補中益氣丸對膀胱出口梗阻大鼠膀胱逼尿肌的影響

梁良 劉麗芳 王喆 陳晶 楊欣 趙永芳

補中益氣丸源自金代李東垣《脾胃論》補中益氣湯，為方便臨床應(yīng)用，經(jīng)現(xiàn)代制劑工藝制備成丸劑。該方是補中益氣、升陽舉陷、甘溫除熱法的代表方?，F(xiàn)代藥理研究證明，補中益氣丸具有增加免疫機(jī)能、保護(hù)胃粘膜，以及調(diào)節(jié)體溫，改善心血管功能等多種作用。同時，補中益氣丸強(qiáng)健脾腎，在泌尿系統(tǒng)的應(yīng)用亦應(yīng)受到廣泛關(guān)注，但相關(guān)研究筆者所見較少［1］，尚未見補中益氣丸對膀胱出口梗阻作用的研究。本研究建立大鼠膀胱出口梗阻模型，并觀察補中益氣丸對膀胱逼尿肌收縮功能的影響，報告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、藥品與動物MedLab-U/4cs 生物信號采集處理系統(tǒng)，南京市美易科技有限公司;FA2004 型電子分析天平，上海良平儀器儀表有限公司。補中益氣丸、癃閉舒膠囊(市售);水合氯醛，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。SPF 級SD 大鼠，雄性，體重200 ～250 g，河北省實驗動物中心提供，許可證號:SCXK(冀)2008-1-003。

1.2 動物模型建立及標(biāo)本制備40 只大鼠水合氯醛(300 mg/kg，腹腔注射)麻醉，75%酒精消毒后，沿下腹部正中腹白線縱行切口，暴露膀胱，建立膀胱出口梗阻模型［2］。另取10 只大鼠，手術(shù)暴漏膀胱后即縫合，作為假手術(shù)組。術(shù)后大鼠肌內(nèi)注射硫酸慶大霉素注射液(20 mg/kg)，每天1 次，連續(xù)3 d。給藥4 周后，取出膀胱，制備1.5 mm×4 mm 的膀胱肌條標(biāo)本。標(biāo)本置于含10 ml K-H 液的浴槽中，施以1.0 g 前負(fù)荷。浴槽溫度(37±0.5)℃，標(biāo)本平衡1.0 h，期間每15 分鐘換一次營養(yǎng)液，持續(xù)通含有95%O2和5%CO2的混合氣體。改良K-H 液成分為(mmol/L):NaCl 133，KCl 4.7，NaH2PO41.35，NaHCO316.3，MgSO40.61，glucose 7.8，CaCl22.52，pH 值7.2。

1.3 實驗分組及給藥實驗分5 組，即假手術(shù)組、模型組、補中益氣丸大、中、小劑量組。根據(jù)藥品說明書，折合大鼠給藥量后，補中益氣丸設(shè)5.4 g/kg、1.8 g/kg和0.6 g/kg 3 個劑量組，按藥容積100 g 體重給予1 ml以蒸餾水稀釋配制藥液濃度。假手術(shù)組合模型組給予等容量的蒸餾水。5 組動物每天給藥1 次，連續(xù)4 周。每周稱量1 次體重，根據(jù)體重調(diào)節(jié)給藥劑量。

1.4 實驗設(shè)計標(biāo)本平衡1 h 后，建立第1 輪卡巴膽堿累積給藥量效曲線，給藥濃度0.01 ～100 μmol/L。為保證數(shù)據(jù)穩(wěn)定，第1 輪數(shù)據(jù)棄去。標(biāo)本平衡45 min后，期間每15 分鐘換一次營養(yǎng)液，建立第2 輪累積給藥量效曲線，觀察不同濃度下肌條反應(yīng)情況，記錄收縮反應(yīng)，并計算Emax 和EC50值。實驗結(jié)束后，將標(biāo)本用濾紙吸干，稱其濕重。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析膀胱體濕重以實測值(mg)表示;卡巴膽堿誘發(fā)的大鼠膀胱肌條的收縮反應(yīng)以mg 張力/mg 肌條濕重表示;所用數(shù)據(jù)均以實測值的±s 表示。EC50 值以計算值［log(E/(Emax－E)= logClogK(E，收縮反應(yīng);Emax，最大收縮反應(yīng);C，激動藥的濃度;K，解離常數(shù))］表示。采用GraphPad Prism 4.0軟件，組間比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA)，P ＜0.05 時，進(jìn)一步采用Dunnett-t 檢驗比較兩對應(yīng)劑量點間的藥物效應(yīng)。

2 結(jié)果

2.1 補中益氣丸對大鼠膀胱肌條濕重的影響梗阻模型組和補中益氣小劑量組大鼠膀胱肌條濕重明顯大于假手術(shù)組(P ＜0.05)，其他各組膀胱體濕重與假手術(shù)組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05)。見表1。

