏡檢，為兩端鈍圓的革蘭氏陰性短小桿菌；麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，長出圓形、凸起，光滑半透明的紅色菌落。生化試驗(yàn)結(jié)果顯示，對葡萄糖、乳糖、麥芽糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不分解尿素，無硫化氫產(chǎn)生，與大腸桿菌的生化特征[11]相符。接種小白鼠，小鼠全部死亡，由此證實(shí)從病死仔豪豬病料中分離到的2株細(xì)菌均是致病性大腸桿菌。另外由于試驗(yàn)設(shè)備欠缺，是否由病毒引起腹瀉未能進(jìn)行試驗(yàn)，但在仔豪豬腹瀉病的診斷、治療和防治過程中也不能忽視這些因素的影響。

經(jīng)調(diào)查，該豪豬場在仔豪豬發(fā)生腹瀉病時，曾使用了大量環(huán)丙沙星進(jìn)行治療，但效果不明顯。通過藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該菌已經(jīng)對環(huán)丙沙星、阿莫西林、吡哌酸、青霉素G、羧芐青霉素產(chǎn)生耐藥性，而頭孢曲松、頭孢噻吩、鏈霉素、萬古霉素、卡那霉素、復(fù)方新諾明、先鋒霉素和慶大霉素是高敏藥物，在治療時應(yīng)作為首選藥。因此在應(yīng)用抗生素藥物進(jìn)行治療時應(yīng)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，避免不必要的經(jīng)濟(jì)損失。

豪豬大腸桿菌病跟其他動物大腸桿菌病一樣，也是一種條件性疾病，本病最主要的防治措施是搞好豪豬舍環(huán)境衛(wèi)生，改善飼養(yǎng)管理?xiàng)l件，防止水源污染，搞好清潔衛(wèi)生和消毒工作。由于豪豬野性明顯，聽覺、嗅覺敏感，視覺發(fā)達(dá)，在飼養(yǎng)管理上，盡量保持環(huán)境安靜，由專人負(fù)責(zé)，減少對豪豬的應(yīng)激刺激有利于防止大腸桿菌病的發(fā)生。

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