高血壓患者頸動(dòng)脈粥樣硬化與其血清CD40／CD40L及MMP-9水平的關(guān)系＊

李建軍 馬清峰 張 靜 熊 亮，＃

高血壓是誘發(fā)心腦血管性疾病的主要危險(xiǎn)因素之一，高血壓時(shí)湍流和剪切應(yīng)力的增加可導(dǎo)致動(dòng)脈內(nèi)膜損傷，損傷部位易發(fā)生脂質(zhì)沉積和血小板聚集，從而發(fā)生粥樣硬化。頸動(dòng)脈粥樣硬化（CAS）最初被認(rèn)為是一種大中動(dòng)脈退行性、增生性、全身性疾病。之后研究發(fā)現(xiàn)，CAS是一種與免疫和炎癥反應(yīng)密切相關(guān)的慢性疾病。作為重要炎癥信號(hào)通路的白細(xì)胞分化抗原40（CD40）和154（CD154，又稱CD40L）這一對(duì)受體-配體的相互作用參與了CAS的發(fā)生和發(fā)展［1］；基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是CAS斑塊中炎癥細(xì)胞的產(chǎn)物，亦與CAS的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)［2］。本文通過對(duì)150例高血壓患者頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度（CIMT）、硬化斑塊指數(shù)（Plaque Index，PI）和 血 清 CD40、CD40L 和MMP-9水平的測(cè)定，分析高血壓患者CAS與CD40、CD40L及MMP-9水平變化的關(guān)系，為防治、延緩CAS提供新的治療靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 對(duì)象及分組

2012-01至2012-12本院門診和住院的150例原發(fā)性高血壓患者，其中男87例，女63例，平均年齡（63.40±5.70）歲，平均收縮壓（20.60±1.40）KPa，平均舒張壓（15.96±1.70）KPa。原發(fā)性高血壓診斷符合1999年WHO／ISH關(guān)于高血壓的診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］，并且排除繼發(fā)性高血壓、合并感染、血糖血脂異常及其它嚴(yán)重慢性病患者。CAS以2003年歐洲高血壓治療指南［4］中CIMT＞0.90mm為診斷標(biāo)準(zhǔn)，1.20mm＞CIMT≥0.90mm 為頸動(dòng)脈粥樣增厚，CIMT≥1.20mm為頸動(dòng)脈粥樣斑塊形成。150例高血壓患者分為CIMT正常組（n＝11）、CIMT增厚組（n＝30）和CIMT斑塊組（n＝109）。同時(shí)采用PI分級(jí)法［5］將150例高血壓患者分為PI 0級(jí)（CIMT＜1.2mm且無斑塊，n＝41）、PI 1級(jí)（CIMT介于1.2-2.0mm之間或僅有1個(gè)斑塊，n＝34）、PI 2級(jí)（CIMT介于2.1-4.0mm之間，有1個(gè)或數(shù)個(gè)斑塊，n＝62）和PI 3級(jí)（CIMT＞4.0mm，且有多個(gè)斑塊，n＝13）。50例健康體檢者為對(duì)照組，其中男34例、女16例，平均年齡（61.70±4.90）歲，血壓均在正常范圍內(nèi)（即收縮壓＜15.96KPa，舒張壓＜10.64KPa），未發(fā)現(xiàn)心腦血管疾病，血糖、血脂未見異常。各組患者與對(duì)照組性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 檢查方法

1.2.1 彩色多普勒超聲檢測(cè)CIMT和PI：采用日本東芝Aplio XG（SSA-790A）全數(shù)字化彩色多普勒超聲診斷儀，于初次就診時(shí)測(cè)量。患者取低枕仰臥位，充分暴露頸部，探頭頻率7.5MHz，取長軸切面，分別測(cè)量雙側(cè)頸總動(dòng)脈遠(yuǎn)端1.0cm處CIMT最大數(shù)值，取雙側(cè)平均值為CIMT的平均值。同時(shí)于彩色多普勒超聲下觀察斑塊數(shù)量，結(jié)合CIMT來進(jìn)行PI分級(jí)。

1.2.2 ELISA 測(cè)定血清 CD40、CD40L及 MMP-9水平：所有患者均在初次就診時(shí)抽取空腹肘靜脈血液，經(jīng)離心后分離血清，于-20℃冰箱保存，批量檢測(cè)。檢測(cè)前室溫解凍。CD40（貨號(hào)：EK0702）、CD40L（貨號(hào)：EK0573）和 MMP-9（貨號(hào)：EK0465）ELISA檢測(cè)試劑盒均購自武漢博士德生物有限公司。按照試劑盒操作說明書進(jìn)行操作，采用UQUANT全波長酶標(biāo)儀（美國Bio-Tek公司），檢測(cè)波長為450nm，校正波長為570nm，每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)復(fù)孔，所得OD值通過CurveExpert1.3軟件換算成樣品濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間均數(shù)比較采用方差分析，兩兩比較采用t檢驗(yàn)；兩指標(biāo)值的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)系數(shù)（r）法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同程度CIMT高血壓患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平及與CIMT的相關(guān)性分析