表1 補中益氣丸對大鼠膀胱肌條濕重影響 mg，±s

表1 補中益氣丸對大鼠膀胱肌條濕重影響 mg，±s

注:與假手術(shù)組比較，*P ＜0.05

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2.2 補中益氣丸對大鼠膀胱逼尿肌收縮功能的影響卡巴膽堿(0.01 ～100 μmol/L)可誘發(fā)假手術(shù)及膀胱出口梗阻各組大鼠離體膀胱肌條濃度依賴性收縮反應(yīng)。梗阻模型組膀胱肌條收縮反應(yīng)明顯弱于假手術(shù)組標(biāo)本收縮反應(yīng)(P ＜0.05 或＜0.01)，其量效曲線右移，Emax 值增小，EC50值變大，與梗阻模型組相比，補中益氣丸大劑量組、中劑量組標(biāo)本收縮反應(yīng)Emax 值增大，EC50值變小(P ＜0.05 或＜0.01);與梗阻模型組相比，補中益氣丸小劑量組Emax 值和EC50值差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05)。見表2、圖1。

表2 補中益氣丸對膀胱出口梗阻模型大鼠膀胱逼尿肌收縮反應(yīng)Emax 值和EC50值的影響 ±s

表2 補中益氣丸對膀胱出口梗阻模型大鼠膀胱逼尿肌收縮反應(yīng)Emax 值和EC50值的影響 ±s

注:與假手術(shù)組比較，*P ＜0.05，#P ＜0.01;與梗阻模型組比較，△P ＜0.05，☆P ＜0.01

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3 討論

膀胱出口梗阻會引起膀胱組織結(jié)構(gòu)和生理功能的異常改變，如膀胱肥厚，排尿壓升高及逼尿肌不穩(wěn)定等，從而導(dǎo)致下尿路的梗阻和刺激癥狀，若出口梗阻持續(xù)不能解除，將會引起膀胱組織結(jié)構(gòu)和生理功能發(fā)生異常改變，如膀胱肥厚、排尿壓升高、逼尿肌不穩(wěn)定及膀胱順應(yīng)性降低等［3］。本實驗成功地建立了大鼠膀胱出口梗阻模型，觀察了補中益氣丸對出口梗阻大鼠膀胱逼尿肌收縮反應(yīng)的影響。本結(jié)果顯示，梗阻模型大鼠膀胱肌條濕重明顯高于假手術(shù)組(P ＜0.05)，表明膀胱出口梗阻4 周后，膀胱體明顯增生。膀胱出口梗阻會導(dǎo)致尿道阻力增加，引起膀胱過度擴(kuò)張，BOO早期的代償期，膀胱功能可維持正常，逼尿肌收縮反應(yīng)亦增強(qiáng);如果梗阻癥狀持續(xù)不能解除，膀胱進(jìn)入失代償期，則會引起膀胱增生、順應(yīng)性下降，逼尿肌收縮反應(yīng)明顯降低［4］。

圖1 假手術(shù)及梗阻模型組大鼠離體膀胱肌條收縮反應(yīng)曲線

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，小便頻作是機(jī)體體質(zhì)虛弱、膀胱約束無能、腎氣不固其化不宣所致，同時由于脾肺二臟俱虛，膀胱氣化無力，進(jìn)而發(fā)生小便頻作［5］。補中益氣丸由人參、黃芪、白術(shù)、當(dāng)歸、升麻、柴胡、炙甘草八味草藥組成，其中黃芪為主藥具有補中益氣、升陽舉陷固表等作用［6］，能對機(jī)體的泌尿系統(tǒng)、免疫功能、消化系統(tǒng)功能具有較好的調(diào)節(jié)作用，進(jìn)而從整體上提高機(jī)體的非特異性免疫力。本文通過建立大鼠膀胱出口梗阻模型，證實了補中益氣丸可顯著提高梗阻膀胱的收縮反應(yīng)，提高順應(yīng)性，為補中益氣丸在下尿路方面的研究提供了實驗依據(jù)。

1 閆軍.補中益氣丸用分心木泡水送服治療前列腺術(shù)后小便頻作34例.包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2012，28:89-90.

2 Usta C，Kukul E，Yalcmkaya M.Doxazosin effects on cholinergic and adrenergic response in rat isolated detrusor smooth muscle preparations from obstructed bladder.J Pharmacol Sci，2004，95:305-310.

3 吳士良，肖云翔，段繼宏，等.膀胱出口部分梗阻后膀胱功能和組織學(xué)變化的相關(guān)性研究.中華泌尿外科雜志，2006，27:308-310.

4 Gosling JA，Kung LS，Dixon JS，et al.Correlation between the structure and function of the rabbit urinary bladder following partial outlet obstruction.J Urol，2000，163:1349-1356.

5 余望貽，卓暉，孟瓊.補中益氣丸脾腎相關(guān)性實驗研究.中國醫(yī)藥指南，2008，6:25-26.

6 黃國東，馬曉露，梁愛武.知柏地黃丸和補中益氣丸配合腎上腺皮質(zhì)激素治療原發(fā)性腎病綜合征臨床觀察.中國臨床醫(yī)生，2001，29:53-54.