如表1所示，各CIMT組血清CD40、CD40L和MMP-9水平均顯著高于對(duì)照組，并且隨著CIMT程度的增加，患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平逐漸增高，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。相關(guān)性分析顯示，血清 CD40、CD40L和MMP-9水平與CIMT間均呈顯著正相關(guān)，r值分別為0.989，0.996和0.992（P 均＜0.05）。

表1 不同程度CIMT高血壓患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平（±s，ng／ml）

表1 不同程度CIMT高血壓患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平（±s，ng／ml）

注：與對(duì)照組比較，1）P＜0.01；與 CIMT正常組比較，2）P＜0.01；與 CIMT增厚組比較，3）P＜0.01

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2.2 不同PI分級(jí)高血壓患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平及與PI的相關(guān)性分析

如表2所示，隨著頸動(dòng)脈PI級(jí)別的增加，CD40、CD40L和MMP-9的濃度逐漸增高，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。相關(guān)性分析顯示，高血壓患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平與其PI分級(jí)呈顯著正相關(guān)，r值分別為0.983、0.991和0.985（P 均＜0.05）。

3 討 論

頸動(dòng)脈彩色多普勒超聲檢查是目前診斷CAS的首選方法，可清晰顯示血管CIMT、斑塊數(shù)量及大小等。PI與心腦血管疾病的發(fā)生密切相關(guān)，臨床將其作為衡量CAS程度的指標(biāo)。流行病學(xué)研究［6］表明，若無癥狀人群的CIMT＞1.00mm，冠心病發(fā)病率可明顯增高，是早期識(shí)別高危人群CAS的可靠指標(biāo)之一。PI作為評(píng)估頸動(dòng)脈粥樣斑塊形成的直接指征，能定量檢測(cè)CAS斑塊大小和數(shù)量［7］。

表2 不同PI分級(jí)患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平（±s，ng／ml）

表2 不同PI分級(jí)患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平（±s，ng／ml）

注：與PI 0級(jí)組比較，1）P＜0.01；與PI 1級(jí)組比較，2）P＜0.01；與 PI 2級(jí)組比較，3）P＜0.01

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CAS性狹窄是缺血性腦卒中的重要危險(xiǎn)因素，闡明CAS斑塊發(fā)生、發(fā)展及破裂機(jī)制對(duì)于尋求有效治療措施、預(yù)防缺血性腦血管病發(fā)生至關(guān)重要［8］。動(dòng)脈硬化炎癥假說認(rèn)為動(dòng)脈硬化是血管壁的慢性炎癥，其中有許多炎性介質(zhì)和炎性細(xì)胞參與了這一過程，而作為重要炎癥信號(hào)的CD40／CD40L也在其中。正常血管內(nèi)皮細(xì)胞低表達(dá)CD40，而CAS的內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞均高表達(dá)CD40和CD40L。本文結(jié)果證實(shí)，相對(duì)于CIMT正常組和PI0級(jí)組，CIMT增厚各組和PI 1-3級(jí)組患者CD40和CD40L水平明顯增高。CD40／CD40L主要是通過影響一些黏附因子、細(xì)胞因子、MMPs等介導(dǎo)CAS的發(fā)生和發(fā)展［9］，不僅參與粥樣斑塊的形成，同時(shí)也引起粥樣斑塊不穩(wěn)定或脫落而產(chǎn)生嚴(yán)重后果。已有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)［10］表明，通過降低 CD40／CD40L水平可降低CAS的發(fā)生和延緩CAS的進(jìn)展。

MMP-9是MMPs的重要成員，主要由成纖維細(xì)胞、炎性細(xì)胞、心肌細(xì)胞等合成與分泌。作為AS斑塊中炎性細(xì)胞產(chǎn)物，參與巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞侵入機(jī)體組織。本文結(jié)果顯示不同程度CIMT和PI分級(jí)高血壓患者血清MMP-9水平明顯高于對(duì)照組，且隨著CIMT增厚和PI分級(jí)增加而逐漸升高。增多的MMP能使粥樣斑塊的纖維帽萎縮和間質(zhì)膠原降解，導(dǎo)致粥樣斑塊不穩(wěn)定［11］。

綜上所述，CD40／CD40L和MMP-9在CAS高血壓患者中的變化趨勢(shì)相同，均與CAS的嚴(yán)重程度顯著正相關(guān)，表明它們共同參與了CAS的發(fā)生和發(fā)展；同時(shí)提示CD40／CD40L和 MMP-9可能作為CAS防治的靶點(diǎn)，通過降低其水平達(dá)到防治CAS的目的。

